靈芝酸的研究進展

馬友龍， 張學(xué)成， 祁海艷， 胡大為

(承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 河北 承德 067000)

靈芝［Ganodermalucidum(Curtis：Fr)Karst］是一種珍貴的藥用真菌，屬于擔(dān)子菌門(Basid iomycoya)，靈芝科(Ganodermataceae)，靈芝屬(Ganoderma P.karst)。其中以靈芝(G.lucidum)(又名紅芝、赤芝等)和紫芝(G.japonicum)(即中國靈芝)的藥理價值最高，被視為珍貴的中藥材［1］。直至20世紀(jì)80年代，Kutoba等［2］首次從靈芝中分離得到三萜類靈芝酸A、B以來，有關(guān)靈芝酸的分離、純化及藥理活性研究一直是靈芝研究的重要內(nèi)容，研究表明靈芝酸有強烈的藥理活性，有止痛、鎮(zhèn)靜、抑制組織胺釋放、解毒、保肝、毒殺腫瘤細胞等功能，是靈芝的主要有效成分之一。本文僅對其組成、結(jié)構(gòu)、藥理活性等作一綜述。

1 靈芝酸的組成、結(jié)構(gòu)

Kutoba等［2］在1982年首次從靈芝的子實體中分離得到三萜類靈芝酸A(ganoderic acid A)和靈芝酸B(ganoderic acid B)，1988年從靈芝屬中分離得到103種三萜類新化合物。靈芝酸的前體物質(zhì)是由二分子的焦磷酸合歡酶(FPP)尾接尾縮合成前鯊烯酯，經(jīng)閉環(huán)轉(zhuǎn)位成各種三萜類化合物，為高度氧化的羊毛甾烷類衍生物，按分子中碳原子數(shù)可分為C24，C27，C30三大類。靈芝酸的結(jié)構(gòu)中，環(huán)上的雙鍵大多位于△8(9)位，大部分在C11和C21位有羰基，而且在C3、C7和C15位也大多被羰基或羧基所取代。而在三萜醇、醛和過氧化物的結(jié)構(gòu)中環(huán)上大多存在兩個不飽和雙鍵，其位置在△7(8)和△9(11)位，C11和C23位也不存在羰基且環(huán)上的取代基明顯減少。根據(jù)所含功能團和不同側(cè)鏈可分為靈芝酸(Ganodericacid)，赤芝酸(Lucidericacid)，靈芝醇(Ganoderiol)，靈芝內(nèi)酯(Ganolactone)等其基本骨架。

2 靈芝酸的藥理活性

2.1 降低膽固醇：靈芝酸可抑制胃腸道吸收食物中的膽固醇，同時抑制膽固醇合成過程中的限速酶－3－羥－甲戊二酸單酰輔酶A(HMG－CoA)還原酶，并因此而抑制膽固醇合成。

2.2 護肝排毒作用：Hirotani等［3］的藥理學(xué)實驗認為G.capense中的靈芝酸提取物能增強肝功能，加強其解毒作用，促進肝炎小鼠肝的再生，降低甘油三酯的合成;楊依珍等研究證明，靈芝三萜類化合物對小鼠急性肝障礙的排除有促進作用。

研究表明［4］，靈芝總?cè)艷T和其組分GT2均可明顯降低模型動物的血清ALT和肝臟TG含量，對動物肝損傷具有不同程度的減輕，表明靈芝三萜類化合物GT和GT2均有明顯的保肝作用。章國良和林志彬(1998)報道，肝細胞在體外可經(jīng)特異性細胞因子及脂多糖(LPS)協(xié)同誘導(dǎo)，持續(xù)大量地生成NO。靈芝三萜類可能由于抑制了這種誘生型NO的生成而抑制了ALT活力，提示靈芝三萜類成分的肝保護作用可能與其抑制NO生成有關(guān)。

2.3 抑制組胺釋放：Kohda等［5］報道靈芝酸C和靈芝酸D在體外對Con A誘導(dǎo)的大鼠肥大細胞釋放組胺有抑制作用，藥物濃度在0.4μg/mL時抑制率分別為30%和15%。

2.4 鎮(zhèn)靜、止痛：Koyama等［6］經(jīng)分離提純得到4個具有鎮(zhèn)痛活性的靈芝三萜類化合物：靈芝酸A，B，G和H。能夠減少由乙酸引起的小鼠扭體反應(yīng)，按劑量3－5mg/kg給藥可產(chǎn)生較好的鎮(zhèn)痛效果。

2.5 抗艾滋病病毒作用：EI－Mekkawy等［7］從靈芝子實體甲醇提取物中分離得到一種高度氧化的三萜類化合物，命名為Canodericacid α，同時得到的12種三萜類化合物中部分具有抗人獲得性免疫缺陷綜合癥病毒(艾滋病病毒)HIV－1型病毒的特性。Min等［8］從靈芝孢子中分離出 Canodericacid β，Canodericacid β 與靈芝酮二醇(Ganodermanondiol)、靈芝酮三醇和赤靈芝酸A均能顯著抑制HIV－1型蛋白酶的活性。

2.6 抗腫瘤作用：Gao等［9］從靈芝子實體中分離出十種羊毛甾烷型三菇類化合物，經(jīng)藥理證實，lucialdehydes B，lucialdehydes C，ganodermanonol和 ganodermanondiol對Lewis型肺癌細胞(LLC)，T－47D細胞以及惡性毒瘤5180細胞具有細胞毒作用;其中l(wèi)ucialdehydes C 對 LLC，T－47D，S－180 細胞和 Meth－A 肉瘤細胞的殺傷力最強，Wu等［10］從靈芝子實體乙醇提取液分離出六種三菇類化合物，藥理學(xué)實驗表明，lucidenic acid N，lucidenic acid A和靈芝酸(ganoderic acid)E對肝癌細胞Hep G2和Hep G2.2.15及腫瘤細胞P－338具有顯著的細胞毒作用。

結(jié)合文獻，已知靈芝酸抗腫瘤作用機制通過以下途徑：①免疫調(diào)節(jié)作用，現(xiàn)代研究表明［11］，機體抗腫瘤機理主要依賴于細胞免疫功能，而擔(dān)負細胞免疫功能的細胞主要是體內(nèi)的T細胞和NK細胞。NK細胞是一種不依賴胸腺、抗體和補體就能直接殺傷腫瘤的細胞，其活性的增加可抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。NK細胞在機體防御及腫瘤監(jiān)視中起重要作用。NK細胞對敏感靶細胞的殺傷效應(yīng)不受靶細胞是否表達MHC的影響。當(dāng)予以生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑全身或局部治療或在病毒感染期間，實體組織中NK細胞明顯增多，在監(jiān)視體內(nèi)微環(huán)境并干涉腫瘤的發(fā)展起到重要作用。靈芝酸發(fā)酵液抗腫瘤作用與激活NK細胞有著密切關(guān)系。許多因子如IL－2、IFN－γ可激活NK細胞殺傷腫瘤靶細胞，活化的NK細胞可釋放許多細胞因子如 IFN－γ、IL－2、TNF－α、GM－CSF，呈正性調(diào)節(jié)作用，調(diào)節(jié)巨噬細胞的功能擴大抗瘤譜。另外，NK細胞是獲得性細胞免疫的核心調(diào)節(jié)細胞，腫瘤浸潤的NK細胞(TNK)對產(chǎn)生腫瘤特異的CTL至關(guān)重要。②抑制拓撲異構(gòu)酶的活性，陳陵際等［12］最近研究表明，靈芝精粉和孢子粉混合物(MLGLGS)對拓撲異構(gòu)酶(topoisomerases，TOPO)Ⅰ和Ⅱ有明顯的酶活性抑制作用，由于DNA的超螺旋程度影響著機體的活動，而拓撲異構(gòu)酶的作用正是調(diào)控DNA的空間構(gòu)型，由此DNA拓撲異構(gòu)酶已成為抗腫瘤藥物作用的重要靶點。因此MLGLGS對TOPOⅠ和TOPOⅡ的抑制可能是其抑制腫瘤細胞生長的作用機制之一。③對蛋白金合歡酯轉(zhuǎn)移酶的抑制作用，位于ras癌蛋白羧基末端四肽中的半胱氨酸殘基，可在蛋白金合歡酯轉(zhuǎn)移酶(FPT)的催化下實現(xiàn)蛋白翻譯后的金合歡酯化修飾，該過程為ras癌蛋白的細胞轉(zhuǎn)化和細胞膜連接的必需步驟。已證實FPT抑制劑能抑制ras依賴的細胞轉(zhuǎn)化。Ras原癌基因家族編碼Mr21000蛋白質(zhì)，野生型和突變型ras需要定位在質(zhì)粒膜上才能表現(xiàn)出相應(yīng)的生物學(xué)活性，這一過程伴隨有金合歡酯殘基的附著。許多蛋白質(zhì)包括很多小分子的GTP結(jié)合蛋白的羧基末端表現(xiàn)為戊二烯酯化修飾，但是 ras基因家族成員(ki－ras，Ha－ras和 N－ras)，rho B，核纖層蛋白A和B，轉(zhuǎn)運蛋白和其他幾種蛋白卻表現(xiàn)為金合歡酯化修飾［13］。Lee等分離出靈芝酸A和C，它們是FPT的底物法尼基焦磷酸的競爭性抑制物，因此對FPT有抑制作用。④誘發(fā)細胞凋亡，細胞凋亡又稱程序性細胞死亡(programmed cell death，PCD)，是細胞受到生理或病理信號刺激后通過啟動自身內(nèi)部機制，主要是通過內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶激活而發(fā)生的細胞死亡過程［14］。是一種不同于細胞壞死的，由細胞內(nèi)的基因編制程序控制的細胞生理性死亡方式。靈芝能提高機體免疫功能，靈芝多糖和靈芝總提取物都能夠刺激機體產(chǎn)生干擾素－γ(IFN－γ)和腫瘤壞死因子α，誘導(dǎo)癌細胞凋亡［15］。⑤抑制癌細胞端粒酶，端粒是染色體末端的一段特殊結(jié)構(gòu)，隨著細胞的不斷分裂，端粒逐漸縮短。端粒長度一旦縮短到一定水平，細胞就會衰老死亡，這是正常的細胞生命周期。癌細胞中含有一種叫做端粒酶的核糖核蛋白，它能保護端粒在細胞分裂過程中不被損耗，使癌細胞具有無限增殖能力。上海大學(xué)生命科學(xué)院用聚丙酰胺凝膠電泳檢測端粒酶活性，結(jié)果表明，“中華靈芝寶”對肝癌細胞端粒酶具有明顯抑制作用。

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