茶葉對(duì)口腔常見(jiàn)致病菌的抑菌作用

李蘭英

湖北省麻城市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 麻城 438300

茶葉是人們?nèi)粘Ｉ钪凶畛Ｒ?jiàn)的飲料，它對(duì)人類具有多方面的保健功能。如：茶葉可以抗炎癥、防癌;茶葉還具有抗衰老、改善血循環(huán)的狀態(tài)、促進(jìn)消化功能、阻止亞硝酸鹽在體內(nèi)合成、抗尼古?。?]等作用。同時(shí)茶葉還可殺菌，抑制致齲菌合成不溶性葡聚糖［2]有良好的防齲功能。綠茶能抑制變形鏈球菌的研究已做了很多，茶葉中的提取物茶多酚可抑制多種細(xì)菌已有報(bào)道［3、4]。但茶葉的產(chǎn)地不同，加工、炮制方法不同其內(nèi)在成分也會(huì)有所變化。不同茶葉的水浸液對(duì)口腔致病菌有何影響尚未見(jiàn)報(bào)道。我們選用普通綠茶、龍井茶、紅茶、茉莉花茶、紫陽(yáng)茶、烏龍茶6種常見(jiàn)茶葉的水浸液對(duì)齲齒致病菌和牙周炎可疑致病菌進(jìn)行研究，探討飲用不同的茶防齲的作用及防牙周病的可能性。

1 材料和方法

1.1 材料 茶葉：普通綠茶 (杭州茶廠，一級(jí)袋裝);龍井茶茶 (福州茶廠，羅星塔牌);紫陽(yáng)茶 (紫陽(yáng)天然富硒茶廠);烏龍茶 (福建安溪茶廠，安溪鐵觀音)。

細(xì)菌：牙齦卟啉單胞菌 (Porphynomonas gingivalis，P．g，47A －1); 中間 普氏 菌 (Prevatellaintermedia，P．i，ATCC25611);變形鏈球菌 (Streptococcus mutans，S．m，Ingbritt c型);具核梭桿菌 (Fusobacterium nucleatum，F(xiàn)．n，ATCC 10953)。

1.2 方法

1.2.1 茶葉水浸液制備 取4.8g茶葉浸泡于100ml蒸餾水中，攪拌，煮沸后，在無(wú)菌狀態(tài)下靜放1h后，過(guò)濾，進(jìn)行倍比稀釋為 5個(gè)濃度 (即 48mg/ml、24mg/ml、12mg/ml、6mg/ml、3g/ml)。

1.2.2 菌液制備 變鏈菌選用MSB固體培養(yǎng)基，37℃微厭氧培養(yǎng)48h后，取2接種環(huán)菌放入2mlMS液體培養(yǎng)基中，37℃微厭氧培養(yǎng)24h后待用;牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌選用CDC固體培養(yǎng)基，37℃厭氧培養(yǎng)5天后，取2接種環(huán)菌放入2mlCDC液體培養(yǎng)基中，37℃厭氧培養(yǎng)48h后待用。

抑菌試驗(yàn)：將牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌液均勻涂布于CDC固體培養(yǎng)基表面 (變鏈菌用MSB固體培養(yǎng)基)，均勻放上5個(gè)不銹鋼管 (內(nèi)徑：6mm，外徑：8mm，高：10mm)，分別加入不同濃度的茶水浸液，37℃厭氧 (變鏈微厭氧)培養(yǎng)48h后，測(cè)量不銹鋼管周圍的抑菌環(huán)直徑大小 (陰性對(duì)照為注射用水，直徑小于10mm的為陰性)，測(cè)抑菌環(huán)的最大直徑和最小直徑取均值，每組抑菌試驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。

2 結(jié)果

各種茶葉不同濃度水浸液的抑菌結(jié)果。

3 討論

我國(guó)是產(chǎn)茶大國(guó)，民間飲茶歷史悠久，飲茶的優(yōu)及與人體健康關(guān)系已有了多方面的研究。近年來(lái)茶葉防齲的研究發(fā)展很快，早期防齲研究認(rèn)為茶葉中含有的氟元素起重要作用，可降低釉質(zhì)中羥基磷灰石的溶解，改善晶體結(jié)構(gòu)，使已脫鈣的釉質(zhì)再礦化，氟元素還可抑制致齲菌生長(zhǎng)，抑制酶的活性，減少細(xì)菌對(duì)釉面的吸附等［5]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，茶葉中還有很多其它物質(zhì)，也能防齲［6]。國(guó)內(nèi)外已對(duì)茶葉的多種有效成分進(jìn)行分析及純化，并逐步深化研究茶葉的功效及作用機(jī)制。

實(shí)驗(yàn)選用的變形鏈球菌是公認(rèn)的主要致齲菌，可引起牙齒任何部位的齲損;選用的牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、具核梭桿菌是牙周炎的可疑致病菌，在牙周病的發(fā)病和病情進(jìn)展中起重要作用;選這4種菌作為齲病、牙周病的代表菌。

本研究證明普通綠茶、龍井茶、紅茶、茉莉花茶、紫陽(yáng)茶、烏龍茶較高濃度的水浸液 (24mg/ml)均對(duì)變鏈菌有抑菌作用;普通綠茶、紅茶、茉莉花茶、烏龍茶的水浸液在飲用濃度 (12mg/ml)對(duì)變鏈菌有抑菌作用 (飲用濃度：普通袋裝茶葉多為3克/包，沖泡250ml1杯的水中);只有普通綠茶水浸液在低于飲用濃度 (6mg/ml)仍對(duì)變鏈菌有抑菌作用。與謝小梅等［2]對(duì)綠茶水浸液抑制變鏈菌的結(jié)果比較，優(yōu)于其實(shí)驗(yàn)后果，其報(bào)道最佳濃度為13.5g/L。普通綠茶和紅茶水浸液在12mg/ml的濃度對(duì)具核梭桿菌有很好的抑菌效果;普通綠茶和茉莉花茶的水浸液濃度在48mg/ml對(duì)牙齦卟啉單胞菌有抑菌作用。高濃度 (48mg/ml)的普通綠茶水浸液對(duì)牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、變形鏈球菌、具核梭桿菌均有抑菌作用;只有普通綠茶水浸液在飲用濃度即對(duì)變鏈菌和具核梭桿菌有抑菌作用。這說(shuō)明飲茶不僅能防齲，對(duì)牙周炎的預(yù)防可能也有一定作用。

茶葉的抑菌機(jī)制與其中含的有效抑菌成分有關(guān)，茶葉中茶多酚和茶色素對(duì)口腔主要致病菌的抑菌作用的報(bào)道已很多［3、4、7]，綠茶的主要抗菌殺菌物質(zhì)是綠茶多酚 (Chinese green tea polyphenois，CTP)，占茶葉干重的 25%［8、9]，其具有較強(qiáng)的抗菌消炎作用［1]，可抑制口腔中變形鏈球菌、粘性放線菌、唾液鏈球菌等多種細(xì)菌的生長(zhǎng)［3、4、10]，臨界抑菌濃度為0.25%～0.55%，濃度增加，抑菌效果也增強(qiáng)，機(jī)理為凝固蛋白質(zhì)，CTP能與菌體蛋白質(zhì)結(jié)合而導(dǎo)致細(xì)菌死亡［1]。使用0.2%的綠茶茶多酚溶液漱口刷牙還可以有效地抑制牙菌斑的形成，且?guī)缀醪划a(chǎn)生耐藥性［8]。而烏龍茶中提取的酚類化合物 (Oolong tea extract，OTE)抑菌作用更強(qiáng)，其活性成分為烏龍茶所獨(dú)有［11]。紅茶抑菌功效國(guó)外也正在研究。茶葉中含有豐富的無(wú)機(jī)礦物質(zhì)元素，有報(bào)道氟元素可抑制致齲菌生長(zhǎng)［5]，有些金屬鹽如：鋅、銅、汞、鎳對(duì)口腔致齲菌有良好的殺滅作用［12]，還有一些揮發(fā)性物質(zhì)，如：烴、醇、酮、醛、醚、酸等，有中度抗菌活性，抗菌譜廣，能抑制多種細(xì)菌，特別是變鏈菌生長(zhǎng)，其中，橙花叔醇 (nerolidol) 抗菌力最強(qiáng)［9]。

茶葉的產(chǎn)地不同，制作工藝、炮制方法不同，茶葉中抑菌的有效成分也有所改變，普通綠茶抑菌效果高于其它茶葉，粗制的老葉綠茶抑菌作用強(qiáng)于精制嫩葉綠茶 (即普通綠茶優(yōu)于龍井茶)，可能茶葉的成熟度與成分有所變化，有報(bào)道老茶葉氟含量高［13]，但對(duì)CTP含量有無(wú)變化尚無(wú)報(bào)道。紫陽(yáng)茶也是一種綠茶，它產(chǎn)于陜西省紫陽(yáng)縣，是我國(guó)已發(fā)現(xiàn)的2個(gè)天然富硒產(chǎn)茶區(qū)之一［1]，它雖然含有豐富的硒元素，對(duì)預(yù)防心血管疾病、防癌有一定作用，但抑菌并非最佳;有報(bào)道指出其可促齲病發(fā)生［5]。

總之，目前已知茶葉中約含有600多種化學(xué)成分，有些成分的作用和機(jī)理尚不清楚，這些物質(zhì)同存于茶葉中，并協(xié)同發(fā)揮抑菌作用。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明茶葉水浸液可抑制口腔多種致病微生物，有可能改善口腔微生態(tài)環(huán)境。飲茶能有效地降低齲病的發(fā)生，可否預(yù)防牙周疾病還有待深入研究。