金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)急性血瘀證大鼠血液流變學(xué)及內(nèi)皮功能的影響*

周 利，祁 青，張紅星，易艷東，林世和，黃國付，鄒 燃，安 雪，唐 雷

（湖北省武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院針灸科，武漢 430022）

金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)急性血瘀證大鼠血液流變學(xué)及內(nèi)皮功能的影響*

周 利，祁 青，張紅星，易艷東，林世和，黃國付，鄒 燃，安 雪，唐 雷

（湖北省武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院針灸科，武漢 430022）

[目的]觀察金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)急性血瘀大鼠血液流變學(xué)、血漿內(nèi)皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）的影響，以探討其活血化瘀作用。[方法]以皮下注射大劑量鹽酸腎上腺素附加冰水浴造成大鼠急性血瘀模型，檢測大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)、血漿ET-1和NO。[結(jié)果]模型對(duì)照組與正常對(duì)照組中血液流變學(xué)比較，（P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并結(jié)合大鼠表征證明造模成功。麝香舒活精組、金辛鎮(zhèn)痛液低中高劑量組與模型組比較，能不同程度地降低大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，并且大鼠血漿ET-1減少，而NO明顯增多，P＜0.01或P＜0.05。[結(jié)論]金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)血瘀證模型大鼠有著明顯的活血化瘀作用。

金辛鎮(zhèn)痛液；急性血瘀模型；血液流變學(xué)；內(nèi)皮素-1；一氧化氮

金辛鎮(zhèn)痛液是本院中心實(shí)驗(yàn)室的中藥外用制劑，主要成分由洋金花、細(xì)辛、乙醇等組成。其對(duì)動(dòng)物急慢性炎癥、疼痛模型有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用[1]。并且臨床應(yīng)用于痹癥的關(guān)節(jié)、肌肉、筋骨疼痛等療效確切[2]。為了探討金辛鎮(zhèn)痛液的活血化瘀作用，在此進(jìn)行了急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)的研究，觀察了該藥對(duì)急性血瘀大鼠內(nèi)皮功能的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠，雌雄各半（180～220）g，由武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK（鄂）2008-0004，合格證號(hào)為00008546。

1.2 藥物與試劑 金辛鎮(zhèn)痛液由湖北省武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心提供，批號(hào)：051106；鹽酸腎上腺素注射液（武漢遠(yuǎn)大制藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)：H42021700）；麝香舒活精(黃石飛云制藥有限公司，批號(hào):050701)；肝素（萬邦醫(yī)藥，批號(hào)：H32020612）；內(nèi)皮素-1（ET-1）和一氧化氮（NO）試劑盒均由武漢華瑞康生物試劑有限公司提供。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及給藥 取大鼠60只，按體質(zhì)量用隨機(jī)數(shù)字表法分為6組，每組10只。A組為正常對(duì)照組，B組為模型對(duì)照組，C組麝香舒活精組，D、E、F組分別為金辛鎮(zhèn)痛液低劑量組（100%金辛鎮(zhèn)痛液）、中劑量組（200%金辛鎮(zhèn)痛液）、高劑量組（400%金辛鎮(zhèn)痛液）。各組大鼠在乙醚淺麻下常規(guī)方法背部脫毛，面積約8 cm2。第2天，于脫毛區(qū)涂以相應(yīng)藥物，每只大鼠用藥5mL/kg，每日2次，連續(xù)給藥5 d。

2.2 動(dòng)物造模及采血 于第6天第1次給藥后1 h，除A組外，其余各組均于皮下注射鹽酸腎上腺素0.8mL/kg，共2次，兩次間隔4 h。在第1次注射鹽酸腎上腺素后2 h將大鼠浸入冰水中游泳5min，以造成急性血瘀模型[3]。造模后將所有大鼠禁食12h，次晨用10%六合氯醛0.3mL/kg腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血。

2.3 指標(biāo)觀察 血液流變學(xué)指標(biāo)測定：取血5mL肝素抗凝，送至本院檢驗(yàn)科測定，內(nèi)容包括：全血黏度切變率（1.00，5.00，30.00，200.00）、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血高切相對(duì)指數(shù)、全血低切相對(duì)指數(shù)。

血漿ET-1和NO測定：取血2mL，3 000 r/min，離心10min分離血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿ET-1含量，采用硝酸還原酶法測定血漿NO含量。全部樣品測定均由專人負(fù)責(zé)，并嚴(yán)格按照試劑盒說明書所提供的方法操作。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本研究采用SPSS 17.0版軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)分析處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，P＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)量資料組間差異比較采用ANOVA檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)血瘀證模型大鼠血液流變學(xué)的影響 模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較，血液流變學(xué)變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），并結(jié)合生物表征，血瘀模型成立。金辛鎮(zhèn)痛液3個(gè)劑量組和陽性對(duì)照麝香舒活精組都能不同程度改善上述血液流變學(xué)的變化，與模型對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或 P＜0.05），提示金辛鎮(zhèn)痛液有改善急性血瘀大鼠血液流變學(xué)的作用，降低血液高濃、黏、聚、凝狀態(tài)。見表1，表2。

表1 對(duì)全血黏度的影響（±s）Tab.1 Effecton whole blood viscosity（±s）mPa/秒

表1 對(duì)全血黏度的影響（±s）Tab.1 Effecton whole blood viscosity（±s）mPa/秒

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△P＜0.01或□P＜0.05。

全血黏度200/秒 30/秒 5/秒 1/秒正常對(duì)照組 5.03±0.42 7.09±0.55 13.10±1.21 32.16± 9.91模型對(duì)照組 7.76±0.89 9.43±0.94*18.16±1.85*46.28±18.33*麝香舒活精組 6.25±0.45△ 8.16±0.9△ 15.35±1.26△ 35.83± 6.80□金辛鎮(zhèn)痛液低劑量組 6.23±0.62△ 7.82±0.79△ 15.08±1.53△ 35.84± 9.69□金辛鎮(zhèn)痛液中劑量組 5.77±0.44△ 7.39±0.70△ 14.26±0.95△ 34.32±10.86△金辛鎮(zhèn)痛液高劑量組 5.14±0.41△ 7.20±0.60△ 13.78±1.21△ 32.93± 9.85△組別

表2 對(duì)血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血高低相對(duì)指數(shù)的影響（±s）Tab.2 Effecton plasma viscosity,erythrocyte aggregation index and wholeblood high or low relative index（±s）

表2 對(duì)血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血高低相對(duì)指數(shù)的影響（±s）Tab.2 Effecton plasma viscosity,erythrocyte aggregation index and wholeblood high or low relative index（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△P＜0.01 或□P＜0.05。

全血低切相對(duì)指數(shù)正常對(duì)照組 1.37±0.08 7.09±0.93 3.16±0.64 17.91±2.04模型對(duì)照組 1.98±0.17*9.90±1.09* 4.36±0.72* 25.46±2.78麝香舒活精組 1.78±0.16□ 8.62±0.74△ 3.84±0.53□ 20.17±1.80△金辛鎮(zhèn)痛液低劑量組 1.79±0.16□ 8.30±0.64△ 3.83±0.43□ 20.25±1.58△金辛鎮(zhèn)痛液中劑量組 1.63±0.18△ 7.62±0.93△ 3.65±0.52△ 19.01±1.28△金辛鎮(zhèn)痛液高劑量組 1.44±0.26△ 7.32±0.56△ 3.33±0.44△ 18.59±1.36△組別 血漿黏度（mPa/秒）紅細(xì)胞聚集指數(shù)全血高切相對(duì)指數(shù)

3.2 對(duì)模型大鼠血漿ET-1和NO的影響 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血漿ET-1的含量明顯增加，并且NO含量明顯減少，兩者差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。金辛鎮(zhèn)痛液3個(gè)劑量組和陽性對(duì)照麝香舒活精組均能降低ET-1的含量，和提高NO的含量，與模型對(duì)照組比較，P＜0.01或P＜0.05，提示金辛鎮(zhèn)痛液能調(diào)節(jié)ET-1/NO平衡，改善血瘀狀態(tài)。見表3。

表3 對(duì)血瘀證模型大鼠血漿ET-1和NO的影響（±s）Tab.3 Effecton plasma ET-1 and NO in ratswith blood stasis（±s）

表3 對(duì)血瘀證模型大鼠血漿ET-1和NO的影響（±s）Tab.3 Effecton plasma ET-1 and NO in ratswith blood stasis（±s）

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△P＜0.01 或□P＜0.05。

組別 ET-1（pg/L） NO(μmol/mL)正常對(duì)照組 128.31±23.59 43.02±14.41模型對(duì)照組組 189.00±27.19* 17.51±8.10*麝香舒活精組 157.47±38.83□ 32.43±17.20□金辛鎮(zhèn)痛液低劑量組 159.44±35.89□ 32.56±17.92□金辛鎮(zhèn)痛液中劑量組 149.24±31.23△ 34.82±22.56□金辛鎮(zhèn)痛液高劑量組 138.11±32.71△ 38.21±22.56△

4 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，凡離經(jīng)之血不能及時(shí)排出和消散，停留于體內(nèi)，或因氣虛、氣滯、寒凝、熱結(jié)、痰阻、濕濁、外傷、飲食、七情等病因所致血行不暢，停遏于經(jīng)脈之內(nèi)，及瘀積于臟腑組織器官的，均稱為瘀血。《素問·調(diào)經(jīng)論》曰：“寒獨(dú)留則血凝泣，凝則脈不通?！薄瓣枤馓撍t脈道拘急，血行不暢而寒凝血瘀?！备鶕?jù)此理論，擬冰水浴刺激造成血瘀證模型，另外結(jié)合皮下注射腎上腺素，因?yàn)槟I上腺素為α、β受體興奮劑，具有收縮外周血管和增加心臟收縮力的作用，通過與冰水浴相結(jié)合，可使外周血管強(qiáng)烈收縮，心臟后負(fù)荷增加，心肌耗氧代謝增加，心功能逐漸下降，從而使血液運(yùn)行障礙，血液黏度增加，形成瘀血的病理改變[3]，從而建立急性血瘀模型。實(shí)驗(yàn)研究表明血瘀證與血液循環(huán)障礙和內(nèi)皮功能、血液濃黏聚凝滯狀態(tài)、血小板活化和黏附聚集、組織細(xì)胞代謝異常、免疫功能障礙等多種生理病理的改變有很大關(guān)聯(lián)。血液流變學(xué)指標(biāo)異常已作為診斷血瘀證的重要客觀指標(biāo)[4]，在研究中另結(jié)合動(dòng)物表征，以證明造模成功及觀察用藥后血液流變學(xué)改善程度。

近年研究表明[5]，血管不僅是一個(gè)具有舒張功能的血液循環(huán)管道，而且是一個(gè)代謝活躍的內(nèi)分泌器官，它可產(chǎn)生和分泌多種血管活性物質(zhì)，以自分泌、旁分泌的方式構(gòu)成一個(gè)復(fù)雜的功能單位以調(diào)節(jié)血管的舒縮及代謝功能。其中，內(nèi)皮源性收縮因子，尤其是“內(nèi)皮素”及內(nèi)皮源性舒張因子,主要是NO，是目前研究較多的一對(duì)血管活性物質(zhì)。NO和ET在血管壁中調(diào)節(jié)彼此的合成/釋放及生物學(xué)行為，ET促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞NO的合成，NO又對(duì)ET誘發(fā)的血管收縮發(fā)揮反饋調(diào)節(jié)作用，而抑制內(nèi)皮素的生物合成，這一對(duì)血管活性物質(zhì)的平衡對(duì)于維持正常的血管張力起著主要作用。當(dāng)血脈瘀滯時(shí)，氣血運(yùn)行不暢，引起微循環(huán)障礙，血管舒縮功能和血管內(nèi)皮受損，其細(xì)胞分泌功能失調(diào)或紊亂，造成ET分泌增多，而NO分泌減少，引發(fā)ET、NO平衡失調(diào)，因而導(dǎo)致血管收縮，血液瘀滯，血管通透性增加，血細(xì)胞聚集，血液呈高凝狀態(tài)等血瘀的表現(xiàn)[6]。因此，臨床上常用ET/NO比值判斷血瘀證的嚴(yán)重程度[7-8]。ET是現(xiàn)知最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)[9]，目前研究認(rèn)為[10]，其對(duì)血管的強(qiáng)大收縮作用機(jī)制是這樣產(chǎn)生的：ET-1與血管平滑肌細(xì)胞膜上的特異性受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)磷酸酯酶C，生成三磷酸肌醇（IP3），及二酰甘油，IP3使細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存鈣釋放，細(xì)胞內(nèi)鈣水平升高，使血管持久收縮（第一時(shí)相）。另外，ET通過G蛋白間接激活電壓依賴性Ca2+通道，使血管壁平滑肌細(xì)胞的外鈣內(nèi)流；ET也可能直接作用于血管壁平滑肌細(xì)胞膜上的雙氫吡啶類敏感的鈣通道上，產(chǎn)生胞內(nèi)游離鈣濃度的持久升高(即第二時(shí)相)。血管壁平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度經(jīng)過第一、二時(shí)相的持久升高則產(chǎn)生了血管的強(qiáng)烈、長久的收縮效應(yīng)。由于ET-1具有普遍收縮微動(dòng)脈、微靜脈的作用，因此ET-1有使微循環(huán)血量減少、血流速度變慢，從而有利于血管內(nèi)血栓形成的作用，在臨床和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中都觀察到ET對(duì)血液凝固和纖維蛋白溶解系統(tǒng)有著密切的關(guān)系，可加強(qiáng)凝血過程。

研究結(jié)果顯示麝香舒活精組、金辛鎮(zhèn)痛液低中高劑量組與模型組比較，能不同程度地降低大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)，使大鼠血漿ET-1減少，NO明顯增多，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。該結(jié)果提示金辛鎮(zhèn)痛液對(duì)血瘀證模型大鼠有著明顯的活血化瘀作用，其抗血瘀證形成作用可能與抑制血管內(nèi)皮釋放ET-1及促進(jìn)N0分泌有關(guān)，但是其發(fā)揮作用的物質(zhì)基礎(chǔ)和深層機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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Effectsof Jinxin zhentong linimenton hemorheological changesand endothelial function in ratswith acuteblood stasis syndrome

ZHOU Li,QIQing,ZHANGHong-xing,etal
（DepartmentAcup-Moxibustion,Wuhan Intergrated TCM andWestern Medicine Hospital,Wuhan 430022,China）

[Objective]Through observing the effectsof Jinxin zhentong linimenton hemorheological changes,endothelin-1(ET-1)and Nitrogenmonoxid(NO)in ratswith acute blood stasis,its function of promoting blood circulation to remove blood stasiswas investigated.[Methods]The acute blood stasismodel in ratswere established with subcutaneous injection of high-dose adrenaline hydrochloride and being socked in ice-water.The indexes of hemorheological parameters,ET-1 and NO in rats with acute blood stasis were detected.[Results]Therewassignificantdeferenceofhemorheologicalchanges(P＜0.01)between themodelgroup and thenormalgroup.Combining with the appeared characteristics itwas demonstrated that the acute blood stasismodel in rats was successfully established.Shexiang Shuhuojing group and Jinxin zhentong liniment in low/middle/high doses could notonly decrease the hemorheological indexs in different degrees,butalso reduceplasma ET-1(P＜0.01 or P<0.05).Theexpression ofNOwas remarkably increased,(P＜0.01 or P＜0.05).[Conclusion]Jinxin zhentong linimentcan obviously promote blood circulation to remove blood stasis.

Jinxin zhentong liniment;acute blood stasismodel;hemorheology;endothelin-1;nitrogenmonoxide

R285.5

A

1672-1519(2011)03-0323-03

湖北省武漢市科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（20065009138-05）。

周 利（1973-），女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事針灸治療臨床研究工作。

張紅星。

2011-03-05）