經(jīng)方補陽還五湯對神經(jīng)功能缺失影響的一種藥理學評價方法

白雪松 蔡光先 尹天雷

(1遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，遼寧省沈陽市皇姑區(qū)北陵大街33號，110032;2湖南省中醫(yī)藥研究院)

中風是一種常見的臨床疾病。按照世界衛(wèi)生組織心血管病趨勢及其決定因素監(jiān)測方案(WHO-MONICA)進行的心血管患者群監(jiān)測結果表明:我國各地人群腦卒中事件發(fā)病率及死亡率與國際相比屬較高水平［1］。近年來腦卒中發(fā)病率呈上升趨勢而死亡率卻呈下降趨勢［2］。測算結果顯示，25歲以上人群因腦血管疾病而損失的能力喪失調整生存年(DALYs)在2000年為12.51DALYs/千人口。在2000年，缺血性腦卒中的疾病經(jīng)濟負擔為126億元～196億元［3］。如何提高腦血管病在恢復期的治愈率，已成為國內外醫(yī)學研究的重點課題。補陽還五湯出自清代王清任的《醫(yī)林改錯》，是臨床治療中風后遺癥的經(jīng)典方劑，有很好的療效，文獻報道總有效率為90%以上［4-7］，并能減少后遺癥的發(fā)生［8］。本實驗綜合評價了動物模型感覺、運動等多種神經(jīng)功能缺失恢復情況，并探討了補陽還五湯對中風后遺癥期神經(jīng)功能缺失的治療效應。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物 處方由黃芪120g、當歸尾6g、川芎3g、紅花 3g、赤芍 4.5g、桃仁 3g、地龍 3g組成，由湖南省超微工程技術中心提供，濃度為0.78g/mL。

1.2 實驗器材與試劑 手術器材、電凝器(上海滬通電子有限公司，GD350-S1型)、水合氯醛(五聯(lián)化工廠提供，批號:w20051122)、肝素鈉注射液(上海生物化學制藥廠提供，批號:005006)。

1.3 實驗動物 SD大鼠，單一雄性，體重280±20g。由上海希普爾-必凱試驗動物有限公司提供［許可證編號:SCXK(滬)2003-0002］。

1.4 造模方法 大鼠以10%水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉。頸正中切口，分離暴露右頸總動脈、頸內動脈和頸外動脈，頸外動脈遠心端打一活結，于活結外凝斷，在頸外動脈剪一小口，將栓線插入，向顱底輕輕推送，約21mm左右感覺到輕微阻力，再輕輕回抽約2mm左右，固定。缺血損傷后1h，將栓線抽回至頸外動脈，形成缺血再灌注。動物清醒24h后，以Zea Longa評分標準［9］初步評價動物造模情況，剔除0分和4分動物。具體的評分標準:0分，無神經(jīng)功能障礙;1分，左側前爪不能完全伸展，輕度神經(jīng)功能障礙;2分，行走時大鼠向左側(癱瘓側)轉圈，中度神經(jīng)功能缺失;3分，行走時大鼠身體向左側(癱瘓側)傾倒，重度神經(jīng)系統(tǒng)功能缺失;4分，不能自發(fā)行走，有意識喪失。

1.5 分組及給藥方法 術后Zea Longa評分剔除后，動物存活超過14天者可納入實驗，舍去狀態(tài)極差的動物，最終納入大鼠20只，隨機分成模型組、補陽還五湯組(以下簡稱治療組)，每組10只。另取10只同批次的動物作為空白對照組。實驗動物分早晚2次給藥，藥物按人與動物體表面積折算。治療組每只每次灌胃傳統(tǒng)煎劑2mL，相當于成人每日劑量為142.5g;模型組與空白組各灌胃2mL自來水。

1.6 神經(jīng)損傷嚴重度評分(Neurological Severity Score，NSS)方法 參考文獻［10］的方法，通過一系列的行為學測試來獲得更詳細的神經(jīng)學判定。主要包括運動能力和感覺情況等一系列10個測試項目。21分是試驗鼠能達到的最高分，即正常大鼠得分。實驗動物手術前每日撫摸若干次，建立良好的反射，適應神經(jīng)行為學評分測試，使給藥前基線平穩(wěn)。1)爪放置:動物在長凳的邊緣縱向抓握，每爪依次放在凳子的邊緣。每只成功放置到凳子上的爪積1分。2)翻正反射:動物仰臥放在手掌，如果能翻過來積1分。3)單杠測試:前肢放在有棱的棒上，積分情況如下:3分，兩后肢向上隆起到棒上;2分，一后肢向上隆起到棒上;1分，動物吊著;0分，動物掉下來。4)傾斜平臺:動物面向下放置45°斜面，積分情況如下:3分，15s內動物轉身，使頭向上;2分，16～30s內轉身;1分，轉身花費時間超過30s;0分，掉下來或還保持指頭向下方向。5)旋轉:拿著動物尾巴根部，然后順時針旋轉，再逆時針旋轉，動物應該向旋轉對側方向轉圈，每側積1分。6)前爪視覺范圍:動物能在輕拿，使其位置到達長凳邊緣，每成功前肢放置積1分。7)轉圈:1分，不轉圈;0分，轉圈。8)對側反射:0分，反射;1分，不反射。9)活動能力:2分，正?；顒幽芰?1分，搖擺、不穩(wěn);0分，不能活動。10)一般條件:2分，正常(皮毛光澤，警覺，自由走動);1分，不整潔(皮毛臟、駝背姿勢、好斗);0分，瘦弱，軟弱，肌肉緊張性下降。

1.7 統(tǒng)計學方法計量資料以ˉx±s的形式表示，滿足正態(tài)性與方差齊性，以析因設計方差分析檢驗NSS評分時間與組間效應，以Dunnett-t檢驗對多組與一組數(shù)據(jù)差別進行比較。如果數(shù)據(jù)不滿足方差分析條件，則以秩和檢驗進行分析。

2 結果

2.1 一般情況 造模后大鼠精神萎靡，喜臥少動，易激惹;體重下降，皮毛枯槁無光澤，豎毛，并有掉毛現(xiàn)象;部分有呃逆，流涎，稀便。出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)缺失表現(xiàn)，表現(xiàn)為左側肢體運動和感覺的缺失。這些表現(xiàn)可持續(xù)到實驗結束。

2.2 行為學測試結果 NSS評分總體結果見表1、表2。

表1 NSS評分結果(ˉx±s)

表2 NSS評分結果統(tǒng)計檢驗(n=10)

統(tǒng)計結果顯示，NSS評分時間和組間差異具有統(tǒng)計學意義，并且時間與組間具有交互作用，提示NSS評分恢復情況受組間和時間2種因素影響，可以說隨著時間延長，NSS評分有恢復的趨勢。具體不同時間點組間比較結果，各時間點模型組和治療組NSS評分與空白組比較均有統(tǒng)計學意義，而治療組與模型組比較，在給藥后2、4、6周NSS評分差別有統(tǒng)計學意義，可以說治療組能改善模型動物神經(jīng)缺失癥狀。

3 討論

大腦支配調控機體的感覺、運動等多種生命活動。如果腦的血流供應發(fā)生障礙，導致供血區(qū)域缺血性損傷，導致運動、感覺、反射等功能缺損。實驗研究常采用阻塞大腦中動脈來復制局灶性腦梗死動物模型。動物常表現(xiàn)為神經(jīng)功能缺失:如對側肢體，特別是前肢運動功能障礙，對側感覺功能障礙，反射協(xié)調障礙等。對于這些表現(xiàn)，最常用的評測方法是一些簡單的分級方法如Zea Longa評分方法來進行神經(jīng)學判定［9］。這些方法往往比較粗糙，無法體現(xiàn)模型感覺、運動、平衡協(xié)調等功能的全部變化。目前已經(jīng)有不同的研究者根據(jù)需要開發(fā)了一系列方法更敏感精確的方法評測這種功能損傷。這些包括肢體放置、橫木行走、網(wǎng)屏行走、旋轉試驗、粘性標簽粘貼測試、樓梯測試等［11-12］。對于中風模型理想的功能結果測試應該是對于各種功能損傷敏感，能檢測到慢性長期功能不足，不會因為重復測量過分影響，并且對損傷是有針對性的。但是測試選擇一直是爭論相當多的論題，關于哪個實驗該被選擇以及最少的測試數(shù)目是多少仍沒有一致意見。如果大量動物被檢測，就會受時間和資金限制。神經(jīng)損傷嚴重程度評分綜合了運動、感覺、反射、整體情況以及感覺運動整合等能力，從一定程度上彌補了單一測試的的缺點。

中風多發(fā)于中老年人，大部分存活患者留有不同程度的后遺癥。究其病因病機多為氣虛血瘀，其病性多為本虛標實、虛實夾雜。王清任創(chuàng)制補陽還五湯，以黃芪四兩補氣為君，伍以活血化瘀藥為輔，以補氣活血立法治療本病，是臨床上治療中風后遺癥的經(jīng)典方劑，療效確切，在本實驗中能明顯提高NSS評分，改善神經(jīng)缺失癥狀，從中藥藥理學角度論證了其療效。

［1］吳兆蘇，姚崇華，趙冬.我國人群腦卒中發(fā)病率、死亡率的流行病學研究.中華流行病學雜志，2003，24(3):236-239.

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［3］胡善聯(lián)，龔向光.中國缺血性腦卒中的疾病經(jīng)濟負擔.中國衛(wèi)生經(jīng)濟，2003，22(12):18-20.

［4］周正芳.補陽還五湯加味治療中風后遺癥50例.實用中醫(yī)內科雜志，2005，19(2):153.

［5］羅衛(wèi)東，李力.補陽還五湯治療中風后遺癥150例療效觀察.中醫(yī)藥學報，2005，33(5):49.

［6］周勇軍.補陽還五湯加味治療中風康復45例觀察.時珍國醫(yī)國藥，2006，17(2):250］.

［7］劉永平，曾玲，曾祥碧.補陽還五湯加針刺治療腦梗死恢復期臨床觀察.四川中醫(yī)，2003，21(11):37-39.

［8］樊春燕，楊軍.補陽還五湯加味治療腦血管病恢復期及后遺癥期114 例. 陜西中醫(yī)，2005，26(7):669-670.

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