豬喘氣病的診斷與防治

梁 明 張友基 古從偉 羅丕仁

（1.廣元市元壩區(qū)香溪鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站，廣元 628025；2.廣元市元壩區(qū)元壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，廣元 628021；3.廣元市元壩區(qū)畜牧食品局，廣元 628021；4.廣元市元壩區(qū)王家鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，廣元 628026）

豬喘氣病又稱(chēng)地方性流行性肺炎，是豬的一種慢性呼吸道傳染病，主要癥狀為咳嗽和氣喘，病變特征是融合性支氣管肺炎，常發(fā)生于肺臟前腹側(cè)。本病病原為豬肺炎支原體，是由Mare和Switzer在l965年首先從患病豬的肺組織中分離出來(lái)的。此病廣泛存在于世界各地，發(fā)病率一般在50%～80%。在國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)的陽(yáng)性率在30～50%?；钾i長(zhǎng)期生長(zhǎng)發(fā)育不良，增重下降9%，飼料利用率降低13.8%。豬喘氣病一般很難徹底治愈，漸漸成為頑固性疾病而令人頭疼，并且難以凈化。因此如何有效預(yù)防和控制豬喘氣病成為當(dāng)今養(yǎng)豬業(yè)面臨的一項(xiàng)重要課題。

1 病原體

豬肺炎支原體缺乏細(xì)胞壁而不同于細(xì)菌，能在無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基生長(zhǎng)繁殖，并含有RNA和DNA而有別于病毒。支原體以二分裂方式繁殖，基本形態(tài)為圓形、絲狀形，后者易形成分枝狀菌絲，因而得名支原體。其大小介于病毒和細(xì)菌之間，最小直徑125～250nm，可通過(guò)濾器?；蚪M小，只有5×108道爾頓，是最小的能自我復(fù)制的原核生物。因無(wú)細(xì)胞壁，故是多形態(tài)微生物，有環(huán)狀，球狀，點(diǎn)狀，桿狀和兩極狀。電子顯微鏡下以類(lèi)圓形、圓形顆粒多見(jiàn)，菌體含有核糖體，外有3層膜樣結(jié)構(gòu)。

本菌生長(zhǎng)條件要求較嚴(yán)格，不易培養(yǎng)。體外培養(yǎng)時(shí)需富含血清、酵母浸液、核酸等成分的培養(yǎng)基才能生長(zhǎng)，最常用的是 Friis在1975年報(bào)道的培養(yǎng)基。

豬肺炎支原體對(duì)自然環(huán)境抵抗力不強(qiáng)，圈舍、用具上的支原體，一般在3 d左右失活，病料懸液中支原體在15～20℃，放置36 h，即喪失致病力。豬肺炎支原體對(duì)青霉素和磺胺類(lèi)藥物不敏感，但對(duì)壯觀霉素、土霉素和卡那霉素敏感。常用的化學(xué)消毒劑均能達(dá)到消毒目的。

2 癥狀和病理變化

在單純感染肺炎支原體時(shí)，主要以咳嗽與氣喘為主要臨床癥狀，體溫?zé)o多大變化，隨著病的發(fā)展咳嗽次數(shù)逐漸增多，發(fā)生呼吸困難，表現(xiàn)為明顯的腹式呼吸，急促而有力；嚴(yán)重者張口喘氣，像拉風(fēng)箱，有喘鳴音，此時(shí)精神萎頓食欲減少或廢絕，身體日漸消瘦，皮毛粗亂，生長(zhǎng)發(fā)育不良，病程可持續(xù)數(shù)月。有少數(shù)病豬發(fā)病初期體溫稍有升高，病程較短，約1周左右，常因衰竭和窒息而死亡，死亡率較高。

豬支原體肺炎的病理變化主要在肺，有不同程度的水腫和氣腫，2肺的尖葉和心葉呈對(duì)稱(chēng)性、融合性支氣管肺炎病變。常發(fā)生于尖葉、心葉、中間葉下垂部和膈葉前部下緣，出現(xiàn)淡紅色或淺紫色呈“蝦肉樣”病變，肺門(mén)和縱膈淋巴結(jié)明顯腫大、質(zhì)硬、灰白色切面。其他內(nèi)臟一般無(wú)明顯變化。在診斷本病時(shí)應(yīng)注意繼發(fā)其他他豬呼吸道疾病如豬肺疫、豬流感和豬藍(lán)耳病等引起的病理變化，如高溫、犬坐式呼吸、皮膚發(fā)紅等。

3 診斷方法

3.1 臨床診斷

豬肺炎支原體的主要臨床癥狀為咳嗽和氣喘，病變的特征是肺的尖葉、心葉、中間葉和膈葉前緣呈肉樣或蝦肉樣實(shí)變，肺門(mén)淋巴結(jié)腫大。與其他病原共同感染后有發(fā)熱、食欲廢絕、呼吸困難等癥狀。

3.2 細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)

對(duì)臨床感染肺炎支原體的肺組織進(jìn)行體外培養(yǎng)被認(rèn)為是監(jiān)測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，但是這種病原分離需要特定的Friis培養(yǎng)基。Sorensen等對(duì)支原體培養(yǎng)法、免疫熒光檢測(cè)、ELISA檢測(cè)以及PCR檢測(cè)方法進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)方法是最敏感的檢測(cè)方法，然而進(jìn)行支原體培養(yǎng)比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，從臨床樣品中分離到支原體需要4～8周。

3.3 血清學(xué)檢測(cè)

血清學(xué)檢測(cè)用于監(jiān)測(cè)豬群的豬支原體肺炎抗體狀況，用已知特異性豬肺炎支原體抗原檢測(cè)動(dòng)物血清中特異性抗體，通過(guò)對(duì)血清中抗體效價(jià)的變化或特異性抗體的有無(wú)，判定病原體感染情況或者免疫效果。血清學(xué)檢測(cè)雖然簡(jiǎn)單方便，但仍有缺點(diǎn)，主要是難以區(qū)分疫苗抗體與感染抗體。

3.4 間接血凝試驗(yàn)（IHA）

間接血凝試驗(yàn)具有一定的特異性和敏感性，是常用診斷方法之一。但由于血清中含有特異吸附因子易溶血，制備的紅細(xì)胞存在個(gè)體差異不易標(biāo)準(zhǔn)化，試驗(yàn)不易操作使得IHA在臨床應(yīng)用中受到一定的限制。Dowdle等用IHA檢測(cè)豬肺炎支原體抗體，感染豬的血清能使綿羊紅細(xì)胞自然溶血。Lam等用豬紅細(xì)胞代替綿羊紅細(xì)胞，雖然在試驗(yàn)中不易發(fā)生溶血現(xiàn)象，但是其效價(jià)比用綿羊紅細(xì)胞低。

3.5 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是檢測(cè)豬血清中豬肺炎支原體抗體的有效試驗(yàn)之一，包括微管補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和微量修正補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)在試驗(yàn)接種豬和自然感染豬中，CFT陽(yáng)性率與豬肺部病變有較好的相關(guān)性，但仍存在著很高的假陽(yáng)性和假陰性。Lloyd等研究認(rèn)為，假陰性是由于循環(huán)抗原的影響，而假陽(yáng)性是由于感染了其他支原體出現(xiàn)交叉反應(yīng)。此外，CFT不能確定4～9周齡豬是否感染豬肺炎支原體。CFT在敏感性和特異性方面存在一定的局限性，但如果綜合運(yùn)用臨床診斷和病理顯微檢查，CFT仍是確定肺炎支原體感染狀況的有效手段之一。

3.6 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA通過(guò)檢測(cè)血清樣品，即可以檢測(cè)抗原也可以檢測(cè)抗體，其結(jié)果反映動(dòng)物的感染情況和抗體水平。與IHA和CFT相比，ELISA具有更高的敏感性和特異性，Armstrong和Bereiter用ELISA在保存1年的血清樣品中檢測(cè)到了豬肺炎支原體抗體。Bruggmann等首次報(bào)道了以SDS提取物作抗原，用間接ELISA檢測(cè)豬肺炎支原體抗體的敏感性較高。Futo克隆了Mh22表面抗原（p46）基因，在大腸埃希菌中表達(dá)，用提純的重組p46蛋白作抗原，用于ELISA診斷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與其他豬支原體無(wú)交叉反應(yīng)。Potier等建立了一種用豬肺炎支原體特有的40 ku膜蛋白作抗原的單克隆抗體阻斷ELISA，用此方法檢測(cè)接種豬鼻支原體和絮狀支原體的SPF豬和感染肺炎支原體豬的血清，發(fā)現(xiàn)肺炎支原體與絮狀支原體和豬鼻支原體無(wú)交叉反應(yīng)。ELISA檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜。目前已有商品化的ELISA檢測(cè)試劑盒，包括間接ELISA、雙夾心ELISA、競(jìng)爭(zhēng)ELISA和斑點(diǎn)ELISA等類(lèi)型。

3.7 分子檢測(cè)技術(shù)

3.7.1 原位雜交技術(shù)（ISH） 原位雜交技術(shù)用于檢測(cè)福爾馬林固定、石蠟包埋的肺組織中的豬肺炎支原體 DNA。這種檢測(cè)技術(shù)主要是利用肺炎支原體特定的基因進(jìn)行地高辛標(biāo)記為探針進(jìn)行檢測(cè)。熒光核酸探針也可用來(lái)標(biāo)記l6 S rRNA進(jìn)行檢測(cè)豬肺炎支原體。這種檢測(cè)技術(shù)的缺點(diǎn)是只能檢測(cè)死亡后的臨床樣品，并且檢測(cè)費(fèi)時(shí)，因此不能夠用來(lái)進(jìn)行快速檢測(cè)。

3.7.2 PCR檢測(cè)技術(shù) PCR檢測(cè)方法與細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)方法相比，具有速度快、特異性高等優(yōu)點(diǎn)，Stemke等用部分肺炎支原體 16 S rRNA基因作目標(biāo)分子，利用肺炎支原體特有的基因序列作引物建立了直接PCR，檢測(cè)時(shí)間只需4 h。隨后，Harasawa等用合成的引物通過(guò)PCR擴(kuò)增出520bp 豬肺炎支原體 DNA，擴(kuò)增出的DNA用合成的寡核苷酸探針進(jìn)行印跡雜交鑒定，證明了PCR有特異性。PCR檢測(cè)技術(shù)既可以檢測(cè)死亡動(dòng)物體內(nèi)的肺炎支原體也可以檢測(cè)活動(dòng)物體內(nèi)的肺炎支原體。肺炎支原體定植于上呼吸道纖毛，可以用支氣管棉拭子、支氣管肺泡灌洗液（BALF）和肺組織樣品進(jìn)行肺炎支原體PCR檢測(cè)，但是有研究認(rèn)為對(duì)肺組織樣品檢測(cè)方式優(yōu)于BALF方式。不過(guò)PCR法也有其缺點(diǎn)，它診斷費(fèi)用較高，對(duì)人員的操作技能具有一定要求，檢測(cè)過(guò)程中處理不當(dāng)也容易出現(xiàn)假陽(yáng)性現(xiàn)象。

4 預(yù)防

防制豬場(chǎng)肺炎霉形體的感染應(yīng)堅(jiān)持綜合防治措施，疫苗預(yù)防、生物安全、藥物控制缺一不可。

4.1 未發(fā)病地區(qū)和豬場(chǎng)的主要措施

（1）堅(jiān)持自繁自養(yǎng)原則。盡量不從外地引進(jìn)種豬，如必須引進(jìn)時(shí)，購(gòu)入后進(jìn)行嚴(yán)格的檢疫和隔離觀察。

（2）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。給予全價(jià)飼料，提高豬的體質(zhì)。推廣人工授精，避免母豬與種公豬直接接觸，保護(hù)健康母豬群。雖然從豬的精液里已分離到支原體，但是研究工作者認(rèn)為通過(guò)人工授精使支原體傳播的可能性不大。

（3）免疫接種。豬肺炎支原體自然和人工感染都可產(chǎn)生一定的免疫力，增加豬喘氣病的康復(fù)力，說(shuō)明通過(guò)肺炎支原體疫苗在控制豬喘氣病上是有效的。但機(jī)體對(duì)豬肺炎支原體的免疫力主要是局部的細(xì)胞免疫和黏膜免疫力，特別是氣管和肺臟局部的黏膜免疫力，起保護(hù)作用的主要是存在于上呼吸道和支氣管分泌物中的分泌型IgA。為了保護(hù)豬群不受喘氣病的侵害，所以應(yīng)盡早免疫。在仔豬感染支原體前就要進(jìn)行免疫，這時(shí)誘發(fā)的免疫保護(hù)率更高，保護(hù)時(shí)間更長(zhǎng)。

（4）藥物預(yù)防。肺炎支原體主要采取粘附呼吸道纖毛感染，注射和口服等方式不能使藥物到達(dá)纖毛，因此已感染的豬常復(fù)發(fā)，所以一般藥物預(yù)防采用間斷性給藥，這種投藥可減少疾病造成的發(fā)生，其作用與接種疫苗相似，但對(duì)已感染的豬起不到預(yù)防作用。

4.2 疫區(qū)防控措施

疫區(qū)應(yīng)以監(jiān)測(cè)、免疫為主，結(jié)合隔離、治療、淘汰、消毒等綜合防制技術(shù)，進(jìn)行控制與凈化。種豬和新生仔豬右側(cè)肺內(nèi)注射氣喘病的弱毒凍干疫苗。陽(yáng)性豬場(chǎng)病愈母豬臨產(chǎn)前1個(gè)月用有效的抗生素飼喂2周，如土霉素堿或泰樂(lè)菌素等。氣喘病感染嚴(yán)重的豬場(chǎng)，如哺乳仔豬發(fā)病率高，可對(duì)哺乳豬進(jìn)行疫苗免疫，如5～10日齡首免，25～30日齡加強(qiáng)免疫。同時(shí)，利用各種監(jiān)測(cè)手段淘汰和隔離可疑病豬，隔離病豬使用抗生素如泰樂(lè)菌素、卡那霉素、林可霉素等進(jìn)行治療，并可添加黃芪多糖、多維等提高豬的抵抗力，對(duì)喘氣嚴(yán)重的豬可以使用阿托品、鹽酸麻黃素、氨茶堿等以松弛支氣管平滑肌，使氣喘減緩，并配合消毒切斷傳播途徑。以康復(fù)母豬培育無(wú)病的后代，逐步建立和擴(kuò)大健康豬群。以人工哺乳或健康母豬帶仔培育健康仔豬。鄧道永等在四川蒲江某規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)的實(shí)驗(yàn)證明，3年來(lái)通過(guò)此綜合防制技術(shù)可以使豬肺炎支原體得到控制與凈化，治愈后的豬與易感豬同居感染不發(fā)病，X線胸透、剖檢肺臟均無(wú)眼觀病變，分離豬肺炎支原體為陰性，種豬的連續(xù)2 代仔豬不感染易感豬，結(jié)果證明全場(chǎng)豬只無(wú)豬支原體肺炎。