維生素C對中華鱉體組成及膠原蛋白含量的影響

浙江匯能動物藥品有限公司 聶月美

浙江大學(xué) 邵慶均＊

維生素C是一種水溶性維生素，因其對壞血病有防治作用，故又稱為抗壞血酸。維生素C的主要功能是參與膠原蛋白合成，而且能保護(hù)血管尤其是毛細(xì)血管膜、肌纖維膜的正常通透性，有效防止滴水損失及肉質(zhì)過軟。它也是細(xì)胞外最主要的抗氧化劑，可以防止脂肪酸的氧化，提高肉的品質(zhì)。因此，本試驗(yàn)研究了維生素C對中華鱉體組成和組織膠原蛋白含量的影響，為其在中華鱉配合飼料中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥品 多聚磷酸酯維生素C（金維安-35）購自杭州民生生物科技有限公司，批號：浙飼添字（2002）107015。其中的維生素C含量用GB/T19422－2003方法測定，維生素C含量為34.55%。

1.2 試驗(yàn)動物及設(shè)計 試驗(yàn)用中華鱉取自杭州市下沙水產(chǎn)養(yǎng)殖公司。經(jīng)過3周預(yù)飼養(yǎng)后，挑選60只體質(zhì)健康、規(guī)格相近的中華鱉，分別放養(yǎng)入20個塑料桶內(nèi)，每桶3只，隨機(jī)分為5組，每組4個重復(fù)。其中一組作為對照組，投喂基礎(chǔ)飼料，另外四組為試驗(yàn)組，分別對其投喂試驗(yàn)飼料1～4。

試驗(yàn)在浙江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院畜牧場水產(chǎn)養(yǎng)殖教研基地進(jìn)行，試驗(yàn)養(yǎng)殖于20個規(guī)格相同的塑料桶中，試驗(yàn)用桶直徑0.8 m，圓錐部分體積0.038 m3，由玻璃纖維制造，水深45 cm，桶底質(zhì)為10 cm厚的細(xì)沙，水下5 cm處平置一石棉瓦飼料臺。試驗(yàn)期間將水溫控制在31±2℃，定期監(jiān)測水質(zhì)使整個飼養(yǎng)期間水質(zhì)符合標(biāo)準(zhǔn)。

每天飼喂 2 次（08∶00 和 16∶00），投喂量以飽食為準(zhǔn)。每隔15 d稱鱉體重一次，以便確定投喂量。每天喂食前4 h從冰箱中取出放在4℃解凍，并經(jīng)過室溫平衡后稱量投喂。投餌2 h后，取出剩余飼料，每10 d換水50%，每周用2 mg/kg漂白粉消毒，且在水體中添加一定量“凈水寶”（含枯草芽孢桿菌），改善水體環(huán)境。自然光照。正式試驗(yàn)為期60 d。

1.3 試驗(yàn)日糧 根據(jù)中華鱉的營養(yǎng)需要設(shè)計飼料配方（邵慶均等，2004），基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)飼料1～4在基礎(chǔ)飼料中以多聚磷酸酯維生素 C形式分別添加 100、200、400、2000 mg/kg的維生素C，各種飼料原料經(jīng)超微粉碎后過80目標(biāo)準(zhǔn)篩，各原料按比例精確稱量、混合、攪拌均勻，以絞肉機(jī)擠壓成粒徑0.2 mm的濕顆粒，置于-20℃冰箱中備用。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平%

1.4 樣品收集和保存 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，在最后一次投飼的24 h后對每只鱉用MS-222（60 ppm）麻醉并用冰水處理，稱重。

（1）肌肉樣品：血液樣品采集完畢后，打開每尾鱉的背甲，取其后腿根部游離肌肉，裝于密封袋中，立刻放于-20℃的冰箱中保存，待分析用。

（2）裙邊樣品：將每個桶內(nèi)的3只中華鱉的裙邊剪碎，裝于密封袋中，立即放在－20℃的冰箱中保存。

1.5 生化組成指標(biāo)分析 肌肉和裙邊的粗蛋白質(zhì)、水分含量測定采用GB6433-6438-86；粗脂肪含量測定采用GB6433-86；氨基酸測定采用全自動氨基酸分析儀HP-1100。

肌肉的脂肪酸含量分析采用氣質(zhì)聯(lián)用色譜儀HP6890GC/5973MS；膽固醇測定按照寧波慈城生化試劑廠提供的試劑盒進(jìn)行；丙二醛、肌酐以及乳酸脫氫酶（LDH）和肌酸激酶（CK）活力的測定按照南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行。

中華鱉肌肉、裙邊、肝臟和背甲膠原蛋白（以羥脯氨酸計）采用分光光度法。

1.6 統(tǒng)計分析 采用Excel和SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果分析

2.1 維生素C對中華鱉肌肉和裙邊常規(guī)營養(yǎng)成分的影響 見表2。由表2可知，飼料中添加不同水平的維生素C對中華鱉肌肉和裙邊的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和水分含量沒有顯著影響（P＞0.05）。這與Soliman等 （1994）、 文華和廖朝興（1996）、Henrique和 Gomes（1998）得到的結(jié)論一致。

表2 維生素C對中華鱉肌肉和裙邊常規(guī)營養(yǎng)成分含量的影響（濕重）

2.2 維生素C對中華鱉肌肉氨基酸含量的影響見表3。由表3可知，隨著飼料中維生素C添加量的增加，必需氨基酸 （EAA）、非必需氨基酸（NEAA）、鮮味氨基酸（FAA）和總氨基酸（TAA）含量逐漸增加。飼料中添加維生素C含量大于400 mg/kg時，必需氨基酸、非必需氨基酸、鮮味氨基酸和總氨基酸的含量均顯著高于對照組 （P＜0.05）。中華鱉肌肉蛋白質(zhì)的氨基酸組成中鮮味谷氨酸和天冬氨酸含量最高，總鮮味氨基酸量約占氨基酸總量的一半，這大概是中華鱉味道鮮美的主要原因。

表3 維生素C對中華鱉肌肉氨基酸含量的影響 %

2.3 維生素C對中華鱉裙邊氨基酸含量的影響見表4。由表4可知，隨著飼料中維生素C含量的增加，中華鱉裙邊中必需氨基酸、非必需氨基酸和總氨基酸逐漸增加，2000 mg/kg維生素C組的必需氨基酸、非必需氨基酸、總氨基酸和鮮味氨基酸含量最高，分別比對照組提高了3.75%、1.66%、2.63%和1.31%。

2.4 維生素C對中華鱉肌肉脂肪酸含量的影響見表5。隨著飼料中維生素C含量的升高，鱉肌肉中多不飽和脂肪酸（PUFA）的含量也逐漸升高；而飽和脂肪酸（SFA）和單不飽和脂肪酸（MUFA）隨著飼料中維生素C含量的升高逐漸降低。這可能是維生素C在鱉體內(nèi)發(fā)揮了很好的抗氧化作用，保護(hù)不飽和脂肪酸，防止其變?yōu)轱柡椭舅帷?/p>

2.5 維生素C對中華鱉肌肉肌酸激酶 （CK）和LDH的影響 見圖1和圖2。由圖1、2可知，隨著飼料中維生素C含量的增加，肌肉CK和LDH活力呈下降的趨勢。

表4 維生素C對中華鱉裙邊氨基酸含量的影響

表5 維生素C對中華鱉肌肉脂肪酸含量的影響

圖1 維生素C對肌肉乳酸脫氫酶（LDH）活力的影響

圖2 維生素C對肌肉肌酸激酶（CK）活力的影

2.6 維生素C對中華鱉肌肉丙二醛、肌酐和膽固醇含量的影響 見表6。由表6可知，隨著飼料中維生素C含量的增加，各試驗(yàn)組肌肉的MDA、CRE和CHO含量逐漸下降。

表6 維生素C對中華鱉肌肉MDA、CRE和CHO含量的影響

2.7 維生素C對中華鱉組織膠原蛋白（以羥脯氨酸計）含量的影響 見表7。由表7可知，隨著飼料中維生素C含量的增加，肌肉、裙邊、肝臟和背甲中膠原蛋白的含量也呈現(xiàn)增加趨勢。當(dāng)飼料添加維生素C含量超過200 mg/kg時，肌肉、肝臟和裙邊中的膠原蛋白含量均顯著高于對照組 （P＜0.05）。 Lightner等（1979）發(fā)現(xiàn)，當(dāng)維生素 C 缺乏時，對蝦體內(nèi)羥脯氨酸含量減少。Guary等（1976）認(rèn)為，維生素C可能與幾丁質(zhì)的合成有關(guān)。維生素C可能參與甲殼類外殼最外層的硬化，此硬化是由一種外殼蛋白質(zhì)與苯醌的交聯(lián)作用。苯醌是由酪氨酸酶催化使苯酚氧化產(chǎn)生，而這些過程需有維生素C參與，方能順利反應(yīng)。Shiau和Hsu（1995）報道，當(dāng)試驗(yàn)日糧中維生素C硫酸酯、維生素C單磷酸和維生素C添加量分別大于30、50 mg/kg和50 mg/kg時，能夠顯著提高羅非魚脊椎骨的膠原蛋白含量（P＜0.05）。其機(jī)理可能是維生素C是膠原轉(zhuǎn)錄翻譯后修飾過程，即新生肽鏈中脯氨酸和賴氨酸經(jīng)羥化酶作用轉(zhuǎn)變成羥脯氨酸和羥賴氨酸過程的重要輔助因子。

表7 維生素C對中華鱉肝臟、背甲、肌肉和裙邊中膠原蛋白含量的影響

3 小結(jié)

飼料中添加維生素C能改善中華鱉體組成和增加組織膠原蛋白含量。隨著飼料維生素C添加量的增加，肌肉和裙邊必需氨基酸、非必需氨基酸、鮮味氨基酸和總氨基酸的含量也逐漸升高，且肌肉中的不飽和脂肪酸也逐漸升高，但肌肉中的飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸逐漸降低。飼料中添加維生素C能夠提高肌肉、裙邊、肝臟和背甲中膠原蛋白（以羥脯氨酸計）含量。

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