石榴皮鞣質(zhì)的藥理學(xué)研究進(jìn)展

付 軍，李 正

(重慶市九龍坡區(qū)第一人民醫(yī)院，重慶 400050)

石榴皮為石榴科植物石榴 Punica granatun L.的干燥果皮，性溫，味甘酸澀，具有澀腸、止血、收斂止瀉以及殺蟲(chóng)功效[1]。石榴皮主要成分為鞣質(zhì)，含量約為10.4～21.3%;其他成分包括蠟0.8%，樹(shù)脂 4.5% ， 甘露醇 1.8% ，糖 2.7% ， 樹(shù)膠 3.2% ， 菊粉 1.0% ，黏質(zhì)0.6%，沒(méi)食子酸4.0% 等[2]。鞣質(zhì)又稱(chēng)單寧，是一類(lèi)復(fù)雜的高分子多酚類(lèi)化合物能與蛋白質(zhì)結(jié)合，具有澀味和收斂性。因其化學(xué)結(jié)構(gòu)而分為二大類(lèi)，一類(lèi)為可水解鞣質(zhì)，另一類(lèi)為縮合鞣質(zhì)。石榴皮中的鞣質(zhì)以水解性鞣質(zhì)為主，因而具有水解性鞣質(zhì)的藥理作用。隨著科學(xué)技術(shù)的提高，對(duì)其化學(xué)成分的研究有了較大進(jìn)展，其藥理活性也日益受到重視，現(xiàn)就近幾年相關(guān)研究綜述如下。

1 石榴皮鞣質(zhì)的藥理作用

1.1 對(duì)胃腸道系統(tǒng)的作用

李定格等[3]研究了石榴葉水浸劑灌胃給予對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道系統(tǒng)的影響，結(jié)果顯示水浸劑能顯著增強(qiáng)大鼠胃蛋白酶活性，促進(jìn)膽汁分泌，加強(qiáng)大鼠小腸蠕動(dòng)。他們還進(jìn)一步研究觀察石榴葉水浸劑對(duì)大鼠胃酸分泌的影響，大鼠16只(雌雄各半)，結(jié)果顯示可顯著抑制大鼠胃液分泌和總酸排出量，明顯降低大鼠胃潰瘍發(fā)生率，并減少胃潰瘍面積和降低胃潰瘍程度[3－4]。將石榴皮的70%甲醇提取物以250 mg/kg和500 mg/kg灌胃給藥，對(duì)阿司匹林和乙醇引起的大鼠胃損傷抑制率分別為22.37%和74.21%以及21.95%和63.41%;同時(shí)使大鼠體內(nèi)的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH－Px)水平上升到與正常大鼠接近[5]。石榴皮水提取物200，400，800 mg/kg灌胃能不同程度降低結(jié)腸炎模型大鼠黏膜損傷指數(shù)(CMDI)、髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性，減少丙二醛(MDA)含量，提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性[6]。胡偉等[7]采用瓊脂稀釋法檢測(cè)石榴皮水煎劑對(duì)幽門(mén)螺桿菌(HP)甲硝唑耐藥株和敏感株的最低抑菌濃度(MIC)，并計(jì)算MIC50，MIC75，MIC90。結(jié)果顯示，石榴皮對(duì)幽門(mén)螺桿菌的 MIC范圍為7.8～500.0g/L，對(duì)幽門(mén)螺桿菌甲硝唑耐藥株和敏感株的 MIC50分別為 29.9 g/L 和 28.0 g/L，MIC75分別為 65.1 g/L 和 59.1 mg/L，MIC90分別為131.1 g/L和115.9 g/L。說(shuō)明石榴皮對(duì)幽門(mén)螺桿菌有一定體外抑制幽門(mén)螺桿菌作用，并對(duì)甲硝唑耐藥幽門(mén)螺桿菌株及敏感株都有效。

1.2 體外抗菌和抗病毒作用

石榴皮中的主要活性成分鞣質(zhì)，是一種具有沉淀蛋白質(zhì)特性的水溶性多元酚類(lèi)化合物，抗病毒功能就是利用這一特性。不同濃度的石榴皮水提取物與細(xì)胞作用2 h后接種病毒，結(jié)果表明，隨著濃度的加強(qiáng)，抗病毒作用加強(qiáng)。將有抗Ⅱ型單純皰疹病毒(HSV－2)作用的石榴皮水煎劑用明膠微球除盡石榴皮中的鞣質(zhì)成分，石榴皮中抗病毒作用明顯減弱[8]。石榴皮具有明顯的直接殺滅乙型肝炎病毒(HBV)病毒作用。400μg/mL石榴皮水煎劑使乙型肝炎病毒輕度聚集，但結(jié)構(gòu)尚完整;800μg/mL使乙型肝炎病毒中度聚集，有少許結(jié)構(gòu)破壞;1600μg/mL和3200μg/mL導(dǎo)致乙型肝炎病毒明顯聚集，常見(jiàn)顆粒衣殼缺失、核殼破壞現(xiàn)象。乙型肝炎病毒與不同濃度藥物作用后，與抗體結(jié)合的抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)關(guān)系。石榴皮對(duì)乙型肝炎病毒DNA聚合酶有明顯的抑制作用，半數(shù)致死量(IC50)為710μg/mL，藥物濃度增高，對(duì)DNA聚合酶的抑制作用也隨之加強(qiáng)[9]。石榴皮中的鞣質(zhì)因能凝固微生物體內(nèi)的原生質(zhì)及對(duì)多種酶的影響，對(duì)多種細(xì)菌、真菌有抑制作用。如石榴皮的水提物對(duì)金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏桿菌、大腸桿菌、黑曲霉的平均抑菌濃度分別為 10.7，73.4，340.5，17.3μg/mL，對(duì)綠膿桿菌、白色念珠菌的最低抑菌濃度是 100μg/mL[10－12]。

1.3 抗腫瘤和抗癌變

石榴皮水解物鞣花酸，能阻止某些致癌物質(zhì)引發(fā)的癌癥。以色列Technion技術(shù)研究所報(bào)道，石榴皮有明顯的抗乳腺癌作用。從石榴皮中提取的逆沒(méi)食子鞣質(zhì)，純化后對(duì)小鼠的藥理試驗(yàn)表明，體內(nèi)逆沒(méi)食子鞣質(zhì)被水解為鞣花酸，鞣花酸以4g/kg的劑量飼養(yǎng)A/J小鼠可使由亞硝胺酮[NNK，4－(methylnitrosamino)－1－(3－pyridy1)－1－butanone]誘發(fā)的多種腫瘤發(fā)生率被抑制54%[13]。石榴皮的丙酮提取物以2 mg/kg小鼠提前30 min給藥，能調(diào)整促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)和細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子(NF－kappaB)通道，并且能抑制CD－1小鼠皮膚腫瘤的發(fā)生[14]。同時(shí)有研究報(bào)道，50 mg/L的石榴汁中所含的鞣酸單寧能通過(guò)調(diào)整細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)蛋白來(lái)抑制HT－29結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和吞噬作用[15]。

1.4 抗心腦血管疾病

鞣質(zhì)是一類(lèi)作用很強(qiáng)的自由基清除劑和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制劑，其中水解鞣質(zhì)強(qiáng)于縮合鞣質(zhì)，而后者又遠(yuǎn)強(qiáng)于小分子酚類(lèi)(沒(méi)食子酸和兒茶素等)，并且鞣質(zhì)對(duì)多種自由基有廣譜清除作用。鞣質(zhì)在抗心血管疾病方面的作用突出體現(xiàn)在抗高血壓上。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，這種降壓活性與體液中的電解質(zhì)Ca絡(luò)合有關(guān)而不影響心率。石榴葉鞣質(zhì)150 mg/kg和75 mg/kg給予對(duì)高脂大鼠的血清總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)有顯著降低作用，300 mg/kg和75 mg/kg對(duì)高血糖伴高血脂小鼠的甘油三酯降低作用明顯，體外抑制羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMG－CoA)的最低有效濃度為1×10－6g/mL，抑制率15.16%。研究發(fā)現(xiàn)，石榴葉鞣質(zhì)呈劑量依賴(lài)性抑制實(shí)驗(yàn)性高脂血癥動(dòng)物血漿總膽固醇和甘油三酯水平增高，但對(duì)低密度脂蛋白(LDL－C)水平均無(wú)明顯作用，顯示出較好的調(diào)血脂作用。體外試驗(yàn)顯示，石榴葉鞣質(zhì)能明顯抑制HMG－CoA還原酶活性，其 MIC為1×10－6g/mL，抑制率為15.16%;辛伐他汀的 MIC為1×10－4g/mL，抑制率為17.4%。石榴葉鞣質(zhì)的效價(jià)較辛伐他汀強(qiáng)100倍左右，同時(shí)也提示石榴葉鞣質(zhì)降低膽固醇的作用機(jī)制與抑制該酶活性有關(guān)。此外石榴皮提取物對(duì)氧化應(yīng)激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(ECV304)具有保護(hù)作用[16]。在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，石榴皮提取物(高、中、低質(zhì)量濃度分別為200，100，50 mg/L)可使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞存活率顯著性升高;乳酸脫氫酶釋放減少，一氧化氮分泌有所恢復(fù);并可防止細(xì)胞膜微黏度的升高;對(duì)細(xì)胞抗氧化力值與超氧化物歧化酶活性有顯著保護(hù)作用;可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞與單核細(xì)胞黏附率升高和細(xì)胞凋亡發(fā)生，并具有一定的劑量依賴(lài)關(guān)系。因此石榴皮提取物具有防治人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的作用[17]。

1.5 免疫調(diào)節(jié)作用

石榴皮醇提物100，200，400 mg/kg組分別每日灌胃，連續(xù)給藥10 d。在連續(xù)給藥的第5天，除空白對(duì)照組外，每只小鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺(CTX)100 mg/kg 0.2 mL，造成免疫低下模型。在連續(xù)給藥的第6天，除空白對(duì)照組外，每只小鼠腹腔注射2綿羊紅細(xì)胞(2SRBC)0.2 mL進(jìn)行免疫。各組小鼠在末次給藥24 h后處死，進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，免疫低下模型組抗體吸光度值和血清溶血素生成水平(HC50)均有顯著下降(P＜0.01)。石榴皮醇提取物高劑量組對(duì)抗體吸光度值、血清 HC50均明顯高于免疫低下模型組(P ＜0.05，P ＜0.01)[18]。

2 鞣質(zhì)的毒副作用

事物的作用總是一分為二。中藥成分中所含的鞣質(zhì)具有可利用的一面，也存在不利的一面。有人認(rèn)為，兩大類(lèi)鞣質(zhì)中水解鞣質(zhì)毒性較大，對(duì)肝臟有損害作用。五倍子鞣質(zhì)、石榴皮鞣質(zhì)、地榆鞣質(zhì)、訶子肉質(zhì)等屬于水解型鞣質(zhì)，應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)它們可使血清丙氨酸氨基酸轉(zhuǎn)移酶顯著高于正常，表現(xiàn)出嚴(yán)重肝損害的副作用;而四季清、虎杖、黃柏中的鞣質(zhì)多為縮合型，對(duì)肝臟基本無(wú)毒副作用。有研究表明，口服2～4.6 g/kg鞣質(zhì)可引起小鼠肝臟毒性[19]。而石榴皮所含的鞣質(zhì)主要是水解單寧，其毒性主要是直接肝臟毒性，長(zhǎng)期大量應(yīng)用可引起肝小葉中央壞死、脂肪肝、肝硬化[20]，過(guò)量服用可引起血清丙氨酸氨基酸轉(zhuǎn)移酶顯著高于正常，嚴(yán)重?fù)p害肝臟[21]，提示石榴皮鞣質(zhì)存在著潛在的毒性。盡管其有較明顯的肝毒性，但比現(xiàn)代醫(yī)學(xué)常用的化學(xué)藥物對(duì)全身的毒副作用小，仍有良好的應(yīng)用與開(kāi)發(fā)前景。

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