急性冠脈綜合征患者趨化因子CXCL16與GRACE積分的相關性及臨床意義

李定良 巫相宏

研究表明，動脈粥樣硬化是一種慢性的炎癥性疾病，炎癥反應在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展過程中起重要的作用[1]。趨化因子（CXC chemokine ligand 16，CXCL16）是近年在人動脈粥樣硬化損傷部位的巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子，同時也是一種膜結合蛋白，研究發(fā)現(xiàn)其在動脈粥樣硬化病變過程中有著重要作用[2-4]。全球急性冠脈綜合征注冊（the Global Registry of Acute Coronary Events，GRACE）研究是目前世界上第一個對急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）進行的全球多中心的前瞻性臨床研究，GRACE危險評分可用以指導ACS患者的危險分層，幫助選擇正確的治療策略[5]。本研究旨在觀察不同類型冠心病患者外周血中CXCL16水平，分析CXCL16水平與GRACE危險評分和C反應蛋白（C-reactive protein，CRP）水平的相關性，探討血清CXCL16在急性冠脈綜合征危險分層中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1～7月我院心內(nèi)科住院并經(jīng)冠狀動脈造影確診的冠心病患者61例納入實驗組，男42例，女19例；年齡38～94歲，平均（62.3±11.3）歲。按照2007年美國心臟病學會/美國心臟學會（ACC/AHA）冠心病處理指南的診斷標準，分為急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）組30例，其中不穩(wěn)定型心絞痛（Unstable angina，UA）17例，急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）13例；穩(wěn)定型心絞痛（stable angina pectoris，SA）組30例；對照組為同期住院經(jīng)冠狀動脈造影后排除冠心病者24例，男13例，女11例，年齡38～81歲，平均（57.9±13.0）歲。冠心病患者與非冠心病患者性別、年齡、糖尿病及高血壓病史、冠心病家族史及相關用藥史等方面均無統(tǒng)計學差異，具有可比性。排除標準：風濕性疾病，自身免疫性疾病，周圍血管疾病或周圍血管，血栓性疾病，腦卒中，肝、腎功能不全，發(fā)熱，感染性疾病，腫瘤，或近期（至少1個月）有手術、外傷史的患者。

1.2 方法

1.2.1 血標本采集和檢測 所有研究對象于入院次晨空腹肘正中靜脈取血，分離血清標本-80℃保存?zhèn)溆?。采用免疫比濁法測定測定血清CRP水平。CXCL16的測定采用酶聯(lián)免疫定量分析的方法。試劑盒購自桂海生物公司，應用雙抗體夾心法測定標本中CXCL16水平。用純化的CXCL16抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CXCL16，再與HRP標記的CXCL16抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CXCL16呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人CXCL16濃度。

1.2.2 GRACE危險評分[5]GRACE評分的內(nèi)容包括年齡、心率、收縮壓、肌酐、Killip分級、是否有已知心臟事件、心肌酶標志物、ST段變化，理論分值范圍為2～383分，見表1。

1.3 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)均應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件處理，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多樣本比較采用方差分析，組間兩兩比較采用q檢驗，計數(shù)資料用x2檢驗，多組比較采用Kruskal Wallis法；血清CXCL16與CRP、GRACE危險評分之間的關系采用Pearson直線相關分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

表1 GRACE危險評分系統(tǒng)

2 結果

2.1 外周靜脈血CXCL16和CRP水平的比較 我們發(fā)現(xiàn)，隨著冠狀動脈病變程度的增加，CXCL16、CRP水平逐漸升高。CXCL16及CRP水平在ACS組中均明顯高于SA組和正常對照組（均P＜0.01）；CXCL16水平在SA組中高于正常對照組，差別顯著（P＜0.01）；CRP水平在SA組中與對照組比較，表達水平高于正常對照組，但差別沒有統(tǒng)計學意義；見表2。

表2 各組外周靜脈血中CXCL16，CRP水平比較

2.2 外周靜脈血CXCL16與GRACE危險評分及CRP水平的相關性分析見圖1，2。

Pearson直線相關分析ACS患者外周靜脈血中的CXCL16水平[（9.96±6.53）ng/mL]與GRACE危險評分（134.50±55.57）呈正相關（r=0.770，P＜0.01），而且與CRP水平[（17.71±15.48）mg/L]亦呈正相關r=0.852，P＜0.01）。

3 討論

CXCL16是一種跨膜趨化因子，既能以分泌形式又能以膜結合形式存在，參與炎癥和免疫應答過程，另外還具有清道夫受體的功能，與氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）結合，參與相關的生物學效應[2-6]。近年研究發(fā)現(xiàn)，CXCL16參與動脈粥樣硬化（AS）的形成，其機制主要有：①趨化激活T細胞。CXCL16可強烈趨化激活CD8+T細胞，達整個T細胞的40％[2]，趨化激活后的T淋巴細胞分泌γ干擾素（INF-γ）、腫瘤壞死因子-β（TNF-β）、GM-CSF等炎癥因子，以旁分泌的方式影響其周圍細胞的功能活動，在AS發(fā)生、發(fā)展中起調(diào)節(jié)作用。②促進細胞一細胞間黏附和細胞增殖。平滑肌細胞的增殖是AS形成中的重要環(huán)節(jié)，它與一些生長因子的作用有關。CXCL16及其受體在動脈平滑肌細胞均有表達，研究發(fā)現(xiàn)CXCL16可以增加細胞間黏附并誘導核因子-κB（NF-κB）依賴的主動脈平滑肌細胞增殖[3]。③血管源性因子。動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)的新生血管可能在促進斑塊的發(fā)生、發(fā)展，甚至誘發(fā)斑塊出血和斑塊破裂這一系列事件中起著關鍵性作用[4-7]。研究表明，CXCL16不僅可誘導激人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）的增殖與趨化，同時還作為血管源性因子存在，其可以顯著誘導血管生成[8]。④氧化型低密度脂蛋白受體。氧化低密度脂蛋白及其脂質成分激活內(nèi)皮細胞是引起AS病理變化的關鍵環(huán)節(jié)。CXCL16是新發(fā)現(xiàn)的OX-LDL的細胞表面受體，對OX-LDL有較強的結合和內(nèi)吞攝取的能力，參與了動脈粥樣硬化細胞內(nèi)脂酯聚集的過程[7]，可能在AS病變中起重要作用。

急性冠狀動脈綜合征（ACS）是以冠狀動脈粥樣硬化斑塊破裂，繼發(fā)完全或不完全閉塞性血栓形成為病理基礎的一組臨床綜合征，ACS中存在嚴重的內(nèi)皮細胞受損激活狀態(tài)，黏附并聚集大量白細胞到血管內(nèi)皮，使炎癥因子水平進一步增加，形成惡性循環(huán)，最終導致急性炎癥爆發(fā)和血栓形成。本研究發(fā)現(xiàn)CXCL16活性水平在ACS組顯著高于SA組和對照組，在SA組中亦顯著高于對照組，提示CXCL16與動脈粥樣硬化有關，并隨著冠心病病情的加重而進一步升高，而冠心病病情的加重與冠狀動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性增加有密切關系，炎癥反應加劇了斑塊的不穩(wěn)定性，CXCL16則參與了炎癥反應，加重了冠心病的病情。

圖1 ACS患者外周靜脈血CXCL16與GRACE危險評分之間的相關關系圖

圖2 ACS患者外周靜脈血CXCL16與CRP水平之間的相關關系圖

研究發(fā)現(xiàn)，CRP在冠狀動脈中的分布與冠狀動脈內(nèi)膜炎癥或壞死過程相一致，除了作為炎癥產(chǎn)物，還可以直接促進炎癥反應及局部血栓的形成，改變冠狀動脈粥樣斑塊的結構，促使斑塊破裂[9]，與急性冠脈綜合征的發(fā)生及發(fā)展密切相關[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，CRP水平在ACS組中顯著高于SA組和正常對照組，但在SA組與對照組比較，差別沒有統(tǒng)計學意義，說明CRP水平可反映ACS中冠狀動脈粥樣斑塊的不穩(wěn)定狀態(tài)。穩(wěn)定性心絞痛患者中，冠狀動脈粥樣硬化斑塊可能相對穩(wěn)定，斑塊破裂，炎癥反應亦相對較輕，從而部分患者血液中CRP水平有所升高，但總體比較起來，與正常人差別不明顯。CXCL16水平與CRP水平呈正相關，進一步證實了CXCL16與炎癥反應密切相關，通過炎癥反應加劇了斑塊的不穩(wěn)定。

全球ACS注冊研究是目前世界上第一項針對ACS患者進行的多國家、前瞻性觀察研究，2007年更新的ACC/AHA指南指出：GRACE風險評分是對急性冠脈綜合征患者進行風險評估的方法之一。在ACS組中，CXCL16水平與GRACE危險評分呈正相關，因此檢測ACS患者的CXCL16對ACS患者的危險分層及治療策略的選擇具有一定的臨床指導意義。

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