復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)維甲酸致骨質(zhì)疏松癥大鼠的影響研究

張茹 秦莉偉 陳軍麗 許宏斌

骨質(zhì)疏松(osteoporosis)是由于骨量減少，骨的微觀結(jié)構(gòu)退化，致使骨的脆性增加，并且易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。中藥治療、預(yù)防骨質(zhì)疏松是目前臨床治療的重要手段之一。復(fù)方補(bǔ)骨脂方劑為我院多年協(xié)定處方，對(duì)改善骨質(zhì)疏松患者的癥狀取得了明顯療效［1-3］。本實(shí)驗(yàn)觀察了復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)維甲酸致骨質(zhì)疏松大鼠的影響，為臨床使用該顆粒劑提供客觀理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與儀器 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒(石家莊市第三醫(yī)院，批號(hào):060215);仙靈骨葆膠囊(貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，批號(hào): 040711，規(guī)格0.5g/粒);鈣測(cè)試盒、磷測(cè)試盒、堿性磷酸酶測(cè)試盒(均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品);維甲酸原料(上海南翔試劑有限公司);儀器:5000型火焰原子吸收分光光度計(jì)(美國(guó))、自動(dòng)生化分析儀。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠(二級(jí))，雄性，體重200～220 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SCXK(冀)2003-1-003。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 將大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組(純化水1 ml/100 g)、模型對(duì)照組(維甲酸70 mg/kg +純化水1 ml/100 g)、復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒小劑量組(維甲酸70 mg/kg+復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒0.35 g/kg)、復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒中劑量組(維甲酸70 mg/kg+復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒0.7 g/kg)，復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒大劑量組(維甲酸 70 mg/kg+復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒

1.4 g/kg)及陽(yáng)性藥仙靈骨堡膠囊組(維甲酸70 mg/kg+仙靈骨葆膠囊0.7 g/kg)，連續(xù)2周。2周后6組大鼠均停服維甲酸，繼續(xù)給藥2周。末次給藥后40 min，將大鼠用乙醚麻醉，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，采用化學(xué)法測(cè)定血清鈣、磷含量，堿性磷酸酶(ALP)活性;處死大鼠，剖取睪丸、前列腺+精囊腺稱重，計(jì)算臟器系數(shù);迅速小心剖取左側(cè)股骨，并鈍性剝離所有軟組織，將左側(cè)股骨以氯仿∶甲醇混合液(2∶1)脫脂72 h，置烘箱中120℃干燥6 h，在將干骨置800℃馬福爐內(nèi)灰化6 h，冷卻后稱重。取灰分精密稱定適量，加6 mol/L稀鹽酸溶解成無(wú)色透明液體，定容10 ml，使用火焰原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定骨鈣含量，采用鉬蘭法測(cè)定骨鈣含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)量資料以 ˉx±s表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠體重及一般情況的影響 模型對(duì)照組大鼠活動(dòng)緩慢，反應(yīng)遲鈍，倦縮，拱背，豎毛，毛色枯槁，食量減少，體重明顯減輕(P＜0.01)。復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠一般狀況明顯較模型對(duì)照組大鼠改善，體重明顯增加(P＜0.01)。見表1。

表1 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠體重的影響n=10，g，±s

表1 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠體重的影響n=10，g，±s

注:與模型對(duì)照組比較，*P＜0.01

組別 劑量(g/kg)體重(g)實(shí)驗(yàn)前 實(shí)驗(yàn)后正常對(duì)照組 - 216±9 265±16*模型對(duì)照組 - 218±17 209±14復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒 0.35 211±9 232±13* 0.7 215±14 249±14* 1.4 207±12 248±13*仙靈骨葆膠囊 0.7 213±15 241±18*

2.2 對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠股骨骨灰重的影響 模型對(duì)照組大鼠骨灰重明顯較正常對(duì)照組大鼠降低(P＜0.01)。復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠骨灰重均較模型對(duì)照組大鼠明顯增高(P＜0.05或＜0.01)。見表2。

表2 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨灰重的影響n=10，g，±s

表2 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨灰重的影響n=10，g，±s

注:與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)灰重正常對(duì)照組 - 0.352±0.029#模型對(duì)照組 - 0.207±0.026復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒 0.35 0.251±0.048* 0.7 0.268±0.026# 1.4 0.287±0.042#仙靈骨葆膠囊 0.7 0.304±0.039#

2.3 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)大鼠骨鈣、磷含量的影響 模型對(duì)照組大鼠骨鈣含量明顯較正常對(duì)照組大鼠降低(P＜0.01)。復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠骨鈣含量明顯較模型對(duì)照組大鼠升高(P＜0.01)，但6組大鼠骨磷差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表3 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨鈣、磷含量的影響n=10，ng/g，±s

表3 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨鈣、磷含量的影響n=10，ng/g，±s

注:與模型對(duì)照組比較，*P＜0.01

組別 劑量(g/kg)鈣含量 磷含量正常對(duì)照組 - 202±14*133±12模型對(duì)照組 - 168±9 124±12復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒 0.35 189±11* 130±9 0.7 189±8* 137±17 1.4 183±14* 129±9仙靈骨葆膠囊 0.7 197±8*131±8

2.4 對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠性腺指數(shù)的影響 模型對(duì)照組大鼠睪丸指數(shù)、前列腺+精囊指數(shù)均較正常對(duì)照組顯著降低(P＜ 0.01)，表明大鼠灌服維甲酸已造成性腺器官萎縮。復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠睪丸指數(shù)、前列腺+精囊腺指數(shù)顯著高于模型對(duì)照組(P＜0.05或＜0.01)。見表4。

表4 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠性腺器官重量的影響n=10，±s

表4 復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠性腺器官重量的影響n=10，±s

注:與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)睪丸指數(shù)(g/100 g)前列腺+精囊指數(shù)(g/100 g)正常對(duì)照組 - 1.240±0.169# 0.434±0.056#模型對(duì)照組 - 0.818±0.172 0.269±0.085復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒 0.35 1.051±0.199* 0.348±0.042* 0.7 0.994±0.0843# 0.330±0.067* 1.4 0.957±0.133 0.345±0.086*仙靈骨葆膠囊 0.7 1.154±0.189#0.326±0.075

2.5 對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠血液生化指標(biāo)變化 6組大鼠血鈣、血磷含量無(wú)明顯變化(P＞0.05)，但堿性磷酸酶(ALP)活性較正常對(duì)照組明顯升高(P＜0.01)，復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒(0.35 g/kg、0.7 g/kg、1.4 g/kg)組大鼠堿性磷酸酶(ALP)活性均明顯較模型對(duì)照組降低(P＜0.05或＜0.01)。見表5。

表5 對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠血液生化指標(biāo)的影響 n=10，±s

表5 對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠血液生化指標(biāo)的影響 n=10，±s

注:與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，#P＜0.01

組別 劑量(g/kg)血鈣含量(mmol/L)血磷含量(mg/dl)堿性磷酸酶(U/dl)正常對(duì)照組 - 2.61±0.23 5.6±0.7 9.1±2.4#模型對(duì)照組 - 2.20±0.24 4.5±0.7 15.9±4.3復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒 0.35 2.49±0.41 5.0±0.7 12.6±4.4 0.7 2.50±0.30 5.2±1.3 10.1±3.2# 1.4 2.81±0.33 5.3±0.9 10.8±3.6#仙靈骨葆膠囊 0.7 2.53±0.29 5.3±0.7 11.4±3.0*

3 討論

骨質(zhì)疏松癥是一種全身性代謝性骨骼疾病，以骨量減少，骨的微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞為特征，導(dǎo)致骨脆性增加，容易發(fā)生骨折，其發(fā)病率和死亡率都較高。骨質(zhì)疏松癥可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類，其中原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥占骨質(zhì)疏松癥的90%［4］。它又可分為2種亞型，即Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型又稱絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，Ⅱ型為老年性骨質(zhì)疏松癥。繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥可繼發(fā)于其他疾病或由藥物引起。中醫(yī)把骨質(zhì)疏松癥歸屬“骨痿、骨枯、骨痹”范疇，認(rèn)為其發(fā)病機(jī)理為腎虛及脾虛，故針對(duì)病機(jī)而采用補(bǔ)腎壯骨、益氣健脾的治療法則。治療骨質(zhì)疏松的中藥盡管在臨床上顯示了良好的療效，但需要進(jìn)行大量系統(tǒng)的試驗(yàn)研究工作，如臨床前藥理、毒理試驗(yàn)，動(dòng)物脫毒試驗(yàn)等。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:復(fù)方補(bǔ)骨脂顆粒可明顯改善維甲酸致骨質(zhì)疏松大鼠的一般狀況，減緩體重的減輕和性腺器官的萎縮，降低血清堿性磷酸酶活性，增加骨質(zhì)疏松大鼠骨灰重及骨鈣含量。研究結(jié)果為臨床用藥提供了必要的理論依據(jù)。

1 吳波，徐冰，黃添友，等.抗骨松沖劑對(duì)維甲酸所致大鼠骨質(zhì)疏松的防治作用.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16:32-36.

2 陳奇主編.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第1版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996.217.

3 徐叔云主編.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991.136.

4 白新明.椎體成形術(shù)治療老年骨質(zhì)疏松性椎體壓縮骨折體會(huì).河北醫(yī)藥，2010，32:1928-1929.