高效液相色譜在生化藥物分析中的應(yīng)用與展望

李 乾，靳 珅

(1.山西醫(yī)科大學(xué)口腔臨床醫(yī)學(xué)，山西太原030001；2.華南理工大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，廣東廣州510006)

高效液相色譜法是20世紀(jì)70年代開始發(fā)展起來的高效、快速、適應(yīng)面廣的分析分離技術(shù)，因其獨特的優(yōu)點已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥物的含量測定、組成分析、質(zhì)量控制等方面。高效液相色譜法由于儀器化程度高、分離效能高、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性好，非常適合一些成分復(fù)雜藥物的分離分析和標(biāo)準(zhǔn)色譜圖庫的建立，特別是那些具有某種生物活性的物質(zhì)，該方法提供了非常合適的分離分析環(huán)境，逐漸成為藥物分析的主導(dǎo)方法。

藥物分析是運用化學(xué)、物理學(xué)、生物學(xué)以及微生物學(xué)方法和技術(shù)來研究化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的合成藥物或天然藥物及其制劑質(zhì)量的一門學(xué)科[1]。藥物分析在生產(chǎn)、教學(xué)與科研、藥品質(zhì)量與安全等領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。

生化藥物是指在生物化學(xué)研究成果的基礎(chǔ)上，利用生物體中起重要作用的各種基本物質(zhì)，通過一定的提取、分離、純化等手段研制出的具有生物活性的物質(zhì)，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶、多糖、核苷酸和生物堿等[2]。

1 應(yīng)用進(jìn)展

隨著生化藥物研究的不斷發(fā)展，高效液相色譜的優(yōu)勢也逐漸突顯出來，近幾年國內(nèi)外在生化藥物分析中，應(yīng)用到高效液相色譜的例子屢見不鮮。

朱艷琴等[3]用高效液相色譜法同時測定了復(fù)方金銀花顆粒中的3種活性成分——中綠原酸、黃芩苷和連翹苷的含量。他們采用Hypersil ODSC18色譜柱(4.6 mm×200 mm,5μm)，流動相為乙腈(A)-0.2%冰醋酸水溶液(B)采用梯度洗脫(0～10 min，A 15%～25%；10～20 min，A 25%～40%；20～35 min，A 40%～60%)，檢測波長280 nm，流速1.0 mL/min。得到結(jié)論：高效液相色譜法簡便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)新好，可有效控制復(fù)方金銀花顆粒的質(zhì)量。

現(xiàn)將200901-201103期間我國學(xué)者在生化藥物分析上關(guān)于新應(yīng)用和新方法的文章列在表1內(nèi)。

表1 國內(nèi)HPLC分析生化藥物進(jìn)展(200901-201103)

續(xù)表1

在國外，Alaerts等[24]通過檢測甘草、鼠李、姜黃和朝鮮薊4種中草藥,提出了用C18整體柱為固定相建立指紋圖譜的方法，是高效液相色譜應(yīng)用的一大創(chuàng)新。Ko¨rner等[25]從秋水仙種子的浸膏制劑中將秋水仙堿和一些其他相關(guān)生物堿以及它們的降解產(chǎn)物分離出來。使得包括秋水仙堿在內(nèi)的生物堿不用將其衍生化就能迅速分離。并且有極好的線性、精密度和低定量限。Schmidt等[26]用硅膠整體柱成功測定了魔鬼爪中的環(huán)烯醚萜苷成分哈帕酯苷，采用該方法使藥物生物分析時間更短，對于魔鬼爪的提取物及其藥物制劑的商業(yè)質(zhì)量控制有非常大的價值。

2 展望

高效液相色譜法已經(jīng)是目前公認(rèn)的時間最短、效能較高的藥物分析方法，但是隨著該方法應(yīng)用面的不斷拓寬和所要分析的生化藥物成分、結(jié)構(gòu)的不斷復(fù)雜化，單純的應(yīng)用高效液相色譜法已經(jīng)很難在短時間內(nèi)完成對一種或幾種生化藥物分析。在高效液相色譜本身的固定相、檢測器等方面繼續(xù)發(fā)展進(jìn)步的基礎(chǔ)上，聯(lián)用技術(shù)必將是高效液相色譜法突破瓶頸的關(guān)鍵。尤其是色譜-色譜聯(lián)用、色譜-光譜聯(lián)用、柱切換技術(shù)、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等。近幾年在國內(nèi)外已經(jīng)有成熟的聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用到日常的生化藥物的研究之中，例如與核磁共振、高光敏度檢測、等離子體質(zhì)譜、固相微萃取聯(lián)用等。如何使得其他剛剛起步的聯(lián)用技術(shù)更快發(fā)展，如何提高聯(lián)用技術(shù)的靈敏度和精度是以后高效液相色譜法發(fā)展的趨勢之一。

同時，人工智能的應(yīng)用也是高效液相色譜技術(shù)繼續(xù)快速發(fā)展的關(guān)鍵，現(xiàn)在相關(guān)的計算機(jī)分析軟件正在逐步完善，一些專家系統(tǒng)也在逐步的普及開來，相信在不久的將來在人工智能的幫助下，高效液相色譜技術(shù)能夠時間更短、效能更好、自動化程度更高。

中草藥是我們的國粹，高效液相色譜法用于中草藥、中藥方劑的藥物分析也將是以后該方法在藥物分析上的重要應(yīng)用。探索中草藥在不同酸堿范圍內(nèi)的效力、研究不同煎煮時間對藥效的影響、討論不同中草藥搭配的不同作用等，都是高效液相色譜法應(yīng)用的趨勢。中藥方劑一般由幾種甚至幾十種中藥材組成，化學(xué)成分非常復(fù)雜。目前我們對中藥方劑中的有效成分的認(rèn)識還相當(dāng)有限，有待開發(fā)準(zhǔn)確地評價中藥方劑質(zhì)量的分析方法。這也將是高效液相色譜法應(yīng)用的重要方向之一。

藏藥研究是我國醫(yī)藥方面上的一個并未引起太多關(guān)注的研究方向，但是藏藥的原理、功效等也是需要科研工作者探究的。高效液相色譜在藏藥的研究上，可以起到一定的作用。

高效液相色譜法作為一種十分有效的藥物分析方法，已廣泛地用于生化藥物的分析中。且隨著該技術(shù)的不斷改進(jìn)與發(fā)展，高效液相色譜法的作用將越來越重要。

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