中藥天年飲對衰老大鼠脾PCNA表達(dá)的影響

張 雷，蘇哲君，陳志宏

（承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000）

短篇報道

中藥天年飲對衰老大鼠脾PCNA表達(dá)的影響

張 雷，蘇哲君，陳志宏

（承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000）

衰老；脾；天年飲；PCNA

淋巴器官功能降低是免疫功能紊亂的主要原因，也與免疫功能的衰退密切相關(guān)[1]，因此，研究免疫系統(tǒng)的衰老變化具有重要的理論和實際意義。脾是機(jī)體重要的免疫器官，補(bǔ)腎、健脾是延緩衰老的主要方法。天年飲由劉河間《宣明論方》何首烏丸加味而成，能填精補(bǔ)髓、烏發(fā)延年。本研究采用D-半乳糖致亞急性衰老的大鼠模型，觀察了中藥天年飲對衰老大鼠脾形態(tài)結(jié)構(gòu)和PCNA表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物的選擇與分組 雄性SD大鼠30只，體重180-250g。將大鼠隨機(jī)分為3組：正常組、衰老模型組和天年飲用藥組，每組10只。模型組和用藥組大鼠采用D-半乳糖連續(xù)腹腔注射(200mg/kg/d，40d）制作亞急性衰老的動物模型；模型組大鼠造模成功后不再做任何處理，用藥組大鼠造模成功給予天年飲灌胃30d。

1.2 藥品與試劑 天年飲由灸何首烏、懷牛膝、肉從蓉、淫羊藿、丹參、茯苓六味中藥組成，煎制后每ml含生藥1.5g，按16.2g/kg灌胃給藥。PCNA免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程公司。

1.3 免疫組化染色 大鼠斷頭處死，取脾入Bouins液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片(片厚6μm）。采用SABC免疫組化染色觀察大鼠脾PCNA的表達(dá)(PCNA一抗為小鼠抗，稀釋濃度1：100），以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色為陽性反應(yīng)，以PBS代替一抗作為陰性對照。每只大鼠于顯微鏡下(10×20）任選5張切片，每張切片選取3個陽性細(xì)胞分布均勻的視野，采用MiVnt圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，以陽性產(chǎn)物面積占視野面積的比值作為PCNA的相對表達(dá)水平，取平均值。

1.4 統(tǒng)計分析 采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件，以方差分析進(jìn)行統(tǒng)計處理，組間比較采用q檢驗。

2 結(jié)果

大鼠脾PCNA表達(dá)的變化：PCNA陽性產(chǎn)物為棕黃色，位于細(xì)胞核。正常組大鼠脾小體生發(fā)中心可見大量PCNA陽性的B淋巴細(xì)胞，但陽性程度較弱；動脈周圍淋巴鞘可見PCNA陽性的T淋巴細(xì)胞；脾索可見PCNA陽性的漿細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞，陽性程度較強(qiáng)。模型組大鼠脾小體、動脈周圍淋巴鞘中PCNA陽性淋巴細(xì)胞均明顯減少；脾索中可見PCNA陽性的漿細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞。天年飲用藥組大鼠脾PCNA的表達(dá)情況與模型組比較明顯改善。定量分析結(jié)果：正常對照組、模型組、天年飲用藥組PCNA的表達(dá)分別為(0.1167±0.0191）、（0.0533±0.0134）、（0.0922± 0.0280），模型組大鼠脾PCNA的表達(dá)明顯低于正常組大鼠(P＜0.01），天年飲用藥組大鼠脾PCNA的表達(dá)明顯高于模型組(P＜0.01）。

3 討論

免疫系統(tǒng)是機(jī)體衰老過程中的主要調(diào)節(jié)系統(tǒng)之一，可參與機(jī)體衰老的全過程。脾是機(jī)體內(nèi)重要的免疫器官，在異種抗原的刺激下脾小體分化增殖，產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞，動脈周圍淋巴鞘顯著增厚，產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞，這些變化均與體液免疫和細(xì)胞免疫密切相關(guān)。另外，脾還能產(chǎn)生與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)的活性物質(zhì)，脾的功能在整個機(jī)體的免疫功能中占有重要地位[2]。PCNA是存在于細(xì)胞核中的酸性蛋白質(zhì)，是增殖期細(xì)胞特異表達(dá)的一種核蛋白，在核酸復(fù)制和修復(fù)以及調(diào)節(jié)細(xì)胞周期中有重要作用。另外，PCNA還作為DNA聚合酶δ的一個輔助因子參與DNA的合成與復(fù)制，為DNA復(fù)制起始所必需[3]。PCNA在所有具有DNA復(fù)制的細(xì)胞中都有表達(dá)，并且它的合成及表達(dá)與細(xì)胞增殖周期密切相關(guān)，PCNA的合成在G1期開始增加，S期達(dá)到高峰，G2期開始下降[4-5]。因此，PCNA表達(dá)的強(qiáng)弱可直接反應(yīng)細(xì)胞增殖/凋亡的程度和是否存在細(xì)胞的惡性累積增殖。本研究發(fā)現(xiàn)，衰老大鼠脾臟出現(xiàn)明顯的病理變化，脾PCNA的表達(dá)明顯降低；與衰老模型組比較，天年飲用藥組大鼠脾臟的病理變化明顯減輕，脾PCNA的表達(dá)明顯提高。表明天年飲可通過減輕脾臟的病理變化和促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖能力來提高衰老機(jī)體的免疫功能，證實中藥天年飲具有一定的延緩衰老作用。

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