復(fù)方中草藥抗真菌研究進(jìn)展

張 平，劉海燕

（成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)技術(shù)學(xué)院，成都 611130）

近年來，由于各種激素、抗生素和新型免疫抑制劑的臨床使用，真菌病的發(fā)病率逐年升高，但現(xiàn)在臨床上多使用的是西藥抗真菌藥物，這類藥物普遍存在著易產(chǎn)生耐藥性、療效一般、對(duì)機(jī)體毒性大及危害公共安全等問題[1]。目前，學(xué)者的研究方向是尋找高效、廣譜、低毒的抗真菌新藥，特別是從中草藥中尋找新型抗真菌藥物。中草藥具有價(jià)格低廉、毒副作用小、來源廣、不易出現(xiàn)耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，使研發(fā)臨床實(shí)用的抗真菌中草藥具備良好前景。從20世紀(jì)初開始，我國(guó)學(xué)者從中草藥中尋找抗真菌藥物，至今已發(fā)現(xiàn)300余種中草藥臨床表現(xiàn)有抗真菌的效果，同時(shí)進(jìn)行了化學(xué)成分及藥物機(jī)理的研究。

1 體外抗真菌實(shí)驗(yàn)

中草藥抗真菌的機(jī)理較復(fù)雜，研究顯示，有些中草藥單味藥并無明顯的抗真菌療效，但中草藥復(fù)方卻表現(xiàn)出顯著的臨床效果。中草藥抑菌實(shí)驗(yàn)常應(yīng)用于中草藥的篩選、提取過程的追蹤、抑菌譜效價(jià)的測(cè)定及臨床藥敏實(shí)驗(yàn)等工作中。中草藥的體外抑菌實(shí)驗(yàn)，目前的實(shí)驗(yàn)方法主要有定性的瓊脂擴(kuò)散法、定量測(cè)定的稀釋法。在試管內(nèi)中草藥抗真菌實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意選用不同的培養(yǎng)基及調(diào)整培養(yǎng)基的pH；應(yīng)用平板瓊脂擴(kuò)散法應(yīng)注意平板中培養(yǎng)基的含量；擴(kuò)大供檢真菌的種類及株數(shù)；注意接種量及接種真菌后判斷結(jié)果的時(shí)間等[2]。由于中草藥粗提物中含有多種化學(xué)成分，成分與藥理作用復(fù)雜，并且受多種因素影響，應(yīng)用體外半固體藥基法篩選抗真菌中藥簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)，是很便捷的初步篩選方法。宮毓靜等觀察164種中草藥95%乙醇提取物對(duì)白色念珠菌、啤酒酵母和威克海姆原藻3種真菌的作用，并對(duì)其中抑菌效果明顯的中草藥中的主要成分進(jìn)行抗真菌藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明，22種中草藥乙醇提取物對(duì)1種或幾種真菌顯示較強(qiáng)的抑制作用，單體化合物對(duì)3種真菌無顯著抑制作用，土槿皮、牡丹皮95%乙醇粗提物對(duì)3種真菌均有較強(qiáng)的抑制作用[3]。多數(shù)研究者認(rèn)為試管稀釋法是一種比較好的中草藥抑菌實(shí)驗(yàn)方法，但由于大多數(shù)中草藥制劑往往含有色素和雜質(zhì)，本身帶有顏色，不易用肉眼直接辯明被檢測(cè)藥物抑菌效價(jià)，用分光光度計(jì)測(cè)定結(jié)果也不準(zhǔn)確，所以要從各實(shí)驗(yàn)管中取出一接種環(huán)轉(zhuǎn)種瓊脂培養(yǎng)基，再經(jīng)37℃恒溫培養(yǎng)24 h后，觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)加以確定其MIC和MBC[4]。楊國(guó)晶等實(shí)驗(yàn)證實(shí)，10%和20%中草藥復(fù)方苦槿霜抑菌效果相當(dāng)，顯著優(yōu)于5%復(fù)方苦槿霜的抑菌效果（P＜0.05），復(fù)方苦槿霜的提取配方是白蘚皮、川芍、苦參、土槿皮、黃柏、地膚子、兒茶，兩種濃度的苦槿霜對(duì)皮膚常見致病性真菌（石膏樣毛癬菌、紅色毛癬菌、絮狀表皮癬菌）都有一定的抑制作用，同時(shí)與達(dá)克寧的抑菌效果相當(dāng)（P＞0.05）[5]。林靜瑜等報(bào)道，癬藥膏的提取配方是丁香、蜂房等8味中草藥組成，研究表明，濃度＞5%對(duì)石膏樣毛癬菌、紅色表皮癬菌、絮狀表皮癬菌均有明顯的抗菌作用，1%濃度的提取液僅對(duì)石膏樣毛癬菌有一定的抗菌作用[6]。郭建輝等發(fā)現(xiàn)，癬凈散（地膚子、土荊皮、白蘚皮、苦參、金銀花、夏枯草、丁香）對(duì)紅色毛癬菌、絮狀表皮癬菌、石膏樣小孢子菌具有較強(qiáng)的抑制作用[7]。

2 中藥復(fù)方對(duì)真菌感染動(dòng)物模型的臨床治療效果

在新型抗真菌藥物的研發(fā)中，一般是先在實(shí)驗(yàn)室的試管中實(shí)驗(yàn)，對(duì)有一定效果的藥物再制造動(dòng)物真菌病的模型進(jìn)行在體臨床實(shí)驗(yàn)。但在試管內(nèi)實(shí)驗(yàn)所取得的結(jié)果與其在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所取得療效差別較大，如碘化鉀在試管實(shí)驗(yàn)中無明顯的抗真菌效果，而臨床試驗(yàn)中顯示其對(duì)某些深部真菌病具有臨床治療效果[8]。在實(shí)驗(yàn)室試管實(shí)驗(yàn)中，十全大補(bǔ)湯對(duì)白色念珠菌無抗真菌效果，但能明顯延長(zhǎng)感染白色念珠菌小鼠的壽命。多年臨床證明，在實(shí)驗(yàn)室試管中有效的藥物進(jìn)行在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)未必有效，相反某些在試管實(shí)驗(yàn)中無明顯抗真菌作用的藥物在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)則表現(xiàn)出一定的臨床治療效果。因此，動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)是考察中草藥對(duì)真菌病的療效及研究其耐藥性、毒副性、吸收等情況不可缺少的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。

淺部真菌病和深部真菌病是現(xiàn)在學(xué)者們應(yīng)用廣泛的兩類動(dòng)物真菌病模型。皮膚癬病和皮膚念珠菌病模型是淺部真菌病模型的代表，多數(shù)學(xué)者是利用皮膚癬病模型進(jìn)行研究。實(shí)際研究中多用石膏樣毛癬病感染豚鼠制造皮膚癬病動(dòng)物模型，同時(shí)又根據(jù)造模方法不同，將其分為皮膚創(chuàng)傷感染法、爪間感染法和穿刺感染法等，前兩者是以病灶的病理變化程度和病灶皮膚屑真菌培養(yǎng)的轉(zhuǎn)陰率為依據(jù)，后者是以病灶發(fā)病過程中直徑的變化大小為依據(jù)。珠菌病模型、隱球菌病模型和曲菌病模型是深部真菌病模型的代表，實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)主要是造模動(dòng)物的平均存活天數(shù)、生存率、靶器官或血液中活菌的數(shù)量和靶器官病變情況等。多數(shù)研究者認(rèn)為，在使用淺部真菌病模型研究藥物療效時(shí)，爪間感染法和皮膚創(chuàng)傷感染法所致的動(dòng)物感染程度較重，穿刺感染法所致的動(dòng)物感染程度相對(duì)較輕，如選用爪間感染法和皮膚創(chuàng)傷感染法等研究中草藥的臨床效果，可考慮用病灶的病理變化程度作為判定的指標(biāo)，若考慮用感染病灶皮膚屑真菌培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰率作為判定的指標(biāo)，則判斷較為困難，但選用動(dòng)物感染程度相對(duì)較輕的穿刺感染法對(duì)療效一般的抗真菌中草藥也能表現(xiàn)出一定的陽性結(jié)果。實(shí)驗(yàn)研究顯示，在研究中草藥治療內(nèi)臟真菌病時(shí)多利用動(dòng)物深部真菌病模型進(jìn)行，較選用生存率為實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，選擇用動(dòng)物的靶器官病變情況、平均存活天數(shù)、靶器官或血液中活菌的數(shù)量作為判斷中草藥療效的指標(biāo)則更易表現(xiàn)陽性結(jié)果。曾勇等報(bào)道，消炎抗癬霜的提取配方是蛇床子、冰片、樟腦等中草藥組成，消炎抗癬霜對(duì)須癬毛癬菌和石膏樣小孢子菌感染的豚鼠體癬模型的治療效果，臨床顯示在2周后觀察到消炎抗癬霜能夠提高真菌培養(yǎng)的轉(zhuǎn)陰率，同時(shí)能減輕真菌所致豚鼠皮膚病變程度和真菌的鏡檢檢出率[9]。梁君兒等試驗(yàn)證實(shí)，使用由丁香、黃連、黃柏、薄荷等7味藥制成的香荷藥條治療大白兔白色念珠菌陰道炎，香荷藥條能有效抑制白色念珠菌的生長(zhǎng)，使大白兔陰道中的白色念珠菌的轉(zhuǎn)陰率與達(dá)克寧栓無顯著性差異（P＞0.05）[10]。

3 復(fù)方中草藥治療真菌感染的臨床觀察

楊國(guó)晶等研究復(fù)方苦槿液（土槿皮15 g、川芎15 g、苦參15 g、黃柏15 g、白鮮皮15 g、地膚子15 g、兒茶10 g，加水1 200 mL，先以武火煎沸后用文火煎10 min，再用雙層紗布過濾后濃縮出藥液1 000 mL，即為10%復(fù)方苦槿液）治療皮膚淺部真菌病患者98例，經(jīng)1～2個(gè)療程后痊愈78例（79.7%），顯效14例（14.3%），有效6例（6.0%），無效0，愈顯率94%。對(duì)照組40例，經(jīng)1～2個(gè)療程治療后痊愈20例（50%），顯效12例（30.0%），有效 5例（12.5%），無效 3例（7.5%），愈顯率80%，兩組療效比較輕卡方檢驗(yàn)有顯著性差異（P＜0.05），且均未出現(xiàn)不良反應(yīng)，說明復(fù)方在臨床上對(duì)紅色毛癬菌等有較強(qiáng)的抑制作用[11]。劉慶彤等研究表明，由兒茶、茵陳、冰片、石菖蒲等制成的真菌Ⅰ號(hào)、由橘紅、茯苓、黃芪、菟絲子、山豆根、百部、炒黃芩等制成的真菌Ⅱ號(hào)和由茵陳、白術(shù)、太子參、黃苠、炒黃連等制成真菌Ⅲ號(hào)合劑的療效機(jī)制在于提高機(jī)體自身的免疫力和有抑制真菌生長(zhǎng)，3個(gè)合劑在治療肺念珠菌病、念珠菌性口腔炎和念珠菌性腸炎都有肯定的療效[12]。

4 中草藥活性成分的抗真菌作用

4.1 蛋白質(zhì)類

天麻對(duì)許多植物致病真菌具有較強(qiáng)的體外抑制作用，實(shí)驗(yàn)從中草藥天麻中分離到的一種具有廣譜抗真菌活性的蛋白質(zhì)。

4.2 萜類

β-2-松油烯、姜黃醇等中草藥有效成分具有優(yōu)良的抗真菌作用與真菌細(xì)胞的不同部位作用所呈現(xiàn)出來額不同的生物活性有關(guān)[13]。

4.3 生物堿類

生物堿是中草藥中重要的有效成分，存在于生物體內(nèi)的含氮堿性化合物。小檗堿可抑制自色念珠菌等生長(zhǎng)和繁殖，紫檀芪、自鮮堿和澳洲茄胺致真菌細(xì)胞RNA和DNA的含量發(fā)生改變而發(fā)揮其抑菌的作用。

4.4 脂肪類化合物

脂肪類化合物主要是長(zhǎng)鏈碳烷和脂肪酸。莪術(shù)的干燥根莖含有抑制常見皮膚癬菌和某些深部感染真菌繁殖生長(zhǎng)的脂肪類物質(zhì)，抗菌實(shí)驗(yàn)表明，其對(duì)曲霉屬和青霉屬具有抗菌活性，實(shí)驗(yàn)證實(shí)在莖皮中分離出3種簡(jiǎn)單的脂肪類化合物。

4.5 其 他

張文娟研究顯示，肉桂醛有明顯的抗黃曲霉作用，進(jìn)一步對(duì)肉桂醛的抗黃曲霉作用及超微結(jié)構(gòu)的研究中發(fā)現(xiàn)，肉桂醛的抗菌機(jī)理是通過破壞真菌細(xì)胞壁，使藥物滲入細(xì)胞內(nèi)，破壞細(xì)胞器而起強(qiáng)大的殺菌作用[14]。

5 小結(jié)

開發(fā)高效低毒的抗真菌藥物是我們追求的目標(biāo)，通過臨床治療真菌病和真菌感染動(dòng)物模型研究來開展中草藥復(fù)方的研發(fā)，發(fā)現(xiàn)臨床療效確切、價(jià)格低廉、毒副作用小和公共安全性高的抗真菌中草藥復(fù)方，為創(chuàng)制新的臨床抗真菌藥物奠定基礎(chǔ)。

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