MassWorksTM與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析洋甘菊精油成分

李 斌,周 圍,2

(1.西北師范大學(xué),地理與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅出入境檢驗(yàn)檢疫局中心實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州 730020)

MassWorksTM與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析洋甘菊精油成分

李 斌1,周 圍1,2

(1.西北師范大學(xué),地理與環(huán)境科學(xué)學(xué)院,甘肅蘭州 730070;2.甘肅出入境檢驗(yàn)檢疫局中心實(shí)驗(yàn)室,甘肅蘭州 730020)

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)技術(shù),結(jié)合MassWorksTM質(zhì)譜解析軟件,對(duì)產(chǎn)自甘肅省永登縣的洋甘菊(Chamomila recutitaL.)精油成分進(jìn)行分析。對(duì)兩種不同極性的色譜柱進(jìn)行分離比較實(shí)驗(yàn),確定了適合于洋甘菊精油分離分析的色譜條件和質(zhì)譜條件,解析并確定出精油中的35種化合物。MassWorks軟件在低分辨率質(zhì)譜上可對(duì)化合物分子質(zhì)量實(shí)現(xiàn)精確測量,為低分辨四極桿質(zhì)譜確定化合物的元素組成和解析化合物結(jié)構(gòu)提供重要依據(jù),同時(shí)也為植物精油的成分分析提供新的技術(shù)手段。

洋甘菊;氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用;MassWorksTM質(zhì)譜解析;成分分析

洋甘菊(Matricaria recutita.L)又名母菊,系菊科母菊屬的花序或全草,一年生或兩年生草本植物,其花具有消炎、抑制真菌、解痙等作用[1],是一種重要的藥用植物和香料植物。關(guān)于洋甘菊精油的化學(xué)成分分析國內(nèi)外已有報(bào)道:鄭漢臣等[2]利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC/MS)方法對(duì)洋甘菊精油成分進(jìn)行了分析,鑒定出24種成分;劉國聲等[3]利用 GC/MS方法對(duì)黑龍江省尚志縣的洋甘菊精油成分進(jìn)行分析,鑒定出26種成分;姚雷等[4]利用 GC/MS方法對(duì)德國洋甘菊和羅馬洋甘菊精油成分的差異進(jìn)行分析;Sashidhara等[5]利用 GC、GC/MC方法對(duì)喜馬拉雅低山區(qū)的洋甘菊精油進(jìn)行分析,鑒定出41種成分。

鑒別天然產(chǎn)物中的化合物主要是色譜分離后的質(zhì)譜分析與檢索,但低分辨率的四極桿質(zhì)譜無法精確測定化合物的質(zhì)量。僅靠NIST質(zhì)譜庫的計(jì)算機(jī)檢索對(duì)化合物的元素組成進(jìn)行推斷還存在很大的不確定性。根據(jù)美國化學(xué)會(huì)志對(duì)文章作者的征稿通知“......分子質(zhì)量低于1 000的物質(zhì),其測量的質(zhì)量與計(jì)算質(zhì)量的誤差應(yīng)在5 ppm內(nèi)”[6]的原則,對(duì)未知化合物的質(zhì)譜解析,其質(zhì)譜分子質(zhì)量的測定應(yīng)該達(dá)到小數(shù)點(diǎn)后4位。低分辨的四極桿質(zhì)譜顯然是無法達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的。MassWorks質(zhì)譜解析軟件則可以使低分辨率的四極桿質(zhì)譜儀器提高100倍的質(zhì)量精度,精度可達(dá)5 ppm,利用其同位素峰形校正檢索技術(shù)(CLIPs),可以實(shí)現(xiàn)對(duì)未知物分子式的識(shí)別[7],從而為推測未知物的元素組成提供方便,也為探究植物精油成分提供新的分析手段。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 樣品來源

甘肅省永登縣2010年種植的洋甘菊花采摘后,經(jīng)工廠生產(chǎn)水蒸氣蒸餾法蒸餾,油水分離得到精油,所得精油不經(jīng)任何處理,直接進(jìn)樣。

1.2 主要儀器

QP-2010 Plus氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀:日本島津公司產(chǎn)品,配有帶保留指數(shù)功能的質(zhì)譜解析軟件;7890A/5975C氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀:美國Agilent公司產(chǎn)品,配有NIST 08質(zhì)譜解析軟件;MassWorks質(zhì)譜解析軟件:美國Cerno Bioscience公司產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件

1.3.1 QP-2010 Plus 色譜條件為Rxi-5ms色譜柱(30 m×0.25 mm×0.25μm);程序升溫:50℃保持5 min,以3℃/min升至280℃,保持22 min;進(jìn)樣口溫度 250 ℃;進(jìn)樣量 0.2μL;不分流進(jìn)樣;載氣(He)流速1 mL/min。

質(zhì)譜條件為MS接口溫度250℃,離子源溫度200℃,溶劑延遲 3.75 min,質(zhì)量掃描范圍m/z50～600,電子轟擊離子源(EI),電子能量70 eV,倍增電壓1.5 kV,以C7～C33正構(gòu)烷烴系列為參照物,獲取保留指數(shù)。

1.3.2 7890A/5975C 色譜條件為CP-WAX 57CB色譜柱(25 m×0.25 mm×0.20μm);程序升溫:50℃保持5 min,以2℃/min升至220℃保持 20 min;進(jìn)樣口溫度 250 ℃;進(jìn)樣量1μL;分流比為 50∶1;載氣(He)流速 0.8 mL/min。

質(zhì)譜條件為MS接口溫度200℃;離子源溫度230℃;四極桿溫度150℃;溶劑延遲3.75 min;采樣模式:原始掃描;EMV模式:增益系數(shù);增益系數(shù):8.00;EM電壓1 671 V;質(zhì)量掃描范圍m/z50～600。以全氟三丁胺標(biāo)準(zhǔn)品為外標(biāo)對(duì)質(zhì)譜進(jìn)行校正。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 洋甘菊精油成分定性結(jié)果

在QP-2010 Plus上對(duì)洋甘菊精油進(jìn)行 GC/MS分析,共檢出98個(gè)色譜組分,其總離子流圖示于圖1。在7890A/5975C上分析共檢出68個(gè)色譜組分,其總離子流圖示于圖2。利用譜庫檢索技術(shù)和保留指數(shù)對(duì)圖1中色譜組分進(jìn)行定性分析,確定精油中的化學(xué)成分;利用MassWorks軟件對(duì)圖2進(jìn)行定性分析,確定各個(gè)組分的相對(duì)分子質(zhì)量和分子式,利用NIST 08質(zhì)譜解析軟件檢索分子式確定化合物的結(jié)構(gòu);將圖1的定性結(jié)果和圖2的分析結(jié)果進(jìn)行相互確證,最終確定了35種成分,分析結(jié)果列于表1。

圖1 GC/MS分析獲得的總離子流圖Fig.1 The total ion current chromatogram obtained by GC/MS

圖2 GC/MS分析獲得的總離子流圖Fig.2 The total ion current chromatogram obtained by GC/MS

表1 洋甘菊精油成分Table 1 Composition of the essential oils fromChamomila recutitaL.

續(xù)表

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

從兩種色譜柱的分離情況來看,Rxi-5ms柱共分離出98種組分,而CP-WAX 57CB柱分離出68種組分。這兩種色譜柱的性質(zhì)也不相同,Rxi-5ms柱為弱極性柱,CP-WAX 57CB柱為強(qiáng)極性柱。綜合這兩種色譜柱的特點(diǎn)以及分離譜圖,認(rèn)為選取 Rxi-5ms柱作為洋甘菊精油的色譜分離柱為宜。

3.2 洋甘菊精油中化學(xué)成分的組成

由表1可知,洋甘菊精油的主要成分是倍半萜類及其含氧化合物,占總含量的87.41%,主要有反式-β-金合歡烯、大根香葉烯、雙葉環(huán)香烯、α-紅沒藥醇、α-氧化紅沒藥醇(A、B)、母菊薁等;還有少量的單萜類及其含氧化合物,約占3.6%,主要有β-羅勒烯、γ-松油烯、蒿酮、艾醇等;其次為一些含量極低的脂肪族化合物,如2-甲基丁酸乙酯、二十一烷、二十三烷、二十五烷等。

母菊薁(Chamzulene)是洋甘菊精油的特征成分,是蒸餾過程中母菊素(Matricin)的次生產(chǎn)物,具有消炎、增強(qiáng)細(xì)胞再生、減輕過敏反應(yīng)等作用 ;α-紅沒藥醇、α-氧化紅沒藥醇(A、B)為洋甘菊精油中的重要成分,含這幾種成分高的精油常作為抗炎、解痙劑;另外 ,反式-β-金合歡烯、大根香葉烯、雙環(huán)香葉烯、α-金合歡烯、β-羅勒烯等高含量組分是構(gòu)成天然香料的重要香氣成分,也是香料工業(yè)中重要的萜烯類化合物。

3.3 定性方法評(píng)價(jià)

GC/MS技術(shù)在食品安全、香精香料、環(huán)境等領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用[8]。該技術(shù)利用保留時(shí)間和NIST譜庫檢索對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行定性,但在譜庫檢索時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)匹配度不高或幾個(gè)待選物的匹配度相似等情況,此時(shí)通過譜庫檢索定性會(huì)產(chǎn)生很大的不確定性,若能獲得化合物的精確質(zhì)量信息,將大大提高 GC/MS定性能力,但低分辨率的四極桿質(zhì)譜無法測定化合物的精確質(zhì)量數(shù)。MassWorks質(zhì)譜解析軟件采用美國Cerno專利的 MSIntegrityTM校正技術(shù),通過對(duì)質(zhì)譜峰形的校正提高儀器的質(zhì)量測量精度[9],利用其同位素峰形校正檢索技術(shù)(CLIPs),能在質(zhì)譜上實(shí)現(xiàn)對(duì)未知化合物分子式的識(shí)別[10-11]。利用MassWorks軟件的優(yōu)勢,將其運(yùn)用到 GC/MS分析中,可大大提高定性的準(zhǔn)確度。例如,圖1中保留時(shí)間為41.398 min的色譜峰,質(zhì)譜檢索結(jié)果表明,檀香醇(Stantalol,C15H24O)和α-紅沒藥醇 (α-Bisabolol,C15H26O)的匹配度最高,均為75%,通過質(zhì)譜匹配度很難確定該化合物;圖2中保留時(shí)間為49.157 min的色譜峰經(jīng)MassWorks分析確定該化合物的相對(duì)分子質(zhì)量為222.198 4,通過 Mass Works的 CLIPs檢索功能確定分子式為C15H26O,利用NIST 08質(zhì)譜解析軟件檢索分子式確定為α-紅沒藥醇;對(duì)比2張色譜圖,可以確定這2個(gè)色譜峰均為重要的特征峰,而α-紅沒藥醇在兩張總離子流圖的其他位置均未出現(xiàn),因而很容易確定該化合物為α-紅沒藥醇。同時(shí)資料[4-5]表明,α-紅沒藥醇為洋甘菊精油的主要特征成分。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,本研究確定的洋甘菊精油的化合物成分與文獻(xiàn)[2-5]的報(bào)道基本一致,這說明結(jié)合 GC/MS和MassWorks質(zhì)譜解析軟件定性分析植物精油中的化學(xué)成分是可行的。

4 結(jié)論

結(jié)合 GC/MS技術(shù)和MassWorksTM質(zhì)譜解析軟件對(duì)產(chǎn)自甘肅省永登縣的洋甘菊精油中的化學(xué)成分進(jìn)行定性分析,成功地分離并確定了35種化合物。MassWorks軟件對(duì)化合物相對(duì)分子質(zhì)量的精確測定及對(duì)化合物分子式的準(zhǔn)確識(shí)別功能,能為低分辨率四極桿質(zhì)譜確定化合物的元素組成和解析化合物結(jié)構(gòu)提供重要依據(jù),并能提高 GC/MS定性的可靠性,同時(shí)也為植物精油的成分分析提供新的技術(shù)手段。

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[2]鄭漢臣,陳海生.國產(chǎn)母菊精油的成分分析[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),1990,11(2):123-127.

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Analysis of Essential Oils fromChamomila recutitaL.by MassWorksTMand G as Chromatography-Mass Spectrometry

LI Bin1,ZHOU Wei1,2
(1.College of Geography and Environmental Science,Northwest Normal University,L anzhou730070,China;2.Gansu Entry-Exit Inspection&Quarantine B ureau,L anzhou730020,China)

The constituents of theMatricaria recutitaL.essential oil from Yongdeng of Gansu were analyzed by GC/MS and MassWorksTMsoftware.The suitable chromatography and mass spectrometry conditions for the analysis of chamomile essential oil were determined by comparing the separation results in two different polarity columns.35 kinds of compounds were identified.MassWorks can determine the accurate molecular weight of compounds and provide important basis for the low-resolution quadrupole mass spectrometer to identifying the elemental compositions and the structure of compound,as well as provide a new technical means for the component analysis of the essential oils.

Matricaria recutitaL.;GC/MS;MassWorksTM;component analysis

周 圍(1953～),男(漢族),研究員,從事食品營養(yǎng)及食品安全分析研究。E-mail:zhouwei845@163.com

O 657.63

A

1004-2997(2011)04-0241-05

2010-10-23;

2011-01-11

李 斌(1987～),男(漢族),碩士研究生,環(huán)境科學(xué)專業(yè)。E-mail:libincheng223@163.com