一次微生物實(shí)驗(yàn)室室間比對的報告和體會

紀(jì)靜

(廈門市翔安區(qū)疾病預(yù)防控制中心[廈門市翔安區(qū)公共衛(wèi)生大樓]，福建 廈門 361102)

實(shí)驗(yàn)室室間比對試驗(yàn)是判定實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)?zāi)芰Φ囊粋€重要的評價方法，是按照預(yù)先規(guī)定的條件，由兩個或多個實(shí)驗(yàn)室對相同或類似的測試樣品進(jìn)行檢測的組織、實(shí)施和評價，從而確定實(shí)驗(yàn)室能力、識別實(shí)驗(yàn)室存在的問題與實(shí)驗(yàn)室間的差異，是判斷和監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室能力的有效手段之一。為確保微生物實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量，提高實(shí)驗(yàn)室人員的細(xì)菌鑒定水平，2010年7月26日我中心參加了廈門市疾病預(yù)防控制中心主辦的廈門市區(qū)級疾控機(jī)構(gòu)微生物實(shí)驗(yàn)室室間比對質(zhì)控考核?，F(xiàn)將我室參加此次室間比對質(zhì)控考核的結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1 半固體瓊脂管1支，編號B.檢驗(yàn)項(xiàng)目：常見食源性致病菌 (提示兩種混合菌)方法 按GB/T4789-2008及 GB/T4789-2010方法進(jìn)行檢測。

1.1 .2 檢驗(yàn)培養(yǎng)基與試劑 所用分離、增菌、選擇、鑒定培養(yǎng)基系北京陸橋技術(shù)責(zé)任有限公司產(chǎn)品。ID32E、ID32STAPH鑒定系統(tǒng)系法國生物梅里埃公司產(chǎn)品。沙門菌O和H診斷血清由衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所提供。所有培養(yǎng)基和試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.1 .3主要儀器 電熱恒溫培養(yǎng)箱ATB Expression自動細(xì)菌鑒定儀由法國生物梅里埃公司生產(chǎn)。

1.2 檢測方法 GB/T4789-2008及 GB/T4789-2010“食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物部分”。

1.2 .1分離培養(yǎng) 半固體瓊脂考核樣劃線接種XLD平板、TCBS平板、MAC平板、SMAC平板、血平板、BP平板。37℃18h后。

1.2 .2 菌落特征 TCBS平板上無可疑菌落生長，XLD平板上有粉色、中等大小，中心帶黑色菌落。MAC平板上有無色半透明菌落，SMAC平板無可疑菌落生長，血平板上有兩種不同菌落，中等大小為無色半透明不溶血菌落，較小菌落為白色圓形，光滑凸起，周圍有透明溶血圈。BP平板上的菌落呈黑色，周圍為一混濁帶，外層有一透明圈。

1.2 .3分別挑取血平板上無色不溶血菌落(樣品B-1菌)及白色周圍有透明溶血圈菌落(樣品B-2菌)分別涂片做革蘭染色鏡檢。樣品B-1菌為革蘭陰性無芽胞桿菌。樣品B-2菌為革蘭陽性葡萄狀球菌。根據(jù)各培養(yǎng)基平板上菌落特征、革蘭染色結(jié)果及作業(yè)指導(dǎo)書提示兩種混合菌初步判定兩菌可疑為沙門菌及葡萄球菌。

1.2 .4生化反應(yīng)分別挑取可疑菌接種營養(yǎng)瓊脂平板和三糖鐵瓊脂，B-1菌同時接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h。

1.2 .5血清學(xué)鑒定 分別挑取XLD平板上有粉色、中心帶黑色菌落、MAC平板上疑有無色半透明菌落、血平板上半透明不溶血菌落做沙門血清凝集試驗(yàn)。

樣品B-1菌株：沙門菌診斷血清A-F群多價O凝集，O4凝集，第1相HI凝集，第2相不凝集，生理鹽水對照不凝集。由于第2相不凝集，用簡易平板法做位相變異實(shí)驗(yàn)。方法：將0.35%～0.4%半固體瓊脂平板烘干表面水分，挑取HI因子血清1環(huán)，滴在半固體平板表面，放置片刻，待血清吸收到瓊脂內(nèi)，在血清部位的中央點(diǎn)種B-1菌株，培養(yǎng)24h后，在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。結(jié)果第2相H1，2凝集。查常見沙門菌抗原表，結(jié)果為鼠傷寒沙門菌。樣品B-2菌株：血漿凝固酶陽性(玻片法試管法均陽性)。

2 結(jié)果

根據(jù)兩種菌的革蘭染色鏡檢結(jié)果、在分離選擇培養(yǎng)基上的菌落特征、生化反應(yīng)和血清凝集實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：B-1為鼠傷寒沙門菌，B-2為金黃色葡萄球菌。

細(xì)菌鑒定儀(ATB Expression)鑒定

與手工鑒定結(jié)果一致。

3 討論

開展微生物實(shí)驗(yàn)室室間比對考核，是對實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備，實(shí)驗(yàn)試劑及人員操作能力的綜合檢測。有益于提高檢驗(yàn)人員的業(yè)務(wù)素質(zhì)和實(shí)驗(yàn)室的檢測能力。

要做好實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)控應(yīng)先做好平時的室內(nèi)質(zhì)控，儀器設(shè)備應(yīng)定時檢查維護(hù)，做好使用記錄。培養(yǎng)基在使用前做無菌試驗(yàn)并按培養(yǎng)基的用途做生長試驗(yàn)，注意保存條件；診斷血清注意保質(zhì)期和效價。主要試劑要注意保質(zhì)期，看是否失效。對實(shí)驗(yàn)步驟，人員操作做必要的記錄，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

做室間比對要有一個清晰的思路，采用合適的分離選擇培養(yǎng)基，根據(jù)培養(yǎng)基上的菌落特征挑取可疑菌，然后做革蘭染色鏡檢，TSI、氧化酶動力、觸酶等初步生化實(shí)驗(yàn)，初步的血清學(xué)試驗(yàn)，最后做完整的生化鑒定及血清學(xué)試驗(yàn)以鑒定可疑菌。

本次室間比對過程中，做沙門菌診斷血清凝集試驗(yàn)時只出現(xiàn)單相H抗原凝集現(xiàn)象，檢出第1相H抗原而未檢出第2相，在瓊脂斜面移種1～2代再檢查仍未檢出第2相。最后做位相變異實(shí)驗(yàn)才檢出第2相。本實(shí)驗(yàn)對培養(yǎng)基的要求較高，要有一定的耐心和細(xì)心。

[1]陳 昕,黃振華,朱 瑩.微生物實(shí)驗(yàn)室室間比對的結(jié)果分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008,18(3):554-555.