血清胱抑素C對(duì)外周動(dòng)脈粥樣硬化診斷的潛在價(jià)值

夏宇

(湘潭市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南 湘潭 411100)

動(dòng)脈粥樣硬化(Artherosclerosis)是西方發(fā)達(dá)國(guó)家人民的主要死亡原因。隨著我國(guó)人民生活水平提高和飲食習(xí)慣改變，該病也逐漸成為我國(guó)人民的主要死亡原因。目前，臨床通常以檢測(cè)血液中脂蛋白、甘油三酯和膽固醇的濃度，結(jié)合X射線檢查、動(dòng)脈造影或多普勒超聲波檢查來(lái)診斷外周動(dòng)脈粥樣硬化。

此診斷方式存在一定的弊端，尤其難以診斷早期的外周動(dòng)脈粥樣硬化病變。近年來(lái)，隨著對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化分子病理學(xué)機(jī)理的研究發(fā)現(xiàn)，組織蛋白酶和其內(nèi)源性胱抑素C(Cys C)表達(dá)的失衡，是造成動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素[1]；同時(shí)，Cys C作為診斷外周動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病等一些心血管疾病的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，備受國(guó)內(nèi)外研究者的關(guān)注[2]。為了探討Cys C在臨床診斷外周動(dòng)脈粥樣硬化的應(yīng)用價(jià)值，本文對(duì)100例外周動(dòng)脈粥樣硬化患者血清中Cys C、IL-6、hs-CRP和腎小球?yàn)V過(guò)率進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 對(duì)象

1.1 .1 患者資料 選取外周動(dòng)脈粥狀硬化患者共100例。選取標(biāo)準(zhǔn)：男性，年齡大于45歲，包括有間歇性跛行史、踝/臂血壓指數(shù)(ABI)小于0.9；排除由截肢等其他原因引起的有間歇性跛行史的患者；排除伴隨I型糖尿病、房顫或心肌萎縮癥狀的患者。

1.1 .2健康對(duì)照 選取臨床體檢正常的健康人95例作為對(duì)照。選取標(biāo)準(zhǔn)：男性，年齡區(qū)間與實(shí)驗(yàn)組一致；無(wú)任何原因引起的間歇性跛行史；無(wú)I型糖尿病、房顫或心肌萎縮癥狀；踝/臂血壓指數(shù)(ABI)大于0.9。

1.1 .3標(biāo)本采集 受試者空腹，抽取靜脈血液樣品約5ml于EDTA-K2真空采血管，測(cè)定肌酐和糖化血紅蛋白組分 (HbA1c)；另取靜脈血約5ml于真空采血管，用于測(cè)定血清Cys C、hs-CRP和IL-6。

1.2 測(cè)定方法

1.2 .1空腹抽血做肌酐和糖化血紅蛋白(HbA1c)分析 肌酐清除率以Cockcroft’s公式計(jì)算；腎小球?yàn)V過(guò)率以MDRD公式通過(guò)血肌酐、年齡、種族和性別計(jì)算得出。根據(jù)全國(guó)腎臟基金會(huì)建議，將腎小球?yàn)V過(guò)率的預(yù)估值分為四個(gè)范圍 (少于45.0m l/min/1.73m2，45.0ml/min/1.73m2～59.9ml/min/1.73m2，60.0ml/min/1.73m2～74.9mL/min/1.73m2， 高 于 75.0m l/min/1.73m2)。

1.2 .2血清胱抑素C、血清超敏C反應(yīng)蛋白和白介素6檢測(cè) 血清胱抑素C和血清超敏C反應(yīng)蛋白的檢測(cè)按照試劑盒使用說(shuō)明以顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法進(jìn)行，血清胱抑素C的總體變異系數(shù) (CV)為1.2mg/L小于3.5%；血清超敏C反應(yīng)蛋在10mg/L以下時(shí)總體變異系數(shù)為3.9%。白介素6的檢測(cè)用高靈敏度的ELISA試劑盒，檢測(cè)靈敏度達(dá)到0.1 pg/mL。檢測(cè)結(jié)果表明：白介素6的總體變異系數(shù)小于7%。以高效液相色譜法檢測(cè)糖化血紅蛋白，其參考區(qū)間小于5.2%，總體變異系數(shù)小于3%。

1.2 .3動(dòng)態(tài)血壓的測(cè)量 通過(guò)無(wú)創(chuàng)示波法血壓檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行動(dòng)態(tài)血壓的檢測(cè)。血壓和心跳的值可以在24h內(nèi)每15min自動(dòng)檢測(cè)和記錄一次。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

1.3 .1通過(guò)t檢驗(yàn)和相關(guān)系數(shù)分析 分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的血清胱抑素C、內(nèi)生肌酐清除率、腎小球?yàn)V過(guò)率進(jìn)行比較。由于白介素6和血清超敏C反應(yīng)蛋白水平顯著的不對(duì)稱，利用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)(曼-惠特尼U檢驗(yàn))進(jìn)行分析。

1.3 .2反向逐步多重回歸分析 血清胱抑素C作為總體的因變量，外周動(dòng)脈疾病、腎小球?yàn)V過(guò)率、身體質(zhì)量指數(shù)、年齡、臀圍、糖化血紅蛋白、24h脈搏壓和白介素6的對(duì)數(shù)值作為自變量，進(jìn)行回歸分析。

1.3 協(xié)方差分析 將外周動(dòng)脈疾病和不同分級(jí)的腎小球?yàn)V過(guò)率作為自變量，年齡和白介素6的對(duì)數(shù)值作為因變量。由統(tǒng)計(jì)軟件(STATISTICA，第七版)完成所有統(tǒng)計(jì)分析和數(shù)據(jù)管理。被用來(lái)檢驗(yàn)外周動(dòng)脈疾病在血清胱抑素C一項(xiàng)中的檢出效率以及分析外周動(dòng)脈疾病與腎臟損害可能的相互作用。

2 結(jié)果

2.1 各項(xiàng)基本生理特性和各項(xiàng)血液特定組分 外周動(dòng)脈粥樣硬化患者血清中Cys C的濃度非常明顯高于健康人群(P＜0.01)。而在所選取的樣本中，肌酐清除率或腎小球?yàn)V過(guò)率在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異(P＞0.05)，從而基本排除了因腎小球病變對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。外周動(dòng)脈粥樣硬化患者的IL-6和CRP的濃度均非常顯著高于健康對(duì)照組 (P＜0.01)，此結(jié)果和以前文獻(xiàn)報(bào)道一致[3]，見(jiàn)表1。

2.2 血清Cys C濃度與其他各基本生理特性和血液特定組分濃度的相關(guān)性分析結(jié)果表明，在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中Cys C濃度與肌酐清除率、腎小球?yàn)V過(guò)率均呈負(fù)相關(guān)(γ＝-0.44～-0.78，P＜0.001)；Cys C 濃度與hs-CRP、IL-6 濃度的對(duì)數(shù)值呈正相關(guān)(γ＝0.30～0.38，P＜0.01～0.001)，見(jiàn)表 2。

2.3 多元回歸分析 將Cys C的濃度作為因變量動(dòng)脈粥狀硬化癥狀、GFR、Log IL-6進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示，Cys C濃度可以用于預(yù)期外周動(dòng)脈粥樣硬化(見(jiàn)表3)。在協(xié)方差分析中，當(dāng)腎小球?yàn)V過(guò)率或者肌酐清除率、白介素6作為相關(guān)變異加入時(shí)，外周動(dòng)脈粥樣疾病組的血清胱抑素C的值依然很高 (見(jiàn)圖1)。2.4腎小球?yàn)V過(guò)率評(píng)估腎功能損害情況 根據(jù)腎小球?yàn)V過(guò)率的數(shù)值，將所選取的實(shí)驗(yàn)對(duì)象的數(shù)值分為嚴(yán)重、中度、輕度腎臟病變和無(wú)腎臟病變四組。根據(jù)此分組，同樣將IL-6濃度的對(duì)數(shù)值，年齡作為相關(guān)變異加入時(shí)，對(duì)Cys C濃度進(jìn)行協(xié)方差分析，結(jié)果顯示外周動(dòng)脈粥狀硬化患者和各種級(jí)別的腎小球清除率之間的Cys C濃度之間具有顯著的相關(guān)性(圖2)。

表1 患者組與健康組的各項(xiàng)基本生理指標(biāo)和血液特點(diǎn)組分比較(±s)

表1 患者組與健康組的各項(xiàng)基本生理指標(biāo)和血液特點(diǎn)組分比較(±s)

外周動(dòng)脈粥樣硬化組(實(shí)驗(yàn)組,n=100)健康組(對(duì)照組,n=95) P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＜0.001＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＞0.05＜0.001＞0.05＜0.001年齡體重ABI血壓(收縮壓/舒張壓)高血壓史Ⅱ型糖尿病史心肌萎縮肌酐清除率(ml/min)腎小球?yàn)V過(guò)率(ml/min1.73m2)Cys C濃度(ng/L)hs-CRP濃度(mg/L)IL-6濃度(mg/L)HbA1c濃度(%)膽固醇濃度(mmol/L)HDL濃度(mmol/L)LDL濃度(mmol/L)甘油三酯(mmol/L)68±8 26.6±3.2 0.66±0.19 0.96±0.05 61 16 44 81±27 76±21 68±8 25.7±3.7 1.11±0.11 0.94±0.05 17 70 82±22 79±14 1.09±0.40 2.63 1.60 4.8 5.4±0.9 1.2±0.3 3.4±0.8 1.7 0.95±0.17 1.45 0.98 4.7 5.5±0.9 1.3±0.3 3.5±0.8 1.3

表2 Cys C濃度與其他臨床指標(biāo)之間的單變量相關(guān)性分析[γ(p)]

圖1 以腎小球率過(guò)濾和白介素6的對(duì)數(shù)值作為共變量，用協(xié)方差方法分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中Cys C濃度，結(jié)果如上。F(1.191)=9.50，P≤ 0.01。

表3 全部受試人群(n=95)中的逐步多元回歸分析

表4 腎小球?yàn)V過(guò)率評(píng)估腎功能損害情況(n、%)

圖2 外周動(dòng)脈粥狀硬化患者和各級(jí)別范圍的腎小球清除率患者Cys C濃度的相關(guān)性。以年齡、白介素6的對(duì)數(shù)值作為共變量，對(duì)Cys C濃度進(jìn)行協(xié)方差分析。結(jié)果如上。豎線表示0.95的置信區(qū)間。

3 討論

由于血清中Cys C濃度易于快速、準(zhǔn)確測(cè)定，所以在臨床上被推薦為監(jiān)測(cè)腎功能濾過(guò)率的一個(gè)可靠指標(biāo)[4]。然而，最近的研究發(fā)現(xiàn)血清中Cys C的濃度可能會(huì)被其他一些與腎功能無(wú)關(guān)的因素所影響，如年齡、性別、體重、體內(nèi)炎癥情況和心血管疾病等[5]。動(dòng)脈粥樣硬化是一種較為常見(jiàn)的心血管疾病，同時(shí)其發(fā)生的機(jī)理也和炎癥反應(yīng)有關(guān)，所以其可能會(huì)影響血清中Cys C的濃度，從而干擾對(duì)腎功能的評(píng)估。但國(guó)內(nèi)外關(guān)于外周動(dòng)脈粥樣硬化和血清中Cys C濃度之間關(guān)系的報(bào)道并不多，而且其結(jié)論也不是十分明確[6]。我們通過(guò)對(duì)100例外周動(dòng)脈粥樣硬化病例的研究分析，發(fā)現(xiàn)和健康對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組中血液Cys C的濃度存在著顯著的升高；然而腎小球?yàn)V過(guò)率或肌酐清除率在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中并沒(méi)有明顯的差異。這可能是由于和肌酐相比，Cys C用以評(píng)價(jià)腎小球?yàn)V過(guò)率無(wú)論是敏感度還是特異性都很高。我們將腎小球?yàn)V過(guò)率或肌酐清除率作為一個(gè)共變量，對(duì)Cys C濃度進(jìn)行協(xié)方差分析后，實(shí)驗(yàn)組中血清Cys C濃度仍然比健康對(duì)照組有顯著提高。因此，在外周動(dòng)脈粥樣硬化患者人群中，血清Cys C濃度的升高不僅僅與腎功能的下降有關(guān)，并且可以將其作為判斷外周動(dòng)脈硬化的重要指標(biāo)。

動(dòng)脈粥狀硬化通常被視為與炎癥反應(yīng)相關(guān)的心血管系統(tǒng)疾病，其病理機(jī)制為：血管內(nèi)毒素物質(zhì)的沉積對(duì)血管造成傷害，引起體內(nèi)炎癥反應(yīng)，使免疫系統(tǒng)的淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞在受損部位集結(jié)，同時(shí)引起相應(yīng)部位的血管平滑肌增生；如果這種傷害因素一直存在，就會(huì)使體內(nèi)的炎癥反應(yīng)持續(xù)激活，隨著時(shí)間的推進(jìn)，就會(huì)在血管的相應(yīng)部位出現(xiàn)斑塊、結(jié)締組織等異常的組織形態(tài)，最終導(dǎo)致血管的硬化。IL-6和hs-CRP作為誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的重要分子，其水平的變化通常在臨床上用于檢測(cè)體內(nèi)炎癥反應(yīng)的情況，所以也被作為一類重要的血清標(biāo)記物來(lái)判斷動(dòng)脈粥樣硬化。本文研究發(fā)現(xiàn)，將IL-6或hs-CRP的水平作為共變量加入進(jìn)行多變量分析，實(shí)驗(yàn)組中血清Cys C濃度仍然顯著高于健康對(duì)照組，此結(jié)果表明Cys C可能可以作為一個(gè)獨(dú)立的血清標(biāo)志物用于檢測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化。同時(shí)，在動(dòng)脈粥樣硬化患者中Cys C濃度的異常升高，可能反映了體內(nèi)組織蛋白酶和其抑制分子Cys C表達(dá)水平之間失衡，成為動(dòng)脈粥樣硬化另一主要誘因。

通過(guò)對(duì)血清中Cys C濃度和外周動(dòng)脈粥樣硬化的研究，初步闡明了其相互之間存在一定的相關(guān)性；結(jié)合腎小球?yàn)V過(guò)率、IL-6和hs-CRP等指標(biāo)的測(cè)定，Cys C對(duì)于診斷外周動(dòng)脈粥樣硬化具有潛在的價(jià)值，并且可以用于衡量患者不同的動(dòng)脈粥狀硬化程度。但由于我們?cè)谶x擇樣本時(shí)規(guī)定了年齡、性別等因素，所以對(duì)于Cys C水平的上升和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生之間是否存在著一定的因果關(guān)系，或Cys C水平的上升是否可以用作動(dòng)脈粥樣硬化的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估指標(biāo)等問(wèn)題有待進(jìn)一步研究。

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