Survivin與Bax蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

張偉健 車(chē)小群 鐘 倩 練曉勤

（廣東省江門(mén)市中心醫(yī)院婦科，廣東 江門(mén) 529030）

Survivin與Bax蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義

張偉健 車(chē)小群 鐘 倩 練曉勤

（廣東省江門(mén)市中心醫(yī)院婦科，廣東 江門(mén) 529030）

目的研究Survivin、Bax在宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及宮頸癌中的表達(dá)，探討二者在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的作用及臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Survivin和Bax蛋白在83例宮頸上皮內(nèi)瘤變及71例宮頸癌中的表達(dá)，另取12例正常宮頸組織作為對(duì)照。結(jié)果Survivin 蛋白的陽(yáng)性率在宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤變和正常宮頸組織中分別為76.1%、45.8%和0%，Bax蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為7%、39.8%和75.0%（P＜0.05）。Survivin蛋白表達(dá)在CIN Ⅲ高于CIN Ⅱ，CIN Ⅱ高于CIN Ⅰ，在宮頸癌Ⅲ期高于Ⅱb期，Ⅱb期高于Ⅰ～Ⅱa期，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）。在宮頸癌與CIN中Survivin與Bax的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論Survivin和Bax的異常表達(dá)可能參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，在抗凋亡作用增強(qiáng)、促凋亡作用下降兩方面協(xié)同發(fā)揮作用，二者的表達(dá)程度與不良預(yù)后有關(guān)。

Survivin；Bax；宮頸癌；宮頸上皮內(nèi)瘤變

宮頸癌是女性最常見(jiàn)的生殖道惡性腫瘤。細(xì)胞癌基因的激活、抑癌基因的失活和細(xì)胞凋亡的抑制是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制。Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的一種凋亡抑制基因，具有抑制凋亡效應(yīng)蛋白酶Caspase的活性、參與細(xì)胞周期調(diào)控及調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂等多種生物學(xué)作用[1]。Bax是一種促凋亡基因，可以通過(guò)激活Caspase信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、破壞ATP合成功能、改變細(xì)胞氧化還原反應(yīng)等機(jī)制發(fā)揮促凋亡作用[2]。本研究通過(guò)檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及宮頸癌組中的Survivin與Bax的蛋白表達(dá)，探討二者在宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2006年1月至2010年12月江門(mén)市中心醫(yī)院收治的宮頸癌患者71例，按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）宮頸癌分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期：Ⅰ～Ⅱa期18例、Ⅱb期26例、Ⅲ期27例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例。CIN患者83例，CINⅠI級(jí)（輕度不典型增生）24例，CIN Ⅱ級(jí)（中度不典型增生）31例，CIN Ⅲ級(jí)（中度不典型增生）28例。宮頸正常者12例。3組年齡均為29～68歲，平均年齡44.6歲。所有患者術(shù)前均未進(jìn)行化療和放療。

1.2 主要試劑

鼠抗人Survivin單克隆抗體、鼠抗人Bax單克隆抗體、一抗及二抗試劑盒和染色劑均購(gòu)于上海晶美生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本處理

所有標(biāo)本及時(shí)以4%多聚甲醛（含有1/1000DEPC）固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。

1.3.2 免疫組織化學(xué)染色

采用免疫組織化學(xué)S-P法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，以檸檬酸緩沖液高溫高壓進(jìn)行抗原修復(fù)，DAB顯色，用公司出售陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3.3 結(jié)果判定

Survivin陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：Survivin陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，偶見(jiàn)于細(xì)胞核，以細(xì)胞漿或胞核出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性信號(hào)；Bax表達(dá)陽(yáng)性為細(xì)胞漿呈棕黃色或棕褐色顆粒。每例均隨機(jī)觀察5個(gè)高倍視野（×400），用半定量積分法判斷結(jié)果，陽(yáng)性細(xì)胞≤5%為0分，6%～25%為 1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞ 75%為4分；陽(yáng)性強(qiáng)度黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)積分相乘：0分為陰性（一），1～4分為弱陽(yáng)性（+），5～8分為中度陽(yáng)性（++），9～l 2分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS11.5軟件對(duì)Survivin和Bax在各組中表達(dá)的陽(yáng)性率進(jìn)行比較，采用χ2檢驗(yàn)或四格表的Fisher確切概率法；相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Survivin蛋白在3種組織中的表達(dá)

Survivin陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿，偶見(jiàn)于細(xì)胞核。Survivin在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮預(yù)癌組織中有非常豐富的表達(dá)。但是在正常宮頸組織中的表達(dá)為陰性。Survivin陽(yáng)性程度：宮頸癌高于CIN（χ2=14.58，P＜0.05），CIN高于正常宮頸組織（χ2=11.21，P＜0.05），見(jiàn)表1。且隨病變臨床分期和組織分化程度的升高而升高：CIN Ⅲ高于CIN Ⅱ（χ2=4.16，P＜0.05），CIN Ⅱ高于CIN Ⅰ（χ2=4.99，P＜0.05），宮頸癌Ⅲ期高于Ⅱb期（χ2=4.34，P＜0.05），Ⅱb期高于Ⅰ～Ⅱa期（χ2=4.85，P＜0.05）。而CIN Ⅲ與宮頸癌之間（χχ2=3.34，P＞0.05）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Survivin蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率高于無(wú)轉(zhuǎn)移組（χ2=7.48，P＜0.05），見(jiàn)表2。

表1 Survivin和Bax在3組中的表達(dá) n（%）

表2 宮頸組織中Survivin和Bax蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.2 Bax蛋白在3組織中的的表達(dá) Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要存在于細(xì)胞漿，在宮頸上皮內(nèi)瘤變、宮頸癌及正常宮頸組織中均有表達(dá)。Bax陽(yáng)性程度：宮頸癌低于CIN（χ2=22.04，P＜0.05），CIN低于正常宮頸組織（χ2=5.28，P＜0.05），見(jiàn)表1。在CIN陽(yáng)性率隨CIN級(jí)別的升高而降低：CIN Ⅲ低于CIN Ⅱ（χ2=0.60，P＞0.05），CIN Ⅱ低于CIN I（χ2=0.6，P＞0.05），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在宮頸癌陽(yáng)性率隨臨床分期的增高而降低：Ⅲ期低于Ⅱb期（χ2=0.39，P＞0.05），Ⅱb期低于Ⅰ～Ⅱa期（χ2=0.15，P＞0.05），但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Bax蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率低于無(wú)轉(zhuǎn)移組（χ2=0.20，P＞0.05），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

2.3 CIN和宮頸癌組織中Sruvivin的表達(dá)強(qiáng)度與Bax蛋白表達(dá)強(qiáng)度之間均呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（r1=-0.83，P1＜0.05；r2=-0.86，P2＜0.05）。

3 討 論

宮頸病變從良性病變發(fā)展為CIN、原位癌、浸潤(rùn)癌是一個(gè)多階段、多步驟的連續(xù)過(guò)程，與多種癌基因和抑癌基因的表達(dá)、調(diào)控以及細(xì)胞凋亡有關(guān)。Survivin屬于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族新成員，是具有細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的雙功能蛋白，是至今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子[3]。Survivin可直接作用于Caspase這一凋亡核心機(jī)制，主要通過(guò)粘附于活化的Caspase-3、Caspase-7[4]，從而阻斷凋亡過(guò)程，這說(shuō)明Survivin是在凋亡通道匯聚點(diǎn)的部位起作用。Survivin在成人終末分化的成熟組織（除胸腺、生殖腺）中不表達(dá)或極低表達(dá)，而在人類(lèi)大多數(shù)腫瘤中都可檢測(cè)到Survivin。本研究顯示，正常宮頸組織無(wú)Survivin表達(dá)，CIN陽(yáng)性表達(dá)率為45.8%，宮頸癌為76.1%，這一結(jié)果與李婷等[5]的報(bào)道一致。Kim等[6]通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法對(duì)41例CIN及宮頸浸潤(rùn)癌的研究發(fā)現(xiàn)，隨著病變的發(fā)展，Survivin的表達(dá)逐漸升高。本研究表明Survivin蛋白表達(dá)在CIN和宮頸癌組織中逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著CIN級(jí)別的升高、宮頸癌分期的進(jìn)展和向遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，Survivin的表達(dá)隨之增強(qiáng)。以上結(jié)果提示Survivin蛋白表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，其可能通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖而發(fā)揮作用，可能預(yù)示腫瘤具有較高的侵襲性和不良預(yù)后。

Bax是Bcl-2家族的重要成員，對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控起著重要作用。Bcl-2可以抑制多種組織的細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)細(xì)胞生存而參與腫瘤的發(fā)生，是目前公認(rèn)的抗凋亡基因。Bax是水溶性蛋白，能與Bcl-2形成二聚體，具有抑制Bcl-2從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，Bax蛋白表達(dá)水平在正常宮頸組織中高于CIN，在CIN中高于宮頸癌，與文獻(xiàn)報(bào)道較一致[7]。研究結(jié)果提示Bax在正常組織中的高表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡，不致引起細(xì)胞異常增殖從而引發(fā)腫瘤的形成。而在腫瘤組織的表達(dá)下調(diào)，細(xì)胞增殖不能得到有效控制，細(xì)胞凋亡減少，異常細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，致使腫瘤的發(fā)生。

同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)Survivin的表達(dá)與Bax存在負(fù)相關(guān)性，提示二者在抗凋亡作用增強(qiáng)、促凋亡作用下降兩方面協(xié)同發(fā)揮作用，目前二者的相互作用機(jī)制尚不清楚。有研究表明，Survivin能抑制由Fas/Caspase -8和Bax /細(xì)胞色素C誘導(dǎo)的Caspase活化和凋亡[8]，但二者作用于何種序列、如何抑制Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)從而協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)錄引發(fā)宮頸癌變尚有待于進(jìn)一步研究。

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Expression and Clinical Significance of Surviving and Bax in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cervical Carcinoma

ZHANG Wei-jian, CHE Xiao-qun, ZHONG Qian, LIAN Xiao-qin
(Department of Gynecology, Jiangmen Central Hospital, Jiangmen 529030, China)

ObjectiveTo investigate the expression of surviving and Bax in cervical intraepithelial neoplasia and cervical carcinoma, and to explore the role of them in cervical carcinoma pathogenesis.MethodsThe exprssion of Survivin and Bax was detected with immunohistochemical method in situ in CIN and cervical carcinoma. Normal cervical tissues were acted as the control.ResultsThe positive rates of Survivin protein in cervical carcinoma, CIN and the normal cervical tissues were 76.1%, 45.8% and 0%,respectively. While the expression of Bax were 7%, 39.8% and 75.0% in the above three groups(P＜0.05). The expression of Survivin in CIN Ⅲ was obviously more signifi cant than those in CIN Ⅰ/Ⅱ. And the differences were obviously more signifi cant in cervical carcinoma at stage Ⅱb-Ⅲ than those at stage Ⅰ～Ⅱa. The expression of Survivin in cervical carcinoma with lymphatic metastasisi was more signifi cant difference than those with lymphatic metastasis. Negative correlation between Survivin and Bax protein was observed in cervical carcinoma.ConclusionThe abnormal expression of Survivin and bax may participate in the occurrence and development of cervica carcinoma, and suggest malignant degree of tumor and patients' poor prognosis.

Survivin; Bax; Cervical carcinoma; CIN

R737.33

B

1671-8194（2011）03-0011-02