不同溶劑的芫荽提取物對菜蚜生物活性的影響

陳 惠，徐 莉，葛 紅，顧國華 （江蘇沿江地區(qū)農業(yè)科學研究所，江蘇如皋22654）

芫荽 （CoriadrumsativumL．）又名胡荽，俗稱香菜。芫荽屬傘形科植物，英文名Coriander，為一年生香辛葉類蔬菜，由于具有調味和多種保健功效而在世界范圍內倍受青睞［1］。除了食用功能之外，芫荽提取物還對魚油具有抗氧化作用［2］，對沙門氏菌、大腸桿菌等具有抗菌作用［3］等。徐漢虹等［4］研究表明：芫荽對蚜蟲具有活性作用，但其活性成分的粗提方法及作用方式的系統(tǒng)研究還未見報道。本研究探索芫荽殺蟲活性成分的提取方法，明確它的主要作用方式，為將芫荽進一步開發(fā)成新型植物源農藥提供科學依據。

1 材料與方法

1．1 材料

（1）芫荽原粉 芫荽來自江蘇沿江地區(qū)農業(yè)科學研究所試驗田，用清水洗凈后，自然陰干，粉碎、過篩 （20目）得芫荽原粉，待用。

（2）供試昆蟲 蚜蟲捕自江蘇沿江地區(qū)農科所附近農戶種植的青菜田，選擇健康、大小均勻的蚜蟲，以鮮嫩青菜葉飼養(yǎng)。室內溫度 （25±1）℃，相對濕度60%～75%，光周期12D∶12L。

（3）試劑 乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯均為分析純 （AR），吐溫-80。

1．2 方法

1．2．1 活性成分的提取與藥劑配制

稱取200g植物原粉，倒入1000ml的燒瓶中，分別加入不同的溶劑500ml，浸泡24h，超聲30min，抽濾，共浸提3次，合并濾液后減壓濃縮至油狀為止 （A：芫荽的乙醇提取物；B：芫荽的氯仿提取物；C：芫荽的丙酮提取物；D：芫荽的乙酸乙酯提取物）。分別加入1g吐溫-80，用水稀釋后定容到50ml作為藥劑，稀釋為0、25、50、100、200mg／ml的溶液，備用。

1．2．2 活性作用方式的研究

（1）觸殺活性測試 采用點滴法。在每頭蟲體的腹背處點滴0．1μl各處理溶液［5］，然后將試蟲轉入墊有保濕濾紙的培養(yǎng)皿中，喂飼新鮮青菜葉片，每處理30頭，重復3次，對照為1%吐溫-80的水溶液，將培養(yǎng)皿放置于養(yǎng)蟲室。72h后分別記錄各處理蚜蟲的死亡數(shù)，以軟毛筆尖觸及蟲體無反應為死亡標準。計算毒力回歸線、半致死濃度（LC50）、LC50的95%置信限等。

（2）胃毒活性測試 采用載毒葉片法，參照xenou-Kokoletsi［6］的方法，先將藥液倒進抽氣瓶中，再將帶葉柄的完整青菜葉片浸入抽氣瓶的藥液中，然后抽氣，直到葉片表面無氣泡冒出時，松開抽氣瓶的放氣活塞放氣，使葉片將藥液吸入。把葉片從藥液中取出，放在自來水中漂洗2min，將葉片表面的藥液洗去。用吸水紙吸干葉片上的水，放入9cm培養(yǎng)皿中，每皿放葉片3張，用濕棉球包裹葉柄保濕。用軟毛筆將大小一致的無翅成蚜接入培養(yǎng)皿的葉片上，每皿接蟲30頭，重復3次。將培養(yǎng)皿養(yǎng)蟲室中飼養(yǎng)。72h后檢查死亡率，以軟毛筆尖觸及蟲體無反應為死亡標準。計算指標及方法同上。

（3）驅避活性測試 選取新鮮干凈青菜葉片，剪成大小一致的葉碟 （直徑2cm），以中間主葉脈為界用毛筆將葉碟一側均勻涂上植物提取物［7-8］，對照為1%吐溫-80的水溶液，靜置陰干；在培養(yǎng)皿底部放3張保濕濾紙，加水，然后將葉碟置于濾紙上。將大小一致的試蟲接于葉脈中部，每處理重復3次，每重復30頭試蟲，置于養(yǎng)蟲室內。分別于處理后72h調查處理和對照活蟲數(shù)。按下式計算驅避率。

驅避率= ［（對照邊試蟲數(shù)-處理邊試蟲數(shù)）／對照邊試蟲數(shù)］×100%。

根據驅避率的不同，將驅避效果分為6個等級 （0～V），分級標準為：0級，無驅避作用；I級，0．1%～20%驅避率；Ⅱ級，20．1%～40%驅避率；Ⅲ級，40．1%～60%驅避率；Ⅳ級，60．1%～80%驅避率；V級，80．1%～100%驅避率［9］。

1．2．3 數(shù)據處理方法

參照賈春生［10］的方法，試驗結果采用SPSS 17．0軟件計算毒力回歸方程、半致死濃度（LC50）、LC50的95%置信限等。

2 結果與分析

2．1 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲的觸殺活性的影響

室內72h的觸殺活性測定結果表明，不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲均有觸殺作用，其結果見表1。由表1可知，B的觸殺活性LC50最高，為124．207mg／ml，A、D的LC50相近，C的LC50最低，為64．470mg／ml，其95%的置信區(qū)間為 ［49．406，83．340］，即芫荽的丙酮提取物觸殺活性最高。

表1 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲觸殺活性分析結果 （72h）

2．2 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲的胃毒活性的影響

蚜蟲是刺吸式、吸汁類的害蟲，所以采用xenou-Kokoletsi的方法對其進行胃毒活性測定，結果見表2。由表2可知，芫荽的不同溶劑提取物對蚜蟲均有胃毒活性作用，其中，B的觸殺活性LC50最高，為195．242mg／ml，其次分別為 A、D，C的LC50最低，為103．496mg／ml，95%的置信區(qū)間為 ［76．004，159．265］，毒力回歸方程為y=1．810x-3．647。

表2 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲胃毒活性分析結果 （72h）

2．3 不同溶劑芫荽提取物對蚜蟲的驅避活性的影響

根據Malik等的分級方法，對4種提取物不同濃度的驅避率進行分級，結果見表3。由表3可知，這4種提取物對蚜蟲均有驅避活性，當藥劑濃度達200mg／ml時，B、D的驅避活性等級最高，為V級。

表3 芫荽不同溶劑的提取物對蚜蟲驅避活性測定結果 （72h）

3 討論

由上述試驗結果可知，4種提取物對菜蚜均有觸殺、胃毒、驅避活性作用，其中丙酮提取的芫荽活性物質對菜蚜的觸殺、胃毒作用最大；氯仿、乙酸乙脂的提取物則對菜蚜的驅避活性相對較高，這是由于溶劑的化學性質不同，導致提取物中活性物質的質量不一樣，故而毒力測定的結果有差異，這一結果與楊玉英等［11］的研究是一致的。本研究中沒有對芫荽提取物活性組分進行分離、提純、鑒定，尚需今后進一步研究。

全球生物農藥市場銷量已達到農藥總量的20%，而目前我國生物農藥年產量僅占農藥總量的1%左右［12］。本研究為芫荽的進一步開發(fā)利用和仿生合成新型植物源農藥奠定了一定基礎。

［1］郭紅轉，陸占國，李 健 ．芫荽的研究開發(fā)現(xiàn)狀 ［J］．食品研究與開發(fā)，2005，26（2）：104-106．

［2］田迪英，楊榮華 ．幾種香辛料對魚油抗氧化及消臭作用的研究 ［J］．糧油加工與食品機械，2002，（4）：48-50．

［3］李興鳴，徐學明 ．芫荽抑菌成分的提取及其抑菌性能的研究 ［J］．食品科技，2006，（10）：89-91．

［4］徐漢虹 ．殺蟲植物與植物性殺蟲劑 ［M］．北京：中國農業(yè)出版社，2001：406-407．

［5］湯麗梅，李保同 ．莰酮對蚜蟲生物活性的研究 ［J］．熱帶作物學報，2002，23（4）：85-88．

［6］Xenou-Kokoletsi M，Christias C．A simple and rapid technique for assaying toxicants in aphids ［J］．J Appl Ent，2002，126：108-113．

［7］陸永躍，梁廣文，邵婉婷，等 ．異源植物提取物對香蕉交脈蚜的控制作用 ［J］．華中農業(yè)大學學報，2002，21（4）：334-337．

［8］姚英娟，薛 東，楊長舉．21種植物提取物對玉米象的生物活性 ［J］．昆蟲學報，2005，48（5）：692-698．

［9］Malik M M，Mujtaba Naqvi S H．Screening 0fsome indigenous plants as repellents of antifeedants for stored gain insect ［J］．Stord Products Research，1984，20：45-48．

［10］賈春生 ．利用SPSS軟件計算殺蟲劑的LC50［J］．昆蟲知識，2006，43（3）：414-417．

［11］楊玉英，賀達漢，王 婧 ．草麻黃提取物對菜蛾幼蟲的拒食活性研究 ［J］．植物保護，2006，32（5）：35-38．

［12］徐凱宏 ．基于植物源提取綠色農藥的研究現(xiàn)狀與發(fā)展 ［J］．林業(yè)科技，2009，34（3）：37-39．