鼻咽癌組織中XIAP和caspase-3的表達及意義

黃永平 何健 郭婷

NPC是一種常見的頭頸部腫瘤。X連鎖凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)是凋亡抑制蛋白家族中最有潛在抑制活性的一種蛋白質，它可以與caspase-3、7、9直接結合，抑制caspase活性，從而抑制細胞凋亡的發(fā)生［1］。本實驗檢測凋亡抑制蛋白 XIAP和caspase-3在NPC的表達及二者的關系，旨在探討其在NPC發(fā)生、發(fā)展中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集宜春市人民醫(yī)院病理科2001年1月至2008年1月收治的NPC活檢標本70例，所有患者病史完整，組織蠟塊厚度能滿足制作組織芯片要求。均為初治病例，未行放化療。病理均為鱗狀細胞癌，其中男47例，女23例，年齡23～80歲。另取25例鼻咽部慢性炎癥組織作為對照。

1.2 免疫組織化學法處理切片脫蠟后，水化至水。SP法實驗步驟，以高壓修復抗原10 min，一抗4℃過夜(一抗稀釋度為1∶400)，通用型二抗37℃孵育1 h，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片。以0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH=7.4)替代一抗作陰性對照，以重復實驗證實為陽性的切片作為陽性對照。

1.3 結果判斷SP法染色陽性為細胞質和胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃至棕黑色顆粒。XIAP和caspase-3的判斷標準為:陰性(-):無陽性細胞;陽性(+):陽性細胞少于50%;強陽性(++):陽性細胞多于50%。采用顯微攝像計算機圖像系統(tǒng)分析。

1.4 統(tǒng)計學方法 全部實驗數(shù)據(jù)用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，兩變量的相關程度采用兩變量關聯(lián)性分析檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 XIAP和caspase-3在NPC和鼻咽部慢性炎癥組織中的表達 70例NPC標本中XIAP表達陽性48例，陽性率為68%;caspase-3表達陽性22例，陽性率為36%。在鼻咽部慢性炎癥組織標本中XIAP呈陰性表達;caspase-3表達陽性16例，陽性率為65%。NPC中XIAP的陽性表達明顯高于炎癥組織，有差異χ2=25.12，P＜0.05。NPC中caspase-3的陽性表達均明顯低于炎癥組織，有差異χ2=7.55，P＜0.05。

2.2 NPC中XIAP和caspase-3表達的關系 48例XIAP陽性的NPC標本中，caspase-3陽性7例，陽性率為14.7%;22例XIAP陰性的標本中，caspase-3陽性15例，陽性率為68.7%。XIAP陽性NPC標本中的caspase-3陽性表達率低于XIAP陰性的caspase-3陽性表達率，NPC組織中XIAP與caspase-3表達呈負相關(χ2=12.73，r=-0.46，P＜0.05)。

3 討論

細胞凋亡調(diào)控的紊亂與細胞的惡變具有十分密切的關系。凋亡抑制蛋白(IAP)是細胞內(nèi)一類阻止細胞凋亡的蛋白，通過結合并抑制caspase-3、7、9等來抑制細胞凋亡。XIAP能夠對抗各種凋亡誘導因素，抵抗細胞凋亡，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族的成員中，它被認為是作用最強的一種［2］。它與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展高度相關［3，4］，它在胰腺癌、乳腺癌、大腸癌等細胞系中呈高表達，在正常的人乳腺上皮和皮膚纖維原細胞系中呈低表達［5］。

本研究結果顯示，sp法測得68.0%(48/70)的NPC組織不同程度地出現(xiàn)XIAP陽性表達，而炎癥組織XIAP蛋白表達全為陰性。NPC與炎癥組織中XIAP表達陽性率之間有差異(P＜0.05)，XIAP表達升高與NPC的發(fā)展呈正相關。這說明XIAP在NPC細胞中的表達是升高的，且XIAP可影響腫瘤細胞的凋亡。

Caspase-3在細胞凋亡中處于核心位置，其高表達可引起細胞的凋亡，被稱有為死亡蛋白。本研究示，SP法測得36.0%(22/70)的NPC組織中出現(xiàn)caspase-3陽性。NPC和炎癥組織之間caspase-3表達陽性率之間有差異(P＜0.05)，caspase-3表達下降與NPC的發(fā)展呈正相關。這說明caspase-3在NPC細胞的表達是下降的，caspase-3可影響腫瘤細胞的凋亡。

本研究中48例XIAP陽性的NPC標本中，caspase-3陽性7例，陽性率為14.7%;22例XIAP陰性的標本中，caspase-3陽性15例，陽性率為68.7%。XIAP陽性的 NPC標本caspase-3陽性表達率低于XIAP陰性標本的caspase-3陽性表達率，XIAP與caspase-3表達呈負相關。

我們認為XIAP的高表達和caspase-3的低表達可能與NPC的發(fā)生、發(fā)展有關，XIAP可能是促進正常鼻咽部上皮組織惡變的重要因子，而caspase-3在調(diào)亡的過程中起著關鍵的作用。XIAP在NPC細胞中表達的顯著升高和caspase-3的低表達對NPC的診療具有一定參考價值。

［1］Eckelman B P，Salvesen G S，Scott F L.Human inhibitor of apoptosis proteins:why XIAP is the black sheep of the family.EMBO Rep，2006，7(10):988-994.

［2］Eckelman BP，Salvesen GS.Scott FLHuman inhibitor of apoptoais proteins:why XIAP is the black sheep of the fruityEMBO Rep，2006，7(10):988-994.

［3］Ding X，Mohd AB，Huang Z，et al.MLH1 expression sensitises ovarian cancer cells to cell death mediated by XIAP inhibition.Br J Cancer，2009，21，101(2):269-277.

［4］Ramp U，Krieg T，Caliskan E，et al.XIAP expression is an independent prognostic marker in clear cell renal carcinomas.Human Path，2004，35(8):1022-1028.

［5］Tamm I，Komblau SM，Segall H，et al.Expression and prognostic significance of IAP family genes in human cancers and myeloid leukemias.Clin Cancer Res，2000，6(5):1796-1803.