COX-2和Survivin在葡萄胎組織中的表達(dá)及意義

底建敏 崔文華 蔣乃 孫桂蘭 郭影

葡萄胎是一種多發(fā)于育齡女性且嚴(yán)重威脅女性生命和健康的嚴(yán)重疾病，由于多種因素或治療不當(dāng)葡萄胎可以轉(zhuǎn)化為侵蝕性葡萄胎或絨毛膜癌，嚴(yán)重影響患者的治愈率和生存率。在某些腫瘤細(xì)胞中環(huán)氧合酶-2(COX-2)過度表達(dá)，Survivin在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在幾乎所有被研究的腫瘤組織中呈高表達(dá)，本文通過檢測COX-2和Survivin在葡萄胎組織中的表達(dá)，探討其在葡萄胎發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2000年3月至2008年10月河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院婦產(chǎn)科第一次清宮術(shù)后葡萄胎組織標(biāo)本60例，所有標(biāo)本均為首次清宮標(biāo)本并經(jīng)HE染色病理檢查確診?；颊咂骄挲g32.5歲，平均孕周10.5周，所有葡萄胎患者均進(jìn)行2年隨訪，其中17例發(fā)現(xiàn)惡變(葡萄胎惡變組)。取同期正常早期妊娠行人工流產(chǎn)術(shù)的絨毛組織標(biāo)本20例作為對照組，年齡18～36歲，平均年齡30.5歲，平均孕周8.5周。采集患者的標(biāo)本迅速置入液氮中冷凍，然后放入－70℃冰箱保存。

1.2 免疫組織化學(xué)PV-6000法 采用免疫組化PV-6000法檢測COX-2和Survivin的表達(dá)，鼠抗人COX-2單克隆抗體即用型抗體購自北京中杉生物技術(shù)有限公司，兔抗人Survivin多克隆抗體為santa cruze公司產(chǎn)品，由北京中杉生物技術(shù)有限公司分裝。PBS代替一抗做為陰性對照，實驗步驟嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。染色強(qiáng)度評分參照formwitz陽性細(xì)胞半定量分級評分方法［1］:每張切片選擇有代表性的區(qū)域，并避開切片周邊區(qū)域，隨機(jī)檢測5視野(倍數(shù)×400)，根據(jù)陽性細(xì)胞百分率，0為0分，＜25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分;按顯色深淺無顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞百分率及顯色深淺評分相乘最后得分:0～1分為陰性(－);2分為弱陽性(+);3～4分為陽性(++);5～6分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，Survivin及COX-2表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2蛋白在葡萄胎組織中的表達(dá) 所有的標(biāo)本COX-2蛋白表達(dá)定位于滋養(yǎng)細(xì)胞胞漿內(nèi)。COX-2蛋白陽性表達(dá)率在對照組、葡萄胎未惡變組及葡萄胎惡變組中分別為35.0%(7/20)、58.1%(25/43)和 94.1%(16/17)。對照組與葡萄胎未惡變組表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);葡萄胎未惡變組及葡萄胎惡變組表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);對照組與葡萄胎惡變組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

2.2 Survivin蛋白在葡萄胎組織中的表達(dá) Survivin陽性染色定位于細(xì)胞漿內(nèi)及細(xì)胞核內(nèi)，以細(xì)胞漿為主。在對照組、葡萄胎未惡變組以及葡萄胎惡變組中的陽性表達(dá)率分別為25.0%(5/20)、41.9%(18/43)和76.5%(13/17)。對照組與葡萄胎未惡變組表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);葡萄胎未惡變組及葡萄胎惡變組表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);葡萄胎惡變組Survivin蛋白表達(dá)水平高于對照組(P＜0.01)。

2.3 COX-2與Survivin在葡萄胎組織中表達(dá)的相關(guān)性 COX-2和Survivin在葡萄胎的發(fā)生發(fā)展過程中呈正相關(guān)(r=0.361，P＜0.05)。

3 討論

COX是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)變成前列腺素的限速酶，它將花生四烯酸代謝成各種前列腺素產(chǎn)物從而參與維持機(jī)體的各種生理和病理功能。COX有2種同工酶:COX-1和COX-2。研究發(fā)現(xiàn)COX-1和COX-2在女性生殖系統(tǒng)中都有表達(dá)，COX-1基因缺陷的雌鼠生殖能力沒有影響［2］，但表現(xiàn)為COX-2在種植前期代償性表達(dá)上調(diào)［1］，而COX-2基因缺陷的雌鼠由于排卵、受精、種植和蛻膜化缺陷而致不育，從而提示COX-2與女性生殖關(guān)系密切［3］。Johansen等［4］通過 PCR方法證實COX-2存在于胎盤、絨毛和羊膜中。Slater等［5］的研究顯示COX-2 mRNA在胎膜中的表達(dá)隨孕周增加而增加，在分娩前明顯增加并與分娩的發(fā)動有關(guān)。臨床上HCG＞100 kU/L視為葡萄胎惡變的高危因素，而HCG水平對COX-2表達(dá)有上調(diào)作用。本試驗結(jié)果顯示COX-2在對照組、葡萄胎未惡變組及葡萄胎惡變組的表達(dá)率呈遞增趨勢，葡萄胎惡變組COX-2蛋白表達(dá)水平明顯高于對照組。COX-2蛋白表達(dá)增高可能通過促使滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖，抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤血管形成等機(jī)制使葡萄胎組織中的滋養(yǎng)細(xì)胞無限增殖，最后發(fā)展為侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌。

Survivin是凋亡抑制家族(IAP)的成員之一，Survivin基因在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，而在幾乎所有被研究的腫瘤組織中呈高表達(dá)［6］，是一類結(jié)構(gòu)獨特的哺乳類凋亡抑制蛋白，具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂的雙重功能［7］。研究表明葡萄胎惡變與滋養(yǎng)細(xì)胞低凋亡活性有關(guān)，Wong等［8］檢測發(fā)現(xiàn)所有葡萄胎的合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞均有凋亡發(fā)生。Shiozaki等［9］用RT-PCR、免疫組化法檢測正常胎盤組織、兩種人類絨癌細(xì)胞系(JEG23和Bewo)和一種滋養(yǎng)細(xì)胞系(tPA3021)中Survivin mRNA和蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示3種組織中均有Survivin mRNA的表達(dá)。本研究結(jié)果顯示正常絨毛及蛻膜細(xì)胞亦可見Survivin的部分陽性表達(dá)。對照組、葡萄胎未惡變組以及葡萄胎惡變組Survivin表達(dá)由弱至強(qiáng)，且葡萄胎惡變組中Survivin陽性表達(dá)率高于對照組。一方面Survivin的高表達(dá)使細(xì)胞呈低凋亡活性，破壞細(xì)胞增殖與凋亡之間的平衡，從而增強(qiáng)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵蝕性，導(dǎo)致葡萄胎向侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌的轉(zhuǎn)變。另一方面，在葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨癌的發(fā)生發(fā)展中Survivin過度表達(dá)可能促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞逃離生長監(jiān)控，使細(xì)胞生存延長，轉(zhuǎn)化突變的細(xì)胞積累并進(jìn)而參與妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

有動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，COX-2與Survivin在抑制腫瘤細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮共同促進(jìn)作用［10］。Barnes等［11］在乳腺癌研究中發(fā)現(xiàn)COX-2和Survivin蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)，認(rèn)為COX-2和Survivin雙表達(dá)是乳腺癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，COX-2和Survivin在葡萄胎的發(fā)生發(fā)展過程中呈正相關(guān)，但兩者間的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探究。

由于滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的病因不明，所以早期診斷、確定滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的性質(zhì)以便及早治療及預(yù)測病變轉(zhuǎn)歸是治療的關(guān)鍵。本研究結(jié)果顯示惡變的葡萄胎組織COX-2過度表達(dá)和Survivin高表達(dá)使細(xì)胞呈低凋亡活性在妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，二者可聯(lián)合作為反映妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病生物學(xué)行為的有效指標(biāo)，為早期診斷和治療提供新的依據(jù)。

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