白及三七混劑對門脈高壓性胃病大鼠模型血小板功能的影響*

雷 霆 陳志國 周 軍 肖 剛

陜西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院（陜西咸陽712000）

門脈高壓性胃病 （PHG）系指門脈高壓病所伴發(fā)的一種特殊類型的胃黏膜病變，是引起上消化道出血的重要因素之一。在重度肝功能不全患者及重度PHG患者中，PHG為第1位出血因素［1］。本研究通過建立PHG大鼠模型，應用白及三七混劑治療 PHG，觀察血漿中血小板 4因子（PF4）和可溶性 P-選擇素（SPS）的變化，探討其治療PHG出血的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物 白及三七混劑 （白及粉200mg/kg、三七粉200mg/kg加入沸水，晾涼后制成糊劑）；云南白藥 （國藥準字Z53020798，產品批號：20090607）；10%水合氯醛；青霉素鈉（哈藥集團總廠生產，生產批號：C080101417）。

1.2實驗動物 健康SD大鼠40只，雌雄各半，育齡6~8周，體質量（200±20）g，購自西安交通大學動物實驗中心，合格證編號：SCXK（陜）2007-001。

1.3 試劑與儀器 酶聯(lián)免疫試劑由西安阿爾寶生物技術有限公司提供試劑盒（48孔配置）。高速臺式離心機（北京安亭醫(yī)用離心機廠）；超凈工作臺（蘇州凈化設備公司，SW-CJ-ID型）；低溫冰箱（三洋公司MDF-U332型）；酶聯(lián)免疫檢測儀（國營華東電子管廠DG5031型）；電子天平（上海第二分析儀器廠FA 2004N型）；顯微鏡（德國Leica公司DM40008型）。

1.4 分組及造模［2-5］40只健康SD大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，根據(jù)隨機數(shù)字表分為假手術組、模型組、白及三七混劑組及云南白藥組。除假手術組外，其余3組采用1期門靜脈縮窄加左腎上腺靜脈結扎法復制大鼠PHG模型。10%水合氯醛（0.3mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，正中切口入腹，游離出門靜脈，用9號針頭作內支撐，縮窄門靜脈橫經約90%，再將左腎上腺靜脈結扎。假手術組只游離門靜脈和左腎上腺靜脈，不縮窄或結扎。2周后隨機自手術組選取2只及假手術組1只處死，取肝組織行苦味酸-天狼紅染色，按實驗動物肝纖維化組織學Ⅵ級標準進行肝纖維化程度評判對照，鏡下觀察肝纖維形成，示模型制備成功［6］。

1.5 給藥方法及標本采集 白及三七混劑組按1mL/100g每日給予白及三七等混劑灌胃（400mg/kg）；云南白藥組按1mL/100g每日予云南白藥灌胃（400mg/kg）；假手術組及模型組大鼠正常喂養(yǎng)。給藥7d后處死大鼠，采取血樣標本，待測。

1.6 檢測指標 選擇檸檬酸鈉作為抗凝劑，與血樣標本混合10～20min，2000～3000r/min離心20min左右， 仔細收集上清液，即為血漿成分，將所有處理好的血樣進行酶聯(lián)免疫法測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣本中大鼠PF4和SPS質量濃度。

2 結 果

2.1 病理學檢查結果 PHG模型病理切片 （×40）觀察結果顯示：胃黏膜下小血管管壁增厚，管腔擴張，單位視野下數(shù)目增多（如圖1A），肝組織匯管區(qū)小血管擴張，假小葉形成，少數(shù)肝細胞呈現(xiàn)雙核增生改變（如圖1B）。

圖1 PHG模型大鼠病理組織切片圖

2.2 各組血漿中SPS和PF4水平比較 見表1。白及三七混劑組與云南白藥組大鼠血漿中PF4和SPS的含量與模型組比較明顯升高（P﹤0.01）；但白及三七混劑組和云南白藥組比較，PF4和SPS的含量無明顯差異（P＜0.05）。

表1 各組血漿中SPS、PF4水平比較 （ng/mL

表1 各組血漿中SPS、PF4水平比較 （ng/mL

與模型組比較，*P＜0.01；與假手術組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

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3 討 論

建立穩(wěn)定的肝硬變門脈高壓癥模型是肝硬變門脈高壓癥基礎性研究的前提［7］。本實驗采用門靜脈縮窄加左腎上腺靜脈結扎法，成功誘導出較理想的大鼠肝硬變門靜脈高壓癥胃病模型。該方法特點在于實驗性肝硬變在形成過程中歷經肝細胞變性壞死、纖維組織增生及假小葉形成等幾個階段，這與人類肝硬變自然演變過程基本一致。經過預實驗中證實，采用PHG腎上腺靜脈結扎法，造模15d后，大鼠門靜脈壓穩(wěn)定在較高水平（測定腸系膜前靜脈分支靜脈壓平均大于10mmHg），胃底黏膜及黏膜下動靜短路早期出現(xiàn)并異常開放，并且其胃黏膜具有特征性病理變化，類似于臨床上PHG患者的胃腸黏膜變化［8］。該方法造模成功率高，復制簡單易行，符合本課題的實驗設計基本要求。

肝硬化門脈高壓對血小板功能的影響是一個復雜問題，涉及到血小板結構、形態(tài)、生理生化性質等多方面的改變。血小板在止血過程中起作用，除依賴于血小板的數(shù)量外，血小板的功能狀態(tài)也極其關鍵。研究結果表明，肝硬化患者血小板黏附、活化和聚集能力顯著低于正常，提示血小板功能異常在肝硬化患者的出血傾向中起著非常重要作用［9］。國內曾有報道，肝硬化門脈高壓時血小板功能不同程度降低，其中通過實驗檢測發(fā)現(xiàn)，血塊收縮異常者占77.8%，血小板黏附率降低者占66.7%，PF4減少者占78%，血小板聚集率降低者占77.8%，血小板第3因子有效性減少者占 65.7%［10］。

本實驗研究發(fā)現(xiàn)，模型組較假手術組PF4及SPS指標均明顯下降，說明肝硬化PHG時血小板凝血功能各項參數(shù)將不同程度上發(fā)生改變，血小板活化能力出現(xiàn)不同程度下降表現(xiàn)，這一結果極可能是PHG并發(fā)上消化道出血的主要原因之一。如果臨床治療上選用一些能夠有效改善血小板活化能力的藥物，那么PHG并發(fā)上消化道出血機率將會顯著降低。

白及三七混劑中諸藥雖然都有止血，活血散瘀的功效，但是由于各成分的相互作用，其綜合作用絕不是單味藥的簡單疊加，還可能會出現(xiàn)新的作用。通過筆者近年臨床應用證實：白及三七混劑在PHG急慢性出血治療上是一種安全、價廉、有效、無毒副作用重要藥物，該藥物圍手術期治療中結合中醫(yī)辨證加減后，可以使患者得到有效的合理的個體化治療。

筆者選取云南白藥作為對照組，白及三七混劑作為治療組，仔細觀察其對血小板凝血功能指標變化的影響，結果發(fā)現(xiàn)：云南白藥及白及三七混劑均能夠升高PF4及SPS指標，改善血小板活化能力，提高機體的凝血功能，有效地促進止血過程進行，但兩者彼此之間治療效果接近。藥理研究表明：云南白藥能促進血小板聚集，增強血小板活化百分率及血小板表面糖蛋白表達，能縮短血液凝血時間，使傷口出血時間及凝血酶原時間縮短，對動脈血管有明顯收縮作用。因此，臨床上應用白及三七混劑治療PHG出血的作用機理可能應該與血小板活化功能提高有關。其具體機制可能是：血小板表面多種受體經混劑所產生的膠原物質誘導刺激，迅速發(fā)生蛋白磷酸化反應，激活了血小板，引起釋放反應發(fā)生，形成或釋放出組織因子，進一步激活凝血系統(tǒng)中的多種凝血因子，從而實現(xiàn)體內促凝過程，其表現(xiàn)出迅速有力的止血作用。PHG時血小板活化能力會降低，這可能是PHG合并上消化道出血原因之一。白及三七混劑在PHG出血治療中是一種可行的方法，具有一定的臨床實用價值，其作用機制還需進一步研究探討。

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［2］周丁華，肖凌云，應大君，等.大鼠肝硬變門脈高壓癥模型建立方法改進［J］.中國普外基礎與臨床雜志，2000，1（7）：118-119.

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［6］ 張瑞，劉潯陽.洛沙坦在大鼠門脈高壓性胃病中的作用［J］.中南大學學報，2007，32（3）：494-497.

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［10］霍麗娟，田玲琳.氯沙坦對肝硬化門脈高壓癥大鼠肝靜脈壓力梯度的影響［J］.中西醫(yī)結合肝病雜志，2009，19（3）∶165-167.