維A酸乳膏(0.025%)含量測定方法的探究

姜武民，黃 波

維A酸乳膏是常見的抗皮膚角化異常藥及細胞誘導(dǎo)分化藥［1］。主要成分是維A酸不穩(wěn)定，見光易分解［2］。而在用紫外法對0.025%規(guī)格進行含量測定的過程中，經(jīng)常會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確、不精確、數(shù)據(jù)易波動等問題。因此，本文用藥典收載的方法對0.025%規(guī)格的維A酸乳膏進行含量測定，并對具體方法條件進行探究。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器 島津LC-10AT高效液相色譜儀，島津UV-2401PC紫外分光光度計，梅特勒-托利多AB204-S電子分析天平，超聲儀。

1.2 實驗試劑 維A酸對照品(中國生物制品檢驗檢定所提供，批號:100307-200201)，維A酸乳膏(規(guī)格:25 g∶6.25 mg，批號:100701、100702、100705;規(guī)格:15 g∶3.75 mg，批號:100904。湖北恒安藥業(yè)有限公司生產(chǎn))、異丙醇(HPLC級)、甲醇(HPLC 級)、冰醋酸(分析純)、N，N-二甲基甲酰胺(分析純)、氯仿(分析純)，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法

2.1 紫外分光光度法(UV) 按國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0282)-2002中有關(guān)維A酸乳膏含量測定的規(guī)定避光操作。對照品溶液的制備:精密稱取在105℃干燥至恒重的維A酸對照品適量，加 N，N-二甲基甲酰胺-氯仿-異丙醇(1∶2∶2)溶解制成每1 mL中約含3.75 μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備:取維A酸乳膏適量(約相當(dāng)于維A酸0.375 mg)，精密稱定，置100 mL量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺20 mL振搖溶解后，加氯仿-異丙醇(1∶1)稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

測定法:取上述兩種溶液，照紫外分光光度法操作規(guī)程測定，在358 nm的波長處分別測定吸收度，計算，即得。平行操作6次，取均值。

2.2 高效液相色譜法(HPLC)

2.2.1 溶液的配制［3］對照品溶液的配制:避光操作，精密稱取維A酸對照品約10 mg置100 mL量瓶中，加異丙醇10 mL使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置200 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取80 μL進入高效液相色譜儀。

供試品溶液的配制:避光操作，分別精密稱取乳膏約1、2和4 g置100 mL容量瓶內(nèi)，加異丙醇10 mL，振搖，加入甲醇適量，超聲10 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別精密量取續(xù)濾液80、40、20 μL，進入高效液相色譜儀。各濃度平行進樣6次，結(jié)果取均值。

避光操作，精密稱取本品約1 g，置100 mL容量瓶中，加異丙醇10 mL，搖勻，加甲醇適量，分別超聲處理10、15和20 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液80 μL注入高效液相色譜儀。各濃度平行進樣6次，結(jié)果取均值。

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)性實驗 按照中國藥典2010年版二部規(guī)定的維A酸乳膏的含量測定標(biāo)準(zhǔn):用十八烷基鍵合硅膠做填充劑，以甲醇-2%冰醋酸溶液(81∶19)為流動相，檢測波長為350 nm。理論塔板數(shù)按維A酸峰計算不低于3 000，維A酸峰與異維A酸峰的分離度應(yīng)大于5.0。

3 結(jié)果與討論

3.1 UV法測定結(jié)果 按規(guī)定方法對4個批號的樣品進行了測定，結(jié)果見表1。

表1 UV法測定維A酸乳膏結(jié)果(±s，n=6)

表1 UV法測定維A酸乳膏結(jié)果(±s，n=6)

批號100701 100702 100705 100904百分含量(%)107.43±3.0 107.35±3.0 112.39±1.10 109.09±1.3

3.2 HPLC法測定結(jié)果 分別稱取乳膏約1、2和4 g，進樣量分別為 80、40和20 μL。結(jié)果見表2。

表2 不同稱樣量的HPLC法結(jié)果(批號:100904，±s，n=6)

表2 不同稱樣量的HPLC法結(jié)果(批號:100904，±s，n=6)

稱樣量(g)124進樣量(μL)80 40 20百分含量(%)108.36±0.01 108.01±0.02 102.85±0.10

從表2可以看出，隨著稱樣量增高，測得的百分含量降低，而且溶解過程中發(fā)現(xiàn)稱樣量為1 g的樣品溶解比較完全，稱樣量為2 g和4 g的樣品有部分樣品不能完全溶解，因此，選定稱樣量為1 g，進樣量為80 μL。精密稱取本品約1 g，依法處理后分別超聲10、15和20 min，進樣量為80 μL的實驗結(jié)果如表3所示。

表3 不同超聲時間的HPLC法結(jié)果(±s，n=6)

表3 不同超聲時間的HPLC法結(jié)果(±s，n=6)

超聲時間(min)100701 100702 100705 10 106.70±0.08 106.40±0.03 107.14±0.04 15 106.39±0.05 108.17±0.04 108.43±0.03 20 107.17±0.02 107.60±0.01 108.21±0.04

從表3可以看出，不同超聲時間與測得結(jié)果之間沒有規(guī)律變化，而且超聲時間長短對測定結(jié)果沒有太大的影響，因此，選定超聲時間為10 min。

綜上所述，本實驗探究的0.025%規(guī)格維A酸乳膏含量測定的HPLC方法:避光操作，精密稱取本品約1 g，置容量瓶中，加異丙醇10 mL，搖勻，加甲醇適量，超聲處理10 min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過。照維A酸含量測定項下色譜條件，精密量取續(xù)濾液80 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。精密稱定維A酸對照品約10 mg置100 mL量瓶中，加異丙醇10 mL使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，稀釋成每1 mL含2.5 μg的溶液，用甲醇定容至刻度，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算即得。

3.3 探究的HPLC法和國家標(biāo)準(zhǔn)方法測得結(jié)果對比 分別用兩種方法對4批0.025%規(guī)格的維A酸乳膏進行了含量測定，結(jié)果見表4。

表4 HPLC法和UV法測定維A酸乳膏結(jié)果(%，n=6)

從表4可見，0.025%規(guī)格的維A酸乳膏用國家標(biāo)準(zhǔn)UV法測得結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度均不理想，對藥典原規(guī)定方法改進后的HPLC法與原標(biāo)準(zhǔn)方法相比，準(zhǔn)確度和精密度都有了很大提高，結(jié)果表明，原標(biāo)準(zhǔn)中方法測定結(jié)果不準(zhǔn)確，改進后的HPLC法結(jié)果準(zhǔn)確。

趙曉崗等［4］發(fā)現(xiàn)，維A酸乳膏中，維甲酸最大吸收的波長不在352 nm處，而是在346 nm處，維A酸乳膏中的基質(zhì)對紫外測定有一定的干擾［5］。夏曙輝等將中國醫(yī)院制劑規(guī)范［6］采用分光光度法測定維A酸的吸光度作為質(zhì)控指標(biāo)。由于軟膏基質(zhì)中的凡士林和其他輔料在此波長有吸收，掩蓋了維A酸的吸收峰，方法特異性較差［7］。

維A酸對光、空氣等敏感，很不穩(wěn)定。郭懷忠等［8］研究發(fā)現(xiàn)，在不避光的條件下進行維A酸溶液的穩(wěn)定性試驗，發(fā)現(xiàn)吸收度約以0.007/min的速度下降，并且發(fā)現(xiàn)這個比率與光強成正比關(guān)系，變化顯著。所以，進行維A酸的鑒別和含量測定時一定要注意避光操作，須使用深棕色量瓶，否則會造成明顯的負誤差。測定應(yīng)該快速進行，所用對照品、溶劑宜現(xiàn)配現(xiàn)用，盡量減少操作時間和溶劑揮發(fā)。在進行過濾操作時，應(yīng)使溶液冷卻后再過濾，溫度較高時不宜操作，易帶入固體雜質(zhì)。

綜上所述，對于維A酸乳膏(0.025%)的含量測定，改進后的2010版維A酸(0.1%)藥典方法比原國家標(biāo)準(zhǔn)的紫外方法更適宜，結(jié)果更準(zhǔn)確可靠。

［1］ 葛繼紅，張全梅，劉冰，等.紫外分光光度法測定維甲酸軟膏中維甲酸的含量［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，32(6):737-738.

［2］ 李會輕，龐靖.醋酸去炎舒松維甲酸乳膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.藥物鑒定，2007，16(22):28-30.

［3］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.二部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:895.

［4］ 趙曉崗，徐興亞，汪新娣.維甲酸軟膏質(zhì)量控制方法的探討［J］.實用藥物與臨床，2010，13(3):197-198.

［5］ 江生.紫外分光光度法測定維A酸包合物的含量［J］.藥物鑒定，2006，15(13):30-31.

［6］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.中國醫(yī)院制劑規(guī)范［S］.第2版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1995:130.

［7］ 夏曙輝，蒲夏.維甲酸及其軟膏鑒別方法的改進［J］.華西藥學(xué)雜志，2004，19(2):164-165.

［8］ 郭懷忠，劉惠軍，李俊英.復(fù)方維A酸乳膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.天津藥學(xué)，2002，14(1):63-64.