HIV篩查實驗室的質(zhì)量管理

榮幸 張永旭 張海波

目前我國艾滋病流行形勢嚴(yán)峻，盡快發(fā)現(xiàn)感染者和患者、及時開展醫(yī)療救治工作是我國艾滋病防治工作的當(dāng)務(wù)之急。HIV抗體篩查是發(fā)現(xiàn)HIV病毒攜帶者或患者的重要手段。我院在2008年建立了HIV篩查實驗室。為了確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、嚴(yán)謹(jǐn)性，我HIV篩查實驗室強(qiáng)化質(zhì)量意識，嚴(yán)格遵守實驗室SOP，進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，同時還參加省室間質(zhì)評?，F(xiàn)將我室的質(zhì)量管理進(jìn)行總結(jié)分析如下。

1 建立HIV篩查實驗室SOP文件

HIV篩查實驗室SOP文件包括：①樣品的接收、登記、處理、保存和運輸；②檢測方法和步驟；③試劑使用和保存；④儀器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)；⑤質(zhì)量控制要求及程序；⑥結(jié)果解釋與報告；⑦保密程序；⑧實驗室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存；⑨不確定樣品追蹤和處理；⑩實驗室安全防護(hù)及實驗室的清理和消毒。SOP的編寫由HIV篩查實驗室工作人員起草，實驗室主任審定，每年修訂一次。所有HIV篩查實驗室工作人員都在SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容，在實驗過程中嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），不得擅自修改。

2 人員的資質(zhì)和培訓(xùn)

HIV篩查實驗室工作人員需經(jīng)過上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)。上崗培訓(xùn)內(nèi)容至少應(yīng)包括：艾滋病檢測相關(guān)基礎(chǔ)知識，艾滋病相關(guān)檢測技術(shù)及管理要求，實驗操作，質(zhì)量保證與質(zhì)量控制，生物安全。要求HIV篩查實驗室工作人員掌握相關(guān)專業(yè)知識和技能，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。HIV篩查實驗室工作人員至少每2年1次進(jìn)行在崗持續(xù)培訓(xùn)，除接受檢測基本培訓(xùn)內(nèi)容外，還要求了解相關(guān)技術(shù)、質(zhì)控及安全要求的新進(jìn)展。

3 HIV篩查實驗室的質(zhì)量管理

3.1 樣品的采集和處理 我室HIV抗體的檢測最常用的樣本是血清，根據(jù)需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5m L靜脈血，室溫下自然放置1～2h，待血液凝固、血塊收縮后再用1500～3000r/m in離心15m in，備用。采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于尖銳危險品容器里，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露。HIV篩查實驗室檢測的篩查陽性樣品應(yīng)及時送省疾控中心的HIV確證實驗室，篩查陰性樣品，保存1個月。

3.2 篩查試劑和篩查方法 HIV篩查實驗室的篩查試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑，其中酶聯(lián)免疫試劑應(yīng)批批檢合格，臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑[1]。我室的篩查方法是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。

3.3 設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn) HIV篩查實驗室應(yīng)設(shè)立常用儀器的維護(hù)及校準(zhǔn)制度，以保證檢測工作正常運轉(zhuǎn)。必須經(jīng)國家法定部門定期（每年至少1次）校準(zhǔn)的儀器包括酶標(biāo)儀/洗板機(jī)，加樣器，溫度計，高壓滅菌器。加樣器、溫濕度計須經(jīng)計量部門校準(zhǔn)。

3.3.1 酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機(jī) 每個工作日核對濾光片波長，檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。定期清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件不沾灰塵。每月檢查洗板機(jī)洗滌時各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好；負(fù)壓是否符合規(guī)定要求。每年檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點須更換；根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準(zhǔn)程序或使用校準(zhǔn)板，對濾光片的精密度進(jìn)行校準(zhǔn)并保留記錄。實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時進(jìn)行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。

3.3.2 移液器 每年至少校準(zhǔn)1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進(jìn)行校準(zhǔn)。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。

3.3.3 冰箱和孵育箱 每個工作日檢查和記錄冰箱溫度，每個工作日檢查記錄孵育箱溫度，并做好記錄。使用經(jīng)過計量部門校準(zhǔn)合格的溫度計測量冰箱和孵育箱的實際溫度。

3.3.4 生物安全柜和高壓滅菌器 每次使用前檢查儀器是否處于正常運轉(zhuǎn)狀態(tài)，并做好記錄。生物安全柜和高壓滅菌器必須每年1次請生產(chǎn)廠家校準(zhǔn)。

3.4 HIV篩查實驗室的室內(nèi)質(zhì)量控制

3.4.1 試劑盒內(nèi)部對照 試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照血清。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實驗的有效性，但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測臨床樣品時，必須有試劑盒內(nèi)部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。內(nèi)部對照結(jié)果無效，必須重新試驗。

3.4.2 室內(nèi)質(zhì)控品 我室只設(shè)置一個由省檢驗中心提供的弱陽性質(zhì)控品，S/CO值在2～4。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測的有效性，因此，每次實驗必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新試驗。

3.4.3 繪制質(zhì)控圖 質(zhì)控圖繪制步驟包括：①在常規(guī)條件下，對同一批血清連續(xù)測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差（s），超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。②將均值（x）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來。以S/CO值作縱坐標(biāo)（Y軸），每一批次試驗作橫坐標(biāo)（X軸），繪制質(zhì)控圖。③從第21次起，將每次質(zhì)控血清的檢測結(jié)果依次點入該質(zhì)控框架圖中，檢驗進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。

3.4.4 質(zhì)控規(guī)則及其使用 HIV篩查實驗室在報告實驗結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機(jī)審核結(jié)果來決定。我室應(yīng)用的是12S和13S規(guī)則。①告警（12S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出+2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。當(dāng)天的結(jié)果一般可以報告。②失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出+3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品穩(wěn)定性下降所致。③漂移：連續(xù)幾次（3～5次）外部質(zhì)控品的S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為漂移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。④趨勢：連續(xù)幾次（5～7次）外部質(zhì)控品的S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。

質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點為：出現(xiàn)1次2s范圍的變化時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。

出現(xiàn)下列情況時，應(yīng)暫停檢測查找原因：①出現(xiàn)1次超出3s范圍的變化；②連續(xù)2次出現(xiàn)同一方向超出2s范圍的變化；③連續(xù)4次出現(xiàn)同一方向的超出1s范圍的變化；④連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。

3.4.5 質(zhì)控圖的分析及失控處理 實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時，對原有外部質(zhì)控品重復(fù)測定或更換新的外部質(zhì)控品進(jìn)行測定不是最有效的方法，必須找出問題發(fā)生的原因，找出解除問題的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。

[1]中國疾病預(yù)防控制中心.全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版）[S].2009：50.