胃癌組織中MMP-9、CD44v6和VEGF的表達(dá)變化及意義

于海英，劉 暢，高鳳蘭，孫中華

(1漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河南漯河462002;2吉林大學(xué)第一臨床醫(yī)院)

胃癌的預(yù)后差，病死率高，探討胃癌的生物學(xué)特性是目前研究熱點(diǎn)［1］。腫瘤新生血管形成和細(xì)胞外基質(zhì)降解是其浸潤和轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。黏附分子CD44拼接變異體v6(CD44v6)主要見于具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞，且參與淋巴細(xì)胞活化、增殖及再循環(huán)［2］。2010年2～10月，我們采用免疫組化方法檢測80例胃癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、CD44v6和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展的作用?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本組80例胃癌標(biāo)本均來源于我校附屬醫(yī)院2007年1月～2010年5月手術(shù)治療的胃癌患者。80例患者中，男48例，女32例;年齡34～76(56.1±11.2)歲。均經(jīng)病理證實(shí)且隨訪資料完整，術(shù)前均未行放化療以及其他抗腫瘤治療。TNM分期:Ⅰ期10例、Ⅱ期29例、Ⅲ期23例、Ⅳ期18例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例。每例標(biāo)本均取癌組織及其對應(yīng)的正常癌旁組織，均用10%甲醛固定，石蠟包埋。

1.2 主要試劑及MMP-9、CD44v6、VEGF檢測方法 鼠抗人MMP-9和CD44v6單克隆抗體、兔抗人VEGF多克隆抗體、免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑和中性樹膠等(均購自福州邁新公司)。所有標(biāo)本均采用免疫組化SP法染色，操作及結(jié)果判定參照試劑盒說明書。用已知MMP-9、CD44v6和VEGF陽性表達(dá)的乳腺癌組織切片為陽性對照，PBS替代一抗為陰性對照。細(xì)胞膜或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為MMP-9、CD44v6、VEGF染色陽性。每一切片在高倍鏡下(×200)隨機(jī)計算8～10個視野，按陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比判定結(jié)果:MMP-9和CD44v6:陽性細(xì)胞＜10%為陰性(－)、≥10%為陽性(+);VEGF:陽性細(xì)胞 ＜10%為 －、10% ～49%為弱陽性、≥50%為強(qiáng)陽性，后兩者為+。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件。率的比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

胃癌組織中MMP-9、CD44v6和VEGF的陽性表達(dá)率分別為 70.0%(56/80)、76.2%(61/80)和83.7%(67/80)，分別高于癌旁組織中的3.8%(3/80)，5.0%(4/80)和8.7%(7/80)，P 均 ＜0.01。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的胃癌組織中MMP-9、CD44v6和VEGF陽性表達(dá)率分別為 80.7%(42/52)、88.4%(46/52)和96.1%(50/52)，均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的50.0%(14/28)、53.6%(15/28)和 60.7%(17/28)，P均 ＜0.05;Ⅲ ～ Ⅳ期胃癌組織中 MMP-9、CD44v6和VEGF的陽性表達(dá)率分別為82.0%(32/39)、84.6%(33/39)和 92.3%(36/39)，分別高于Ⅰ ～ Ⅱ 期的58.5%(24/41)、68.3%(28/41)和75.6%(31/41)，P 均 ＜0.05。

MMP-9、CD44v6表達(dá)陽性的胃癌組織中，VEGF表達(dá)也呈陽性，MMP-9、CD44v6與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.331、0.421，P 均 ＜0.05)。

3 討論

惡性腫瘤細(xì)胞具有向局部浸潤和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的能力是威脅患者生命的主要原因。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞突破基底膜，侵入毛細(xì)血管和淋巴管，轉(zhuǎn)移至臨近和遠(yuǎn)處組織器官［3］。MMPs是一類與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移關(guān)系十分密切的蛋白水解酶，MMP-9是其中重要成員，其作用底物為基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的的膠原蛋白。腫瘤細(xì)胞在侵襲和轉(zhuǎn)移過程中突破各種屏障的能力較強(qiáng)，同時癌細(xì)胞可自身分泌或誘導(dǎo)其他細(xì)胞分泌大量的MMPs，破壞基底膜的完整性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中MMP-9表達(dá)顯著高于癌旁組織，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的胃癌組織中MMP-9表達(dá)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P＜0.01)，Ⅲ～Ⅳ期者顯著高于Ⅰ～Ⅱ期者(P＜0.05)。說明MMP-9在胃癌細(xì)胞生長侵襲及轉(zhuǎn)移中起著重要作用，其表達(dá)水平與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

CD44v6的表達(dá)可改變腫瘤細(xì)胞表面黏附分子的構(gòu)成及功能，使腫瘤細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)移能力，使腫瘤細(xì)胞與遠(yuǎn)隔的淋巴結(jié)和血管內(nèi)的配體結(jié)合，有效地形成轉(zhuǎn)移瘤并更加穩(wěn)定地寄宿和生長［4］。近年來研究表明，CD44v6的異常表達(dá)與多種人體惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)［5］。VEGF是迄今為止發(fā)現(xiàn)的特異性最高、作用最強(qiáng)的血管生長因子［6］。VEGF的生物學(xué)功能包括增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、刺激新血管生成并增加血管通透性，同時還促進(jìn)腫瘤淋巴管生長，維持血管正常狀態(tài)和結(jié)構(gòu)的完整性，進(jìn)而引起腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示胃癌組織中CD44v6和VEGF表達(dá)顯著高于癌旁組織，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的胃癌組織中CD44v6和VEGF表達(dá)均顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ⅲ～Ⅳ期者顯著高于Ⅰ～Ⅱ期(P均＜0.05)。說明CD44v6和VEGF在胃癌細(xì)胞生長侵襲及轉(zhuǎn)移中起著重要作用，其表達(dá)水平與胃癌臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。另外我們發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中MMP-9、CD44v6表達(dá)與VEGF表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.331、0.421，P ＜0.05)，提示 MMP-9、CD44v6與VEGF關(guān)系密切，三者在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要的協(xié)同作用。

［1］任偉，禹立霞，錢曉萍.胃癌患者血清VEGF、MMP-2的表達(dá)及其與浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)系［J］.腫瘤學(xué)雜志，2008，14(10):824-825.

［2］Joo M，Lee HK，Kang YK.Expression of E-cadherin，beta-catenin，CD44s and CD44v6 in gastric adenocarcinoma:relationship with lymphnode metastasis［J］.Anticancer Res，2003，23(2B):1581-1588.

［3］曾益新.腫瘤學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:244-258.

［4］谷化平，尚培，倪燦榮.CD44v6和E-cadherinherin表達(dá)與結(jié)腸癌浸潤轉(zhuǎn)移關(guān)系［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2003，19(3):270-271.

［5］Kurozumi K，Nishida T，Nakao K，et al.Expression of CD44 variant 6 and lymphatic invasion importance to lymph node metastasis in gastric cancer［J］.World J Surg，1998，22(8):853-857.

［6］朱新峰，林堅(jiān).血管內(nèi)皮生長因子與腫瘤關(guān)系研究進(jìn)展［J］.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，23(2):333-335.