針?biāo)幉⒂脤?duì)脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的影響

劉亞麗,楊麗娟,晉志高,王曉寧

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針?biāo)幉⒂脤?duì)脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的影響

劉亞麗,楊麗娟,晉志高,王曉寧

(煤炭總醫(yī)院,北京 100028)

觀察脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的改變及針刺配合西洋參湯對(duì)其改變的影響。將40只wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、西洋參組、針?biāo)幉⒂媒M,每組10只。模型組、西洋參組、針?biāo)幉⒂媒M用偏食法建立脾虛證動(dòng)物模型。造模成功后,模型組用生理鹽水1 mL/100 g體重灌胃;西洋參組給予西洋參湯1 mL/100 g灌胃;針?biāo)幉⒂媒M采用針刺雙側(cè)足三里、三陰交,并給予西洋參湯1 mL/100 g灌胃。以上治療均為每日1次,治療10 d。第11天處死4組動(dòng)物,取樣做測(cè)定血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、反三碘甲狀腺原氨酸(rT3)、促甲狀腺素(TSH)含量,并測(cè)量各組動(dòng)物造模前后體重,胸腺、脾臟質(zhì)量。模型組大鼠造模后體重、胸腺質(zhì)量/體重、脾臟質(zhì)量/體重比及血清T3、T4含量顯著下降,與正常對(duì)照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05,＜0.01)。西洋參組與針?biāo)幉⒂媒M大鼠胸腺質(zhì)量/體重及T3、T4含量較模型組有顯著提高(均＜0.01);針?biāo)幉⒂媒M大鼠體重和脾臟質(zhì)量/體重與模型組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。針?biāo)幉⒂媚芨纳破⑻撟C大鼠的脾虛癥狀,其作用機(jī)理與調(diào)節(jié)甲狀腺激素水平有關(guān)。

針刺療法;針?biāo)幉⒂?西洋參;甲狀腺激素;大鼠

現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),脾虛證見于臨床諸多疾病,消化、內(nèi)分泌、神經(jīng)、免疫系統(tǒng)的疾病均可由脾虛引起[1]。脾虛證患者及動(dòng)物模型中,有不同程度的神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫學(xué)指標(biāo)改變,機(jī)體免疫狀態(tài)低下,提示脾虛證與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)環(huán)路有一定聯(lián)系[2]。本實(shí)驗(yàn)采用偏食法建造中醫(yī)脾虛動(dòng)物模型,通過觀察各組動(dòng)物血清甲狀腺激素水平的變化,探討針?biāo)幉⒂脤?duì)脾虛證大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌免疫方面的影響,以期為脾虛證治療提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù),現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)2月齡wistar大鼠40只,由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心提供,雌雄各半,體重為(200±20)g。動(dòng)物室為開放式、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室,溫度、照明、噪聲、換氣均控制在規(guī)定范圍內(nèi),普通飼料喂養(yǎng),自由飲水。

1.2 主要試劑及儀器

西洋參購(gòu)自北京同仁堂藥店。取西洋參300 g,冷水浸泡1 h,在武火煎煮15 min后文火煮30 min,取出頭煎液,再加冷水同上方法煎煮為2煎。取全部水煎液混勻過濾后,于60℃水浴濃縮至300 mL,為西洋參湯,生藥含量為1 g/mL,置于冰箱內(nèi)保存。血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、反三碘甲狀腺原氨酸(rT3)、促甲狀腺素(TSH)放射免疫試劑盒均由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。SN-695B型智能放射免疫測(cè)量?jī)x由上海原子核研究所日環(huán)儀器一廠生產(chǎn)。

1.3 造模方法

正常對(duì)照組10只動(dòng)物生理鹽水灌胃,每日1次,每次1 mL/100 g體重,共10 d,第11天處死動(dòng)物。其余30只動(dòng)物采用彭成等[3]方法造模,50%醫(yī)用乙醇1 mL /100 g體重,山西白醋(pH=3)1 mL/100 g體重,誘發(fā)脾氣虛大鼠模型。于實(shí)驗(yàn)第1天用50%白酒1 mL/100 g體重灌胃,第2天后每天用山西白醋1 mL/100 g體重灌胃,共10 d。第11天停止造模。

造模成功后將動(dòng)物隨機(jī)分為3組。模型組10只,改用生理鹽水1 mL/100 g體重灌胃,每日1次,共10 d;針?biāo)幉⒂媒M10只,針刺雙側(cè)足三里、三陰交,取穴參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》,選用0.30 mm×40 mm毫針,針刺深度為0.2～0.3 cm,采用平補(bǔ)平瀉法捻轉(zhuǎn)行針1 min,留針20 min,再給予西洋參湯1 mL/100 g體重灌胃,每日1次,共10 d;西洋參組10只,給予西洋參湯1 mL/100 g體重灌胃,每日1次,共10 d。第11天處死3組動(dòng)物,取樣做各種檢查。

1.4 觀察指標(biāo)及方法

各組動(dòng)物于最后1次給藥后16 h眼球取血,觀察各組大鼠血清中T3、T4、rT3、TSH水平的變化。采用放射免疫分析法,嚴(yán)格按試劑盒說明書要求并由專人進(jìn)行操作,所有樣品一次完成實(shí)驗(yàn)。同時(shí)測(cè)量各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前后體重、胸腺和脾臟質(zhì)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較采用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較,采用檢驗(yàn),以＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 針?biāo)幉⒂脤?duì)實(shí)驗(yàn)性脾虛證大鼠體重及臟器指數(shù)的影響

由表1可見,實(shí)驗(yàn)前各組大鼠體重比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);模型組大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后體重減輕,與正常對(duì)照組比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。經(jīng)針刺和灌服西洋參后,西洋參組大鼠體重比模型組略有升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05);針?biāo)幉⒂媒M大鼠體重升高,與模型組和西洋參組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。

表1 各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前后體重比較 (±s,g)

注:與正常對(duì)照組比較1)＜0.05;與針?biāo)幉⒂媒M比較2)＜0.05

由表2可見,模型組大鼠胸腺質(zhì)量/體重、脾臟質(zhì)量/體重與正常對(duì)照組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。經(jīng)針刺和灌服西洋參后,西洋參組和針?biāo)幉⒂媒M胸腺質(zhì)量/體重均升高,與模型組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。西洋參組、針?biāo)幉⒂媒M及正常對(duì)照組3組間比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。針?biāo)幉⒂媒M大鼠脾臟質(zhì)量/體重升高,與模型組和西洋參組比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。

表2 各組大鼠臟器質(zhì)量/體重比較 (±s,mg/g)

注:與正常對(duì)照組比較1)＜0.05;與模型組比較2)＜0.05;與針?biāo)幉⒂媒M比較3)＜0.05

2.2 針?biāo)幉⒂脤?duì)實(shí)驗(yàn)性脾虛證大鼠血清甲狀腺激素水平的影響

由表3可見,模型組大鼠血清T3、T4含量較正常對(duì)照組顯著降低(均＜0.01)。經(jīng)針刺和灌服西洋參后,西洋參組和針?biāo)幉⒂媒M血清T3、T4含量均比模型組提高(均＜0.01)。西洋參組、針?biāo)幉⒂媒M及正常對(duì)照組3組間血清T3、T4含量比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05)。

表3 各組動(dòng)物血清甲狀腺激素含量比較 (n=10)(±s)

注:與正常對(duì)照組比較1)＜0.01;與模型組比較2)＜0.01

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用偏食法(先食酒后食醋)建立脾虛證動(dòng)物模型。從食醋第3天起,動(dòng)物逐漸出現(xiàn)脾虛證表現(xiàn),如體重減輕、食量減少、消瘦、腹瀉、體溫下降、耐寒力差、拱背、不好動(dòng)、毛發(fā)松散、脫肛、自由活動(dòng)度減少等,按中醫(yī)學(xué)進(jìn)行辨證可以判定模型動(dòng)物為脾虛證。經(jīng)針刺和灌服西洋參后,西洋參組和針?biāo)幉⒂媒M大鼠體重增加、食量增加、耐寒力改善、毛發(fā)正常、自由活動(dòng)度增強(qiáng),顯示針刺和灌服西洋參可改善脾虛癥狀。

甲狀腺是機(jī)體重要的內(nèi)分泌腺體之一,它通過分泌甲狀腺激素影響和調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和能量代謝活動(dòng)。T3、T4是甲狀腺細(xì)胞分泌的一組維持機(jī)體代謝、促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)分化成熟的重要激素,也是反映甲狀腺功能的重要指標(biāo)。甲狀腺與胃腸道在胚胎期都起源于原始前腸,在正常情況下,消化系統(tǒng)對(duì)甲狀腺外周代謝起著重要作用;同時(shí),甲狀腺也能促進(jìn)消化系統(tǒng)吸收功能,故甲狀腺激素與消化系統(tǒng)功能的關(guān)系密切[4]。在病理狀態(tài)時(shí),脾虛患者吸收功能下降,糖攝入不足,5'-脫碘酶活性減低,結(jié)果T4向T3轉(zhuǎn)化減少,同時(shí)T3吸收也減少,這可能是脾虛患者血清甲狀腺激素水平下降的原因之一[5]。而胸腺和脾臟都是淋巴器官,與甲狀腺關(guān)系密切,T3、T4是參與機(jī)體細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和能量代謝的重要激素之一,T3、T4的持續(xù)降低會(huì)減少體內(nèi)物質(zhì)吸收,從而使得能量代謝降低,通過免疫-神經(jīng)-內(nèi)分泌之間復(fù)雜的相互作用,機(jī)體的免疫、代謝功能下降,進(jìn)一步影響到胸腺、脾臟的物質(zhì)吸收和代謝,最終使胸腺質(zhì)量/體重、脾臟質(zhì)量/體重降低。本研究中,脾虛模型組動(dòng)物血清T3、T4含量均比正常對(duì)照組顯著下降(均＜0.01),與陳芝喜等[6]報(bào)道的結(jié)果相符。

足三里穴屬胃經(jīng),三陰交穴屬脾經(jīng),脾胃互為表里,兩穴配伍可以治療許多消化系統(tǒng)疾病。針刺兩穴可影響神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫系統(tǒng),以提高機(jī)體免疫功能[7],但其治療機(jī)制尚未系統(tǒng)闡明。西洋參味苦、性涼,入心、肺、腎經(jīng),功能滋陰降火、益氣生津。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,腎為先天之本,對(duì)免疫系統(tǒng)發(fā)揮主導(dǎo)作用,能維持和調(diào)整免疫平衡及其穩(wěn)定。現(xiàn)代藥理研究表明,西洋參具有增強(qiáng)免疫、抗腫瘤、抗炎抗病毒、抗誘變作用[8]。

陳芝喜等[6]認(rèn)為甲狀腺激素可以與下丘腦-垂體-甲狀腺-胸腺軸進(jìn)而與整個(gè)環(huán)路發(fā)生聯(lián)系,刺激細(xì)胞因子的分泌,以增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。本實(shí)驗(yàn)中脾虛模型組血清T3、T4水平下降明顯,說明脾虛證動(dòng)物有甲狀腺代謝和功能失調(diào),進(jìn)一步降低整個(gè)機(jī)體的代謝和免疫功能。而西洋參組和針?biāo)幉⒂媒M較模型組胸腺質(zhì)量/體重、T3、T4均明顯增加,說明針刺和灌服西洋參可以增強(qiáng)機(jī)體吸收能力,通過調(diào)節(jié)動(dòng)物的免疫-內(nèi)分泌系統(tǒng),促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育和能量代謝,使T3、T4的吸收和轉(zhuǎn)化增加,最終血清中T3、T4的含量升高明顯。甲狀腺激素與受體結(jié)合后,通過調(diào)節(jié)基因表達(dá),合成蛋白質(zhì)和酶產(chǎn)生生物效應(yīng)。胸腺是機(jī)體的重要淋巴器官,其功能與免疫緊密相關(guān),分泌胸腺激素及激素類物質(zhì),胸腺細(xì)胞存在甲狀腺激素受體,與甲狀腺激素結(jié)合后,促進(jìn)胸腺因子的分泌,提高機(jī)體胸腺依賴性免疫功能[9]。針刺和灌服西洋參可以通過調(diào)節(jié)動(dòng)物的丘腦-垂體-甲狀腺-胸腺內(nèi)分泌環(huán),提高動(dòng)物機(jī)體的代謝和免疫水平,使胸腺質(zhì)量/體重增加。這些是中醫(yī)學(xué)“脾主運(yùn)化”理論在實(shí)驗(yàn)研究中的客觀體現(xiàn)。

針?biāo)幉⒂媒M試驗(yàn)后體重和脾臟質(zhì)量/體重較模型組顯著提高(＜0.05),而西洋參組試驗(yàn)后體重和脾臟質(zhì)量/體重較模型組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(＞0.05),可能與針刺和灌服西洋參的疊加作用有關(guān)。這需在以后的研究中進(jìn)一步證實(shí),也為以后其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)提供有限參考。

綜上所述,針?biāo)幉⒂媒M和西洋參組的胸腺質(zhì)量/體重及血清T3、T4水平與模型組比較均升高,同時(shí)針?biāo)幉⒂媒M試驗(yàn)后體重和脾臟質(zhì)量/體重較模型組顯著提高,提示針刺足三里、三陰交穴結(jié)合西洋參湯和單獨(dú)服用西洋參湯具有下丘腦-垂體-甲狀腺軸多層次的調(diào)節(jié)作用,對(duì)脾虛證和脾虛證引起的代謝免疫低下,有顯著的治療作用,為脾虛證的研究提供了理論依據(jù)。

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Effect of Combined Acupuncture and Medicine on Serum Thyroid Hormone in Rats with Spleen Deficiency Syndrome

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,100028,

To observe changes in serum thyroid hormone levels and the effect of acupuncture plus American ginseng decoction on the changes in rats with spleen deficiency syndrome.Forty Wister rats were randomly allocated to normal, model, American ginseng and combined acupuncture and medicine groups, 10 rats each. An animal model of spleen deficiency syndrome was made by dietary bias in the model, American ginseng and combined acupuncture and medicine groups. After successful model making, the model group received an oral gavage of normal saline 1 ml/100 g; the American ginseng group, an oral gavage of American ginseng decoction 1 ml/100 g; the combined acupuncture and medicine group, acupuncture at bilateral points Zusanli and Sanyinjiao plus an oral gavage of American ginseng decoction 1 ml/100 g. The above treatments were given once daily for 10 days. The four groups of rats were sacrificed at 11 days. Samples were taken for the measurement of serum triiodothyronine (T3), thyroxine (T4), reverse triiodothyronine (rT3) and thyroid stimulating hormone (TSH) contents. Body, spleen and thymus weights were also measured in every group of rats before after model making.Body weight, thymus weight/body weight and spleen weight/body weight, and serum T3and T4contents decreased markedly in the model group of rats after model making. There were statistically significant differences compared with the normal group (＜0.05,＜0.01). Thymus weight/body weight, and serum T3and T4contents increased significantly in the American ginseng and combined acupuncture and medicine groups of rats compared with the model group (all＜0.01). There were statistically significant differences in body weight and spleen weight/body weight between the combined acupuncture and medicine group and the model group (＜0.05).The combined use of acupuncture and medicine can relieve the symptoms of spleen deficiency in rats with spleen deficiency syndrome. The mechanism of its action is related to regulating thyroid hormone levels.

Acupuncture therapy; Combined use of acupuncture and medicine; American ginseng; Thyroid hormones; Rats

R2-03

A

10.3969/j.issn.1005-0957.2012.11.844

1005-0957(2012)11-0844-03

國(guó)家自然科學(xué)基金(30572416)

劉亞麗(1975 - ),女,主治醫(yī)師

2012-03-03