消痹靈膠囊對骨性關節(jié)炎家兔血清及關節(jié)液中IL-1、TNF-α和NO的影響*

田思強

山東省棗莊市中醫(yī)醫(yī)院（山東棗莊277101）

骨性關節(jié)炎是一種以關節(jié)軟骨的變性、破壞及骨質增生為特征的慢性關節(jié)病。骨性關節(jié)炎屬中醫(yī)學“骨痹”、“膝痹”范疇。名老中醫(yī)王法昌認為骨性關節(jié)炎的主要病理機制為 “筋傷骨損”，消痹靈組方為王法昌治療該病的經(jīng)驗方，對“筋傷骨損”癥有明顯的改善作用。該組方可減輕疼痛或控制炎癥，緩解癥狀，保持受累關節(jié)的功能，防止關節(jié)畸形，提高患者的生活質量。本研究通過觀察消痹靈合劑對骨性關節(jié)炎模型動物的作用并評定療效。

1 材料與方法

1.1 動物 清潔級健康雄性新西蘭長耳大白兔32只，4月齡，體質量（3.20±0.15）kg，均購于山東大學實驗動物中心，動物合格證號：魯動質字 20070102，20070103，20080423，20080714。 適應性飼養(yǎng)觀察1d，飼養(yǎng)于山東省中醫(yī)藥大學動物實驗中心，SPF級標準。飼料符合GB14924-94《實驗動物全價營養(yǎng)飼料》標準。

1.2 藥物 消痹靈膠囊，齊魯醫(yī)院中藥制劑室提供（主要成分為金銀花、清風藤、白芍、生地黃、白花蛇舌草、當歸、鹿銜草、玄參、蜈蚣、地龍、生甘草等）。壯骨關節(jié)丸（主要成分為狗脊、淫羊藿、獨活、骨碎補、木香、雞血藤、川斷、熟地黃。批號：國藥準字Z49033377），深圳南方制藥廠生產(chǎn)。

1.3 試藥與儀器 ELISA家兔IL-1、TNF-α試劑盒 （解放軍總醫(yī)院放免研究所提供）。一氧化氮試劑盒（南京生物建成公司生產(chǎn)）。泰盟牌BL-410生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟電子股份有限公司生產(chǎn)）。

1.4 造模與給藥 將32只家兔隨機分為即消痹靈膠囊組、壯骨關節(jié)丸組、模型對照組、空白對照組。將家兔右腿膝關節(jié)伸直，用石膏外周管形固定1圈，使其右側膝關節(jié)不能活動，制造家兔膝關節(jié)骨性關節(jié)炎模型。固定2周后開始給藥，9周后停藥、停止石膏固定。消痹靈膠囊組給予消痹靈膠囊灌胃，4mL/kg（臨床等效劑量5g/kg），每日1次；壯骨關節(jié)丸組給予壯骨關節(jié)丸灌胃，4mL/kg（臨床等效劑量5g/kg），每日1次；模型對照組與空白對照組給予等量蒸餾水灌胃。

1.5 觀察指標 分別在造模第3、6、9周抽取家兔靜脈血測定血清中IL-1、TNF-α及NO含量。造模9周后，空氣栓塞處死實驗兔，取關節(jié)液不少于200μL，采用放射免疫分析法，測定家兔關節(jié)液中IL-1、TNF-α及NO含量變化。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計學軟件。進行單因素方差分析和q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組血清中IL-1含量比較 見表1。實驗第3、6、9周，各給藥組IL-1含量均顯著低于模型對照組 （P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關節(jié)丸組（P＜0.05 或 0.01）。

表1 各組血清中IL-1含量比較 （pg/mL，±s）

表1 各組血清中IL-1含量比較 （pg/mL，±s）

與壯骨關節(jié)丸組相比，△P＜0.05，△△P＜0.01；與消痹靈膠囊組相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。 下同。

組 別12.47±0.19 15.12±0.43▲15.68±0.53△△▲11.34±0.28△△▲▲消痹靈膠囊組 11.59±0.23壯骨關節(jié)丸組 14.37±0.49▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 11.17±0.18△▲▲11.98±0.27 13.87±0.68▲14.65±0.52△▲▲10.78±0.09△▲14.59±0.65▲

2.2 各組血清中TNF-α含量比較 見表2。實驗第3、6、9周，各給藥組 TNF-α含量均顯著低于模型對照組 （P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關節(jié)丸組（P＜0.05或0.01）。

表2 各組血清中TNF-α 含量比較 （ng/L，±s）

表2 各組血清中TNF-α 含量比較 （ng/L，±s）

組 別消痹靈膠囊組 3.04±0.38壯骨關節(jié)丸組 5.74±0.49▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 2.87±0.19△2.44±0.27 4.75±1.05▲4.97±1.04▲2.25±0.38△2.90±0.24 5.20±0.47▲▲5.59±0.58▲2.38±0.34△△▲▲6.84±0.69△△▲▲

2.3 各組血清中NO含量比較 見表3。實驗第3、6、9周，各給藥組NO含量均顯著低于模型對照組（P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關節(jié)丸組（P＜0.05或 0.01）。

表3 各組血清中NO含量比較 （mmol/L，±s）

表3 各組血清中NO含量比較 （mmol/L，±s）

組 別消痹靈膠囊組 63.74±9.78壯骨關節(jié)丸組 91.67±11.39▲▲n 8 8 3周6周9周模型對照組8空白對照組 8 62.67±10.19△△62.45±9.27 80.24±10.05▲▲89.58±11.25▲▲57.29±8.54△△62.91±9.28 89.28±10.57▲▲95.69±11.52▲▲60.38±9.34△△99.85±12.69▲▲

2.4 各組實驗第9周家兔關節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 見表4。實驗第9周，各給藥組關節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量均顯著低于模型對照組（P＜0.05或0.01），高于空白對照組（P＜0.05或0.01）；且消痹靈膠囊組改善優(yōu)于壯骨關節(jié)丸組（P＜0.05或 0.01）。

3 討 論

IL是一類由白細胞分泌的調節(jié)細胞生長與分化的因子，與軟骨損傷有關，其在骨性關節(jié)炎發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。研究表明，IL-1可促進軟骨基質金屬蛋白酶的合成和分泌，并提高軟骨基質中溶解蛋白分子酶類活性，而溶解蛋白分子酶有明顯溶解軟骨基質、影響關節(jié)軟骨細胞基質合成的作用［1］。國外研究發(fā)現(xiàn)，TNF-α可促進膠原酶的產(chǎn)生、前列腺素的釋放及硬蛋白酶的活性，還可誘導軟骨細胞產(chǎn)生過氧化反應，與IL-1共同促進軟骨的吸收，從而介導骨關節(jié)炎的軟骨破壞［2］。NO是骨性關節(jié)炎發(fā)生的重要介導因素，在骨內高壓下，關節(jié)內滑液氧分壓降低，pH降低，軟骨缺血，均可誘導軟骨細胞對NO合成酶的合成［3］。此外，NO的產(chǎn)生受到細胞因子如IL-1、TNF-α、INF-γ等的影響，炎性因子可激活軟骨細胞內NO合成酶產(chǎn)生大量的NO，從而對軟骨細胞、成骨細胞、破骨細胞、滑膜組織及各種細胞間基質合成產(chǎn)生破壞作用，使其合成和分泌蛋白多糖及膠原蛋白的功能受到抑制，促進細胞凋亡，最終對關節(jié)產(chǎn)生損害而影響其功能［4］?；ぜ毎荒墚a(chǎn)生足量的IL-1受體阻滯劑（IL-1Ra）來抑制增加的IL-1，而IL-1可促使軟骨細胞產(chǎn)生NO，NO又可抑制軟骨細胞生成IL-1Ra，最終導致IL-1與IL-1Ra平衡破壞，促進骨基質降解。在骨性關節(jié)炎中，軟骨基質的分解代謝加強，以致基質丟失。

表4 各組實驗第9周關節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 （±s）

表4 各組實驗第9周關節(jié)液中IL-1、TNF-α、NO含量比較 （±s）

NO（mmol/L）消痹靈膠囊組 18.34±4.18壯骨關節(jié)丸組 41.64±7.93▲▲組 別n 8 8模型對照組8空白對照組 8 16.71±3.34△IL-1（pg/mL）11.44±0.35 14.67±0.64▲▲15.56±0.58△▲▲10.15±0.28△▲▲TNF-α（ng/mL）11.19±0.21 15.18±0.51▲▲17.59±0.56△△▲10.38±0.26△△▲▲48.47±8.63▲▲

實驗顯示消痹靈膠囊組和壯骨關節(jié)丸組在3、6、9周時血清及關節(jié)液中IL-1、TNF-α和NO表達均存在顯著差異，說明消痹靈膠囊的藥物療效更好。消痹靈膠囊能顯著減輕IL-1、TNF-α和NO的表達，從而能減輕其對軟骨基質的分解作用，促進軟骨基質的合成，改善軟骨基質的平衡狀況。骨內血液循環(huán)障礙引起的骨內高壓是形成骨性關節(jié)炎的重要因素，也是導致該病一系列臨床癥狀如膝痛、休息痛的直接原因。消痹靈膠囊中含有清熱除痹、活血化瘀、祛風通絡中藥成分，一方面可以改善軟骨下骨髓腔內的血流狀態(tài)，另一方面可及時清除由于血脈瘀滯產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，從而改善骨內血流動力學，達到保護關節(jié)軟骨目的?；钛鲋房纱碳ぼ浌瞧茐膮^(qū)出現(xiàn)大量幼稚軟骨細胞，明顯減少關節(jié)腔積液，降低關節(jié)腔內壓力；通過滑膜滲透直接作用于軟骨細胞，增強軟骨細胞的代償能力，調整軟骨細胞的代謝而促進軟骨基質的代謝向正常方向改變，對軟骨降解起到一定延緩作用。

［1］ GebauerM，Saas J，Haag J，etal.Repression ofanti-proliferative factor Tob1 inosteoarthritic cartilage［J］.ArthritisRes Ther，2005，7（2）：274-284.

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