分光光度法測(cè)定決明子中總蒽醌含量

康 建,屈凌波,吳擁軍,曾建偉

(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院,河南鄭州 450052;2.鄭州大學(xué)化學(xué)系,河南鄭州 450052;3.鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,河南鄭州 450052;4.福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院,福建福州 350108)

決明子(Semen Cassiae)為豆科植物決明(Cassia obtusifolia L.)或小決明(Cassia tora L.)的干燥成熟種子,具有清熱明目、潤(rùn)腸通便的功效,主治目赤澀痛、羞明多淚、頭痛眩暈、目暗不明、大便秘結(jié)[1]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),決明子具有降血壓[2]、降血脂[3-4]和瀉下[5]等作用,其主要活性成分為蒽醌類物質(zhì)[5-6]。本研究通過建立紫外可見分光光度法測(cè)定決明子中總蒽醌的含量,為評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量及保證臨床療效提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

UV-1800型紫外可見分光光度計(jì),日本島津公司產(chǎn)品;DFY-600高速中藥粉碎機(jī),溫冷市林大機(jī)械有限公司產(chǎn)品;CP225D電子天平,德國(guó)賽多利斯公司產(chǎn)品;1,8-二羥基蒽醌對(duì)照品,批號(hào)0829-9702,中國(guó)藥品生物制品檢定所(含量測(cè)定用)產(chǎn)品;乙酸鎂、甲醇、氯仿、鹽酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備

取 1,8-二羥基蒽醌對(duì)照品適量,加甲醇配制成濃度為0.1 g/L對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備

取決明子粉末(過40目篩)1.0 g,精密加入甲醇20mL,稱定重量,超聲提取30 min,加甲醇補(bǔ)足減失的重量,精密量取上清液2 m L,于10 m L具塞試管中,置水浴上蒸干;冷卻后,殘?jiān)?mL蒸餾水溶解,加20%鹽酸5m L,于沸水浴中加熱水解 2 h,冷卻至室溫,傾入分液漏斗中,用氯仿提取 3次,合并氯仿液并回收至干。殘?jiān)?.5%醋酸鎂甲醇液溶解,并稀釋至10mL,即得。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

在400～650 nm波長(zhǎng)處對(duì)1,8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液吸光度進(jìn)行掃描,結(jié)果在512 nm波長(zhǎng)處有最大吸收,因此選擇 512 nm作為測(cè)定波長(zhǎng),見圖 1。

圖1 1,8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液吸光度掃描圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取 1,8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液 0.2, 0.5,0.8,1.2,1.6,2.0 mL于10 m L具塞試管中,水浴蒸干,殘?jiān)?.5%醋酸鎂甲醇溶液溶解至刻度,搖勻。以0.5%醋酸鎂甲醇溶液為空白,于512 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,以吸光度對(duì)質(zhì)量作圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程:Y=0.004 6X-0.003 2,r= 0.999 8(n=6)。

2.4 精密度試驗(yàn)

取1.0 mL對(duì)照品溶液,按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法,依次連續(xù)測(cè)定6次,吸光度RSD=1.03%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一樣品溶液,每隔 1 h測(cè)定 1次,共測(cè)6次,吸光度RSD=1.55%。結(jié)果表明,供試品溶液的穩(wěn)定性較好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品,按“2.1.2供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法制備 6份供試品溶液,測(cè)定吸光度,計(jì)算樣品中總蒽醌平均含量為0.405%,RSD=1.96%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

取本品粉末 6份,每份 0.5 g,精密稱定,每份加入對(duì)照品溶液2 mL,按“2.1.2供試品溶液制備”方法制備,測(cè)定吸光度,計(jì)算回收率平均值為100.1%,RSD=2.64%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量測(cè)定

取決明屬不同種的樣品約1.0 g,每個(gè)品種均取3份,按“2.1.2供試品溶液制備”項(xiàng)下的方法制備,經(jīng)測(cè)定,結(jié)果見表 2。

表2 不同種決明子總蒽醌含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

3.1 總蒽醌類型初探

研究發(fā)現(xiàn),決明子未水解前,幾乎檢測(cè)不到蒽醌;經(jīng)酸水解后,方可檢測(cè)到總蒽醌,這表明決明子中的蒽醌類物質(zhì)主要為結(jié)合型,而游離型含量甚微。

3.2 供試品溶液的制備方法

由于決明子中的蒽醌類物質(zhì)主要為結(jié)合型蒽醌,檢測(cè)決明子中總蒽醌的含量,必須先進(jìn)行水解反應(yīng),一般用 20%鹽酸,試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)加三氯化鐵溶液會(huì)加速水解反應(yīng)的速度和程度。

3.3 總蒽醌含量差異

藥典只收錄了決明屬的 2個(gè)品種,分別是豆科植物決明Cassia obtusifolia L.和小決明Cassia tora L.,但市場(chǎng)上偽品較多。本文測(cè)定了 7個(gè)常見品種的決明子樣品,結(jié)果表明總蒽醌含量差異較大。其中,藥典收載品種的總蒽醌含量較高,而非藥典品種有 2個(gè)品種的總蒽醌含量較低、3個(gè)品種含量極低。因此,為保證藥品的安全有效性,選用決明子時(shí)應(yīng)使用藥典收載的品種。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典:一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:135-136.

[2]毛萬姮,商黔惠,劉愛東,等.決明子提取物對(duì)大鼠主動(dòng)脈擴(kuò)血管作用的機(jī)制[J].中華高血壓雜志,2010,18 (1):60-64.

[3]張加雄,萬麗,胡軼娟,等.決明子降血脂有效部位的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2006,17(6):904-905.

[4]俞發(fā)榮,連秀珍,王小琦,等.決明子不同部位提取物的調(diào)血脂作用[J].中國(guó)臨床康復(fù),2006,10(39):110-112.

[5]張加雄,萬麗,胡軼娟,等.決明子提取物瀉下作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2005,16(6):467-468.

[6]張加雄,萬麗,王凌.決明子降血脂有效部位的化學(xué)成分[J].華西藥學(xué)雜志,2008,23(6):648-650.