原癌基因 Pim-3蛋白表達(dá)與食管癌術(shù)后生存的關(guān)系

寇 煒 趙 晉 吳 靜 竇春江 顧巧玲 (西北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院,甘肅 蘭州 730030)

食管癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,也是我國常見的一種惡性腫瘤,甘肅省食管癌高發(fā)區(qū)域主要集中在河西地區(qū),其中以武威地區(qū)檢出率最高。而初診患者多為中晚期病人,外科手術(shù)后患者生存率也較低。為了做到對(duì)食管癌初診患者的早期診斷和判斷預(yù)后,以提高患者的存活率,有必要對(duì)食管癌的腫瘤標(biāo)記物進(jìn)行檢測。近年來癌基因絲/蘇氨酸激酶前病毒整合位點(diǎn)(Pim)家族成為研究的熱點(diǎn),其家族成員 Pim-1、Pim-2〔1〕已被證實(shí)是細(xì)胞生物通路中的關(guān)鍵分子。國內(nèi)外研究者在肝癌、胰腺癌、結(jié)腸癌領(lǐng)域〔2～4〕對(duì) Pim-3基因的研究已有較大的進(jìn)展,但在食管癌中對(duì)Pim-3基因的研究報(bào)道尚不多。本研究旨在用免疫組織化學(xué)鏈菌素-生物素-過氧化物(SP)法探討50例食管癌患者 Pim-3的表達(dá)及病理學(xué)特征與食管癌患者術(shù)后生存關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 選取我院病理室 2005年 1月至 2008年 12月 85例食管癌根治術(shù)后的標(biāo)本。全部病例均有完整臨床資料。術(shù)前均無放療、化療及其他抗癌治療史。并術(shù)后隨訪其中 50例(隨訪方式包括門診、電話隨訪以及信訪)。病理類型:均為鱗癌。所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛溶液固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,厚度4μm。山羊抗人 Pim-3多克隆抗體購自美國 Sigma公司,DAB試劑盒、SP試劑盒由北京中杉公司提供。

1.2 方法 免疫組織化學(xué)法嚴(yán)格按照S-P試劑盒進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) Pim-3陽性染色標(biāo)準(zhǔn):以細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色表達(dá)為主。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):采用雙評(píng)分半定量法評(píng)分,＜25%癌細(xì)胞陽性為 0分;25%～50%癌細(xì)胞陽性為 1分;51%～75%癌細(xì)胞陽性為 2分;＞75%癌細(xì)胞陽性為 3分。顯色度按切片中細(xì)胞顯色有無及深淺評(píng)分:細(xì)胞無顯色為 0分,淺黃色為 1分,棕黃色為 2分,棕褐色為 3分,然后將兩個(gè)評(píng)分相加,1～2分+,3～4分?,5～6分?。用 PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 各相關(guān)指標(biāo)之間進(jìn)行 Spearman等級(jí)相關(guān)分析。用 Kaplan-Meier法統(tǒng)計(jì)食管癌患者各項(xiàng)臨床指標(biāo)對(duì)其預(yù)后的影響,顯著性檢驗(yàn)采用時(shí)序檢驗(yàn)(Log-rank test)。建立Cox回歸多因素模型分析(Forward法),篩選出對(duì)食管癌預(yù)后的諸多影響因素。

2 結(jié) 果

2.1 Pim-3基因在不同組織中的表達(dá) Pim-3蛋白陽性信號(hào)呈棕黃色,主要定位于細(xì)胞質(zhì),少許定位于細(xì)胞膜;大部分癌旁組織 Pim-3蛋白呈陰性表達(dá)。

2.2 Pim-3基因表達(dá)與食管癌預(yù)后的關(guān)系 對(duì) 85例食管癌的病人隨訪 50例,其中存活 3年者為 12例,存活率 24%。隨訪者中 Pim-3陽性者 39例,存活 3年以上者 5例,存活率 12.8%,Pim-3陰性者 11例,存活 3年以上者 6例,存活率 54.5%,兩者相比有顯著的差異(P＜0.01);即:Pim-3陽性者其 3年存活率要明顯低于其陰性者。

2.3 各項(xiàng)指標(biāo)對(duì)食管癌患者預(yù)后的影響及生存分析 采用Kaplan-Meier法,統(tǒng)計(jì)食管癌患者各項(xiàng)臨床指標(biāo)對(duì)其預(yù)后的影響并繪制生存曲線分析,采用時(shí)序檢驗(yàn)(Log-rank test)發(fā)現(xiàn):食管癌患者的年齡、病理分級(jí)、臨床TNM分期、Pim-3表達(dá)、侵襲深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否是影響患者預(yù)后的重要因素。年齡小于 50歲的患者平均生存時(shí)間高于 50歲以上的平均生存時(shí)間(P＜0.05);病理分級(jí)為Ⅰ ～Ⅱ級(jí)者平均生存時(shí)間要高于Ⅲ級(jí)(P＜0.01);臨床 TNM分期中Ⅰ ～Ⅱ期的患者平均存活時(shí)間要高于Ⅲ期和Ⅳ期(P＜0.01),Ⅲ期的要高于Ⅳ期(P＜0.01);Pim-3表達(dá)陽性者,其平均存活時(shí)間低于陰性者(P＜0.01);無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的平均存活時(shí)間明顯比有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者存活時(shí)間延長(P＜0.01);另外癌組織侵襲至肌層的患者平均存活時(shí)間比侵襲至外膜層患者的平均存活時(shí)間要長(P＜0.01);同時(shí)還發(fā)現(xiàn)患者術(shù)后平均存活時(shí)間與性別、腫瘤大小、病理類型無相關(guān)性(P＞0.05)。見表 1。

2.4 Cox回歸多因素模型分析及 Pim-3基因不同表達(dá)患者的生存曲線 采用 Forward法分析:食管癌的病理分級(jí)、TNM分期、Pim-3基因表達(dá)是獨(dú)立的預(yù)后因素,其中以病理分級(jí)、Pim-3基因表達(dá)最為重要,且病理分級(jí)〔Exp(B)=3.858 8〕和 Pim-3〔Exp(B)=6.132 5〕是危險(xiǎn)因素。同時(shí),Pim-3不同基因表達(dá)明顯影響食管癌患者的生存期。見表 2,圖 1。

表1 50例食管癌患者單因素生存分析(Kaplan-Meier法)

表2 Cox回歸多因素模型分析出與預(yù)后相關(guān)的危險(xiǎn)因素

圖1 Pim-3不同表達(dá)患者的 Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

眾所周知惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多步驟進(jìn)行性發(fā)展的復(fù)雜過程,包括癌基因的異常激活和抑癌基因失活等,原癌基因絲/蘇氨酸激酶Pim家族是目前研究的熱點(diǎn)。Pim家族有 3個(gè)成員 Pim-1、Pim-2和 Pim-3,能使在細(xì)胞生長通路中起關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)分子內(nèi)的絲/蘇氨酸殘基磷酸化,從而分別在細(xì)胞增殖、分化、凋亡中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用〔5〕,其中人類Pim-3基因定位于染色體 22q13,其 cDNA由 2 392 bp組成,編碼包含了 326個(gè)氨基酸序列的開放讀碼框,Li等〔3〕發(fā)現(xiàn)Pim-3 mRNA在人的心臟、骨骼肌、大腦、腎臟、肺和外周血白細(xì)胞中存在,在心肌和骨骼肌中呈高表達(dá),相反,在結(jié)腸、胸腺、肝臟和小腸的正常組織中不表達(dá);同時(shí)還發(fā)現(xiàn) Pim-3蛋白在人肝細(xì)胞癌的癌旁組織、癌組織中表達(dá),且在癌組織中的表達(dá)要較癌旁組織高。另有研究也表明 Pim-3在肝癌、胰腺癌、結(jié)腸癌中有異常表達(dá)增加。這和在食管癌當(dāng)中的研究一致。目前的研究主要認(rèn)為 Pim-3通過以下途徑發(fā)揮生物學(xué)作用:①通過調(diào)控bcl-2家族的抗凋亡蛋白或抑制凋亡基因 bad和 Gfi-1,從而抑制細(xì)胞凋亡;②使酪氨酸磷酸酶(PTU-U2S)磷酸化,抑制磷酸酶的活性,從而阻止細(xì)胞凋亡;③激活細(xì)胞周期素 25A(CDC25A),促進(jìn)細(xì)胞的 G1期進(jìn)程,或抑制 C-轉(zhuǎn)化生長因子激酶 1(C-TAK1)的活性,促進(jìn) G2/M轉(zhuǎn)換;④激活信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT-3)信號(hào)途徑,促進(jìn) G1/S的進(jìn)程〔6〕。

本研究中患者的病理分級(jí)、臨床 TNM分期、侵襲深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否作為重要因素影響患者預(yù)后的結(jié)果與以往的研究結(jié)果相符。為了有效地控制混雜因素的影響,避免多因素的交互作用,從而顯示其獨(dú)立性,本文采用Cox回歸多因素模型分析發(fā)現(xiàn):腫瘤病理分級(jí)、TNM分期、Pim-3表達(dá)是獨(dú)立的預(yù)后因素,其中病理分級(jí)、Pim-3表達(dá)最為重要,且病理分級(jí)和 Pim-3是危險(xiǎn)因素。

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