薄層色譜法鑒別活血通脈片研究

徐曉弘，熊 鑫

（大慶油田總醫(yī)院藥學(xué)部，黑龍江大慶 163001）

薄層色譜法鑒別活血通脈片研究

徐曉弘，熊 鑫

（大慶油田總醫(yī)院藥學(xué)部，黑龍江大慶 163001）

目的：建立活血通脈片的薄層鑒別方法。方法：運(yùn)用TLC法對(duì)該制劑中的三七、赤芍、紅花、川芎四味藥材進(jìn)行鑒別研究，其中均以各自的陰性對(duì)照品和相應(yīng)有效成分進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)。結(jié)果：經(jīng)多次試驗(yàn)斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，陰性無(wú)干擾。結(jié)論：表明該方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、專屬性和重現(xiàn)性強(qiáng)，可作為該制劑質(zhì)量控制的定性依據(jù),也為今后標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了依據(jù)。

活血通脈片；薄層鑒別；對(duì)照

活血通脈片處方來(lái)源于多年臨床應(yīng)用的驗(yàn)方，在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，以活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)為組方原則[1]，以三七、赤芍、紅花等中藥組成處方，主要用于冠狀動(dòng)脈硬化引起的心絞痛，胸悶氣促，心氣不足，瘀血作痛?；钛}片以三七藥效為主治療心臟疾病的新制劑,其有效成分具有增加冠脈血流量、擴(kuò)張血管、降低心肌耗氧量等作用[2]、保護(hù)腦組織等多方面的藥理活性[3]，同時(shí)為廣大心臟病患者帶來(lái)了福音[4]。本文根據(jù)所查文獻(xiàn)，結(jié)合復(fù)方中主藥的特點(diǎn)，對(duì)川芎、紅花、赤芍進(jìn)行薄層色譜定性鑒別。以便對(duì)活血通脈片的質(zhì)量更好的控制。

1 試劑與藥品

三七、紅花、川芎、赤芍藥材（長(zhǎng)春宏檢藥材公司）；人參皂苷Rb1、Rg1、三七皂苷R1對(duì)照品、木犀草素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；95%乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、磷酸、甲醇、鹽酸、氯仿、硫酸、正己烷（北京化工廠）；羧甲基纖維素鈉（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；乙醚（天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司）；以上所用液體試劑除色譜乙腈、甲醇外均為分析純，固體試劑為化學(xué)純。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

本品為黃褐色的片或糖衣片，氣香，味微苦。

2.2 薄層鑒別

按《中國(guó)藥典》2005年版一部項(xiàng)下的鑒別方法及結(jié)合文獻(xiàn)對(duì)三七、川芎、紅花、赤芍進(jìn)行薄層鑒別，從而進(jìn)行定性分析。

2.2.1 三七的薄層鑒別 取本品1.0 g，加甲醇溶液25 ml，超聲處理（100 W，40 kHz）30 min，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml使溶解，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取3次（15、10、10 ml），合并正丁醇液，用氨試液提取3次，每次15 ml，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15 ml，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rb1、Rg1及三七皂苷R1對(duì)照品，加甲醇制成每毫升各含1 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶23∶10）10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的三個(gè)斑點(diǎn)。

2.2.2 紅花的薄層鑒別 紅花具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛的功效，有抗凝血、抗血栓的作用[5]，研究結(jié)果也表明紅花具抑制炎癥反應(yīng)的作用。取本樣品1.5 g，取25 ml 80%丙酮，超聲提取20 min，濾過(guò)，濾液濃縮至10 ml，作為供試品溶液。另取紅花對(duì)照藥材細(xì)粉，放入80%丙酮振搖提取15 min，作為對(duì)照藥材溶液。另按處方比例和制法，制得不含紅花的樣品作為陰性對(duì)照液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液2 μl、三批供試品溶液、陰性對(duì)照液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶2∶0.4）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干。層析結(jié)果，日光下檢識(shí)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，見(jiàn)圖2。

2.2.3 赤芍的薄層鑒別[6]赤芍是中國(guó)傳統(tǒng)的重要天然藥物之一，用于清熱涼血、散瘀止痛[6]、鎮(zhèn)靜，經(jīng)常用于婦科疾病。從赤芍中分離得到的赤芍精在體內(nèi)有抗高脂肪和高膽固醇引起的血小板聚集作用和血栓形成作用[7]，赤芍總苷可以顯著改善機(jī)體微循環(huán)狀態(tài)，降低血漿黏度。取本品粉末1.5 g，加乙醇10 ml，振搖5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? ml使溶解，作為供試品溶液。另取赤芍對(duì)照藥材細(xì)粉，同法制成對(duì)照藥材溶液。另按處方比例和制法，制得不含赤芍的溶液作為赤芍陰性對(duì)照液。取芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液，作對(duì)照品溶液。照薄層色譜法 （《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取三批供試品溶液、藥材對(duì)照品、陰性對(duì)照品各4 μl，芍藥苷對(duì)照品5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸 （40∶5∶10∶0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾，重現(xiàn)性好，見(jiàn)圖3。

2.2.4 川芎的薄層鑒別 取本品粉末5 g，加乙酸乙酯50 ml，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液蒸至約5 ml，通過(guò)中性氧化鋁柱（100～200目，6 g，內(nèi)徑為1 cm，105℃活化1 h，干法裝柱）上，用乙酸乙酯50 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芤? ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對(duì)照藥材0.5 g，加乙酸乙酯10 ml，超聲處理15 min，濾過(guò)，濾液作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB）[8]，吸取上述兩種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（9∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干。置紫外燈下（365 nm）檢識(shí)，供試品色譜中在與對(duì)照藥材相應(yīng)位置上呈相同顏色斑點(diǎn)。

3 討論

活血通絡(luò)片是以三七、赤芍、紅花、降香、郁金、川芎、陳皮、木香、石菖蒲、枸杞子、黃精等十七味藥材組成，具有活血通脈，強(qiáng)心鎮(zhèn)痛的功效，用于冠狀動(dòng)脈硬化引起的心絞痛，胸悶氣促，心氣不足，瘀血作痛。本文運(yùn)用TLC法對(duì)該制劑中的三七、赤芍、紅花、川芎四味藥材進(jìn)行了鑒別研究，其中均以各自的陰性對(duì)照品和相應(yīng)有效成分進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，經(jīng)多次試驗(yàn)斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好，陰性無(wú)干擾，結(jié)果表明該方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、專屬性和重現(xiàn)性強(qiáng)，可作為該制劑質(zhì)量控制的定性依據(jù)，也為今后標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了依據(jù)。

[1]付長(zhǎng)庚.試論血瘀在中風(fēng)發(fā)病中的作用[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006,30 (1):32-33.

[2]周絢,傅超美,易秋艷,等.三七藥材、三七總皂苷及三七緩釋片的指紋圖譜[J].華西藥學(xué)雜志,2009,24(1):77-79.

[3]李毛全,夏倫祝,章俊如,等.超臨界CO2萃取三七中揮發(fā)油及皂苷的工藝研究[J].安徽醫(yī)藥,2009,13(3):261-273.

[4]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上冊(cè).上海:上海人民出版社,1977:1300.

[5]徐如英,童樹(shù)洪.紅花的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].綜述報(bào)告, 2010,19(20):86-87.

[6]孫榮斌,程寶榮,武露凌.赤芍中脂溶性成分GC/MS聯(lián)用分析[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(2):283-284.

[7]孫英連.赤芍總苷對(duì)大鼠急性心肌缺血的影響[J].中草藥,2009,12(40): 1961-1962.

[8]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:103,109.

Study on deterination of Promoting coronary circulation Tablets by TLC

XU Xiaohong,XIONG Xin
(School of Pharmacy,General Hospital of Daqing Oil,Heilongjiang Province,Daqing 163001,China)

Objective:To establish a thin layer distinction method of identification of Promoting coronary circulation Tablets.Methods:The TLC was adopted for carring out research of pseudo-ginseng,radix paeoniae rubra,safflower and ligusticum wallichii,in contrast to the negative and effective ingredient in contrast to the corresponding.Results:The experiment was shown that it had a clear and well spot and no interference of negative.Conclusion:It is indicated that the method is simple,stability,and in the exclusive property and can be used for qualitative control of the quality and standards for the amendment provides a basist.

Promoting coronary circulation Tablets;Thin layer distinction;Comparison

R927.2

A

1673-7210（2011）02（b）-038-03

2010-12-15）