EB病毒、巨細(xì)胞病毒與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究

劉金祿 王蕾 何曉峰 李采青 盧成 韓旭穎

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是以侵犯全身關(guān)節(jié)滑膜為主的慢性自身免疫性疾病，其主要特征為滑膜細(xì)胞過(guò)度增殖、滑膜細(xì)胞激活以及大量血管翳形成，造成骨、軟骨侵蝕性破壞。其原因不明，可能與遺傳、感染、內(nèi)分泌紊亂等有關(guān)。近年來(lái)，RA的病毒病因?qū)W受到高度重視。其中EB病毒、巨細(xì)胞病毒在RA發(fā)病中的作用一直是個(gè)有爭(zhēng)議的問(wèn)題。有人認(rèn)為EB病毒、巨細(xì)胞病毒與RA的發(fā)病有關(guān)。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)EB病毒-DNA、巨細(xì)胞病毒-DNA載量。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年2月至2010年10月我院收治的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者79例，其中男24例，女55例;年齡21～78歲，平均年齡56歲。診斷均符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)1987年修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)。以上患者均系我院住院或門診患者。

1.2 主要試劑 熒光定量檢測(cè)EB病毒、巨細(xì)胞病毒試劑盒購(gòu)于中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司。

1.3 方法 熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)EB病毒、巨細(xì)胞病毒DNA含量，按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，羅氏LightCyclerTM全自動(dòng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上機(jī)檢測(cè)。

2 結(jié)果

79例RA患者中類風(fēng)濕因子(RF)陽(yáng)性58例，抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(CCP)陽(yáng)性28例。RF和CCP陽(yáng)性患者中的32例淋巴細(xì)胞、79例血漿、3例關(guān)節(jié)液中均未檢測(cè)到EBV-DNA，從RA患者中的79例血漿、3例關(guān)節(jié)液中均未檢測(cè)到CMV-DNA，健康對(duì)照組也檢測(cè)到EBV-DNA和CMV-DNA。

3 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是以常見的慢性多關(guān)節(jié)累及為主的一種全身自身免疫性疾病。目前醫(yī)學(xué)界認(rèn)為其發(fā)病與遺傳、免疫及環(huán)境有關(guān)。近年來(lái)有些學(xué)者認(rèn)為與病毒、細(xì)菌等感染有關(guān)，原因不明。

EB病毒在人類普遍易感，曾毅等［1］報(bào)道我國(guó)正常人87～94%感染EB病毒，EB病毒感染機(jī)體后，就終生停留在B淋巴細(xì)胞中，多數(shù)時(shí)期是靜止的，偶爾可以再次激活和復(fù)制。一般來(lái)講，普通人感染EB病毒，體內(nèi)血清抗VCA-IgG抗體陽(yáng)性，該抗體可在機(jī)體內(nèi)長(zhǎng)期存在，檢測(cè)此抗體無(wú)臨床診斷意義。而VCA-IgA抗體是一種較特異的抗體，研究發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌和傳染性單核細(xì)胞增多癥患者血清中有較高的陽(yáng)性率，分別為82%和94%，正常人僅為0～6%［1］，因而認(rèn)為VCA-IgA抗體具有診斷價(jià)值。我們的前期試驗(yàn)，也利用VCA-IgA抗體檢測(cè)EB病毒與RA的臨床關(guān)系，54例RF中VCA-IgA抗體陽(yáng)性12例，28例有CCP抗體患者中8例VCA-IgA抗體陽(yáng)性。結(jié)果表明RA患者VCA-IgA抗體陽(yáng)性率與健康對(duì)照組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明EB病毒與RA有明顯的相關(guān)性。

巨細(xì)胞病毒屬皰疹病毒科，是新生兒巨細(xì)胞包涵體病的病原體，成人可引起單核細(xì)胞增多癥，成人感染多為隱性感染，隱性感染巨細(xì)胞病毒在有害因素的刺激下，可被激活引起多系統(tǒng)、多臟器病變。其感染可能也與RA發(fā)病有關(guān)。1993年Tsuchiya等［2］報(bào)道，在約50%RA患者血清中存在高滴度抗人巨細(xì)胞病毒(HCMV)-65000蛋白抗體。我們前期試驗(yàn)58例RF陽(yáng)性患者中巨細(xì)胞病毒IgM抗體陽(yáng)性12例，28例CCP抗體陽(yáng)性患者中CMV-IgM抗體陽(yáng)性8例，正常對(duì)照組CMV-IgM抗體陽(yáng)性1例。RA患者CMV-IgM抗體陽(yáng)性率明顯高于正常對(duì)照組人群且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明CMV-IgM與RA有明顯的相關(guān)性。

但EB病毒、巨細(xì)胞病毒與RA是否有直接因果關(guān)系，國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果結(jié)論差異很大。上述血清學(xué)檢測(cè)不能直接反映EB病毒、巨細(xì)胞病毒在人體內(nèi)的狀況，PCR法檢測(cè)該兩種病毒DNA載量可以為我們分析兩種病毒在RA中的作用提供幫助。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-PCR)室檢測(cè)EB病毒、巨細(xì)胞病毒DNA載量非常敏感的方法。Alvarez-Lafuente等［3］利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)外周血中EB病毒-DNA載量明顯高于對(duì)照組;Toussirot等［4］檢測(cè)外周血和滑膜液中EB病毒-DNA載量明顯高于對(duì)照組;國(guó)內(nèi)廣東尹志華等［5］熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)外周血中EB病毒-DNA載量明顯高于對(duì)照組;而Mousavi等［6］報(bào)道在滑膜中CMV-DNA與EBV-DNA的檢出率與對(duì)照組無(wú)差異;但許多學(xué)者支持這樣一個(gè)觀點(diǎn)，不是EB病毒直接感染關(guān)節(jié)滑膜所致［7］。是細(xì)胞免疫異常在RA發(fā)病中發(fā)揮作用。國(guó)內(nèi)張愛宏等［8］用通用引物PCR技術(shù)檢測(cè)患者外周血標(biāo)本CMV-DNA與EBV-DNA的檢出率與健康對(duì)照組均無(wú)差異。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)本地區(qū)患者血漿中EB病毒DNA載量，血清中的CMV-DNA載量，均未檢測(cè)到此兩種病毒DNA，說(shuō)明本地區(qū)RA與EB病毒、巨細(xì)胞病毒感染無(wú)直接關(guān)系。

1 曾毅，Nicolas JC，Schwab G，等.Epstein-Barr病毒相關(guān)疾病的 IgG/Z抗體檢測(cè).病毒學(xué)報(bào)，1992，8:218-222.

2 Tsuchiya N，Murayama T，Yoshinoya S，et al.Antibodies to human cy-tomegalovirus 65-kilodalton Fc binding protein in rheumatoid arthritis:idio-typic mimicry hypothesis of rheumatoid factor production.Autoim-munity，1993，15:39-48.

3 Alvarez-Lafuente R，F(xiàn)emandez-Gutierrez B，De Miguel S，et al.Potential relationship between herpes viruses and rheumatoid arthritis:analysis with quantitative real time polymerase chain reaction.Ann Rheum Dis，2005，64:1357-1359.

4 Toussirot E，Roudier J.Pathophysiological links between rheumatoid arthritis and the Epstein-Barr virus:an update.Joint Bone Spine，2007，74:418-426.

5 尹志華，葉志中，羅秀霞，等.EB病毒與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性分析.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，9:3294-3296.

6 Mousavi JM，Bostrom L，Lovmark C，et al.Infrequenent dedection of cytomegalovirus and Epstein-Barr virus DNA in synovial membrane of patients withs rheumatoid arthritis.Rheumatol，1998，25:623-628.

7 趙建宏.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎研究的新進(jìn)展.濟(jì)南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，25:80-81.

8 張愛宏，劉若英.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血皰疹病毒DNA的檢測(cè)及其Th亞群激活狀況研究.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2002，6:183-185.