HPLC法測定復(fù)方逍遙合劑中黃芩苷的含量

張武標(biāo)，沈 陽，劉兆康，王申東

上海市兒童醫(yī)院（上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院），上海 200040

HPLC法測定復(fù)方逍遙合劑中黃芩苷的含量

張武標(biāo)，沈 陽，劉兆康，王申東

上海市兒童醫(yī)院（上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院），上海 200040

目的：建立復(fù)方逍遙合劑中黃芩苷的含量測定方法。方法：采用HPLC法，色譜柱Calesil-C18（4.6mm×250mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇∶0.1%磷酸（47∶53），檢測波長：280 nm。 結(jié)果：黃芩苷進(jìn)樣量在 0.08～0.80 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系 (r=0.999 9)，低、中、高三種濃度的平均回收率為99.59%、100.22%、100.40%，RSD分別為0.75%、2.58%、0.86%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

復(fù)方逍遙合劑；HPLC；黃芩苷

復(fù)方逍遙合劑為我院自制制劑（滬藥制字Z04090765），由黃芩、當(dāng)歸、郁金、陳皮、香附、柴胡、白芍、柴胡、梔子、茯苓、生牡蠣 、黃柏、白術(shù)等十幾味中藥組成。具有舒肝理氣、清熱活血、軟堅(jiān)化痰等功能，用于調(diào)理肝郁痰阻型女童早期性早熟，運(yùn)用臨床多年來效果顯著。其中黃芩為處方主藥，黃芩苷是黃芩主要有效成分。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，確保臨床療效，參考文獻(xiàn)[1-3]，本文采用HPLC法對(duì)制劑中黃芩苷含量進(jìn)行定量分析，方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀，包括Agilent G1311A四元泵（Quatpump），AgilentG1322A 真空在線脫氣機(jī)（Degrasser），Agilent G1313A 自動(dòng)進(jìn)樣器（ALS），Agilent G1315B DAD二級(jí)管陣列檢測器，Agilent chemstation system （安捷倫化學(xué)色譜工作站）；電子天平（Sartorius，d=0.01 mg）；超聲提取器（SB1000，寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 試藥

供試品復(fù)方逍遙合劑 （上海市兒童醫(yī)院）；黃芩苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)：110715-200815）；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4]

色譜柱 Calesil-C18（4.6 mm×250mm，5 μm）； 流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸（47∶53）；檢測波長：280 nm；柱溫：30℃；流速：1 ml/min；理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2 000。

2.2 溶液制備[5-6]

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取在五氧化二磷真空干燥24 h的黃芩苷對(duì)照品0.004 00 g，加甲醇8m l，超聲20min，放冷，用甲醇定容到10ml，再精密吸取1m l于10ml量瓶中，用甲醇定容，即得對(duì)照品濃度為0.04mg/m l。

2.2.2 供試品溶液制備 準(zhǔn)確量取樣品合劑2ml于100m l量瓶中，加80ml甲醇，超聲20min，放冷，用甲醇定容至刻度。再精密吸取4ml于25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 按處方比例和制法，制成缺黃芩的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μl，注入液相色譜儀中測定。結(jié)果顯示，供試品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上有一相同保留時(shí)間的色譜峰；陰性對(duì)照溶液在此保留時(shí)間處無色譜峰。表明在實(shí)驗(yàn)條件下，其他藥材成分對(duì)測定結(jié)果無干擾，見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 2、4、8、12、20 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，以黃芩苷對(duì)照濃度x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸計(jì)算，得回歸方程為：y=3.32×10-7x+3.58×10-7（r=0.999 9，n=5）。 表明黃芩苷進(jìn)樣量在0.08～0.80μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)6針，進(jìn)樣量10μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果顯示，RSD=0.64%（n=6），說明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液，分別在 0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣，每個(gè)時(shí)間段連續(xù)進(jìn)樣2針，進(jìn)樣量10μl。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，RSD=3.04%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密量取本品（批號(hào)：20100901）按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制得供試品溶液6份，每份進(jìn)樣2針，進(jìn)樣量10μl。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果樣品中黃芩苷的平均含量為 3.23mg/ml，RSD 為 1.87%（n=6）。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的樣品 （批號(hào)：20100901，3.23mg/ml）0.44ml于25ml量瓶中，精密加入0.4mg/ml的對(duì)照品溶液2.2、3.3、4.4ml后，加入一定量的甲醇，超聲20min，放冷，用甲醇定容至刻度。精密吸取1m l于10m l量瓶中，用甲醇定容，配制成低、中、高三種濃度的溶液，同時(shí)制備三份樣品。每份樣品重復(fù)進(jìn)樣2針，每針10μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算黃芩苷的回收率。結(jié)果表明黃芩苷的回收率良好，結(jié)果見表1。

表 1 加樣回收率試驗(yàn)（n=3）

2.9 樣品含量測定

取樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制成供試品溶液。吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，以外標(biāo)法計(jì)算黃芩苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 三批樣品黃芩苷含量測定結(jié)果

3 討論

黃芩為處方主藥，黃芩苷是黃芩的主要有效成分，以該成分的含量測定來控制產(chǎn)品質(zhì)量，有助于保證臨床療效；本文所建立的含量測定方法，簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于合劑的質(zhì)量控制。

黃芩苷能溶于甲醇、乙醇和水，試驗(yàn)中分別采用了不同濃度的甲醇、乙醇溶液作為溶劑，結(jié)果以甲醇提取率較高，干擾成分少；提取方法選擇時(shí)，我們以甲醇作為供試品提取溶劑，分別考察了加熱回流提取以及不同時(shí)間的超聲提取率，結(jié)果表明超聲提取20min提取率最佳，方法簡便，結(jié)果重現(xiàn)性好，故確定為甲醇超聲提取20min。

中藥的療效是多種活性成分共同作用的結(jié)果，僅對(duì)其中的一個(gè)或幾個(gè)成分加以控制，難以全面把握中藥及制劑的質(zhì)量、療效和穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)合劑中黃芩苷含量進(jìn)行測定，其他活性成分的控制還有待進(jìn)一步研究。

[1]李卓,危當(dāng)恒.咽喉炎合劑中黃芩苷的穩(wěn)定性考察[J].中國藥房,2008,19(36):2845-2846.

[2]張先平,李桃榮.高效液相色譜法測定膚康合劑中黃芩苷的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2008,28(22):1967-1968.

[3]趙玉佳,孟祥麗,鞠寶玲.HPLC測定雙黃連口服液中黃芩苷的含量測定[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2009,15(4):90.

[4]國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:211.

[5]舒德忠,鄭小敏,盛明智.高效液相色譜法測定消炎止咳糖漿中黃芩苷的含量[J].中國藥師,2008,11(8):947-948.

[6]林冬杰,梁威.HPIC法測定感冒止咳糖漿中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量[J].中國藥師,2009,12(8):1044-1046.

Content determ ination of Baicalin for Com pound Xiaoyao Oral Solution by HPLC

ZHANGWubiao,SHENYang,LIUZhaokang,WANGShendong
Children′s Hospital of Shanghai,Shanghai Children′s Hospital Affiliated of Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200040,China

Objective:To establish amethod for determination the content of Baicalin in Compound Xiaoyao Oral Solution．M ethods:Calesil-C18column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used，Mobile phase wasmethanol-0.1%phosphoric acid(47∶53)，Detection wavelength was 280 nm．Results:Baicalin sample size located 0．08-0.80 μg，and favourable linear correlation (r=0．999 9)was showed．The average recovery rates of low,moderate and high concentration were 99.59%,100.22%,100.40%with RSD of 0.75%,2.58%,0.86%,respectively.Conclusion:The method is convenient and accurate.Meanwhile,it also has good reproducibility,may be used to quality control of Baicalin．

Compound Xiaoyao Oral Solution;HPLC;Baicalin

R927.72

A

1673-7210（2011）03（b）-058-03

張武標(biāo)（1973.10-），男，碩士學(xué)歷，副主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。

沈陽（1963.9-）,男，副主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)工作。

2011-01-12）