大學(xué)生痤瘡的病原學(xué)調(diào)查分析

[摘要]目的：分析大學(xué)生痤瘡與螨蟲(chóng)、痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌三種病原感染的相關(guān)性。方法：采集石河子大學(xué)中度、重度或重度集簇性顏面部痤瘡患者樣本55份，進(jìn)行常規(guī)螨蟲(chóng)檢查；根據(jù)痤瘡丙酸桿菌和金黃色葡萄球菌16S rRNA序列，對(duì)采集樣本細(xì)菌培養(yǎng)物進(jìn)行PCR檢測(cè)；用SPASS軟件分析三種病原感染患者在性別、地域上的相關(guān)性。結(jié)果：螨蟲(chóng)陽(yáng)性率為23.63%（13/55），痤瘡丙酸桿菌的陽(yáng)性率為90.91%（50/55），金黃色葡萄球菌陽(yáng)性率為72.73%（40/55）。螨蟲(chóng)感染率高低與大學(xué)生來(lái)源地（疆內(nèi)外）有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但與性別無(wú)相關(guān)性；痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌感染率高低與大學(xué)生來(lái)源地、性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、螨蟲(chóng)可能是中度、重度或重度集簇性痤瘡患者的重要病原。

[關(guān)鍵詞]痤瘡；螨蟲(chóng)；痤瘡丙酸桿菌；金黃色葡萄球菌

[中圖分類(lèi)號(hào)]R758.73+4[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2011）02-0272-03

Investigation on pathogenic analysis of college student acne

HOU Jian， LIU Chen-lan，HUANG Rong， WANG Jing， CHEN Ya-miao， LI Yong-xiang， WANG Yuan-zhi， LI Xiao-ju

（Medical College of Shihezi University，Shihezi 832002，Xinjiang，China）

Abstract: Objective To analyse the relation between college students'acne and infection of demodicid mite， prpropionibacterium acne and staphylococcus areus. Methods 55 samples of middle severe acne，severe acne or severe cluster-acne were obtained from face of Shihezi University students. demodicid mite were detected by conventional method. According to 16S rRNA sequence of P. acne and S. areus， two pair primers were devised. The optimal PCR condition were screened out and employed in 55 samples. Weather the difference existed between 3 pathogen infection and some factors， including sex， weather of born-land by analysis of SPSS software. Results The positive rate of D. mite， P. acne and S. areus were 23.63%， 90.91% and 72.73%， respectively. The significant difference existed between D. mite infection and born-land. Conclusion D. mite， P. acne and S. areus likely are important pathogens to the patients with middle severe acne， severe acne or severe cluster-acne.

Key words: acne; demodicid mite; propionibacterium acne; staphylococcus areus

痤瘡是由毛囊及皮脂腺阻塞、發(fā)炎所引發(fā)的一種皮膚疾病[1]。根據(jù)引發(fā)的原因和發(fā)病機(jī)理不同可將其分為四級(jí)[2]：I級(jí)（輕度）：黑頭粉刺散發(fā)或多發(fā)，炎癥性皮疹散發(fā)；II級(jí)（中度）：I級(jí)+淺在性膿皰，炎癥性皮疹數(shù)目增加，局限于面部；III級(jí)（重度）：II級(jí)+深在性炎癥性皮疹，發(fā)生于顏面、頸部和胸背部；IV級(jí)（重度集簇性）：III級(jí)+囊腫，易形成瘢痕，發(fā)生于上半身。目前國(guó)外學(xué)者多認(rèn)為痤瘡不僅是皮膚病，更是一種與心理因素有著密切關(guān)系的疾病[3]，它使患者產(chǎn)生焦慮以及其他心理問(wèn)題。在病原學(xué)研究方面，國(guó)內(nèi)外學(xué)者一致認(rèn)為痤瘡的嚴(yán)重程度與螨蟲(chóng)、痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌等[4-5]有關(guān)。本研究以石河子大學(xué)不同地域來(lái)源的大學(xué)生為研究對(duì)象，采集面部皮膚分泌物，應(yīng)用鏡檢、細(xì)菌培養(yǎng)、PCR等研究方法，分析大學(xué)生痤瘡的嚴(yán)重程度與哪些病原的入侵有關(guān)。該研究為痤瘡的預(yù)防和治療提供了科學(xué)依據(jù)，對(duì)痤瘡的發(fā)病機(jī)制研究有一定借鑒意義。

1 材料和方法

1.1 病例：病例來(lái)源于石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院2007～2009級(jí)本科生，共55例，其中男25例，女30例；按地域劃分，新疆30例，外省25例。病程均大于1年，均為II級(jí)、III級(jí)或IV級(jí)皮損。同時(shí)采集正常人群大學(xué)生鼻翼部分泌物40例（男20例，女20例）作陰性對(duì)照。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料：供細(xì)菌培養(yǎng)用的肉湯培養(yǎng)基按照參考文獻(xiàn)[6]配制。PCR所用試劑購(gòu)自TakaRa公司，痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌陽(yáng)性菌株由本研究室保存，所用引物均由上海生物工程有限公司合成。

1.3方法

1.3.1 螨蟲(chóng)檢查參考文獻(xiàn)[7]進(jìn)行。

1.3.2 樣本的采集和細(xì)菌培養(yǎng)：無(wú)菌操作采集嚴(yán)重型或中等嚴(yán)重型痤瘡分泌物55份，立即接種于普通肉湯培養(yǎng)基，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)72h，8 000rpm離心菌液，收集菌體，50μl超純水懸浮菌體，置于4℃?zhèn)銹CR擴(kuò)增檢測(cè)使用。

1.3.3 引物設(shè)計(jì)：登陸GenBank，根據(jù)金黃色葡萄球菌全基因組序列（NO：NC_002758）和痤瘡丙酸桿菌（NO：NC_006085）的16S rRNA序列，用Pimer 3.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物，引物序列見(jiàn)表1。

1.3.4 PCR條件的篩選及樣本檢測(cè)：以實(shí)驗(yàn)室保存的痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌陽(yáng)性菌株為模板，經(jīng)溫度梯度PCR反復(fù)摸索，最終確立兩種病原同一PCR反應(yīng)的最佳反應(yīng)體系和反應(yīng)參數(shù)。PCR反應(yīng)體系（20μl）如下：10PCR buffer2.0μl，dNTP(2.5mmol)0.8μl，上游引物(20μM)0.2μl，(20μM)下游引物0.2μl，菌液模板2.0μl，ddH2O，14.5μl。

1.3.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPASS軟件分析三種病原感染患者在性別、地域上的相關(guān)性。

2結(jié)果

2.1 螨蟲(chóng)檢查結(jié)果：55份痤瘡陽(yáng)性樣本經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)螨蟲(chóng)檢查法檢查后，陽(yáng)性率為23.63%（13/55），40份痤瘡陰性樣本的陽(yáng)性率為12.50%（5/40）。

2.2 細(xì)菌培養(yǎng)：經(jīng)72h培養(yǎng)后，接種樣本的試管菌液大多數(shù)變得混濁。

2.3 PCR樣本的檢測(cè)：用摸索的最佳PCR反應(yīng)參數(shù)對(duì)55份樣本進(jìn)行PCR檢測(cè)，痤瘡丙酸桿菌的PCR陽(yáng)性率為90.91%（50/55）（見(jiàn)圖1）、金黃色葡萄球菌的PCR陽(yáng)性率為72.73%（40/55）（見(jiàn)圖2），陰性對(duì)照組痤瘡丙酸桿菌PCR陽(yáng)性率為5.00%（2/40）、金黃色葡萄球菌PCR陽(yáng)性率為12.50%（5/40）。

2.4 PCR產(chǎn)物的測(cè)序： 測(cè)序結(jié)果經(jīng)DNAMAN生物軟件比對(duì)分析表明，測(cè)序序列與金黃色葡萄球菌全基因組序列（NO：NC_002758）和痤瘡丙酸桿菌（NO：NC_006085）中16S rRNA對(duì)應(yīng)序列的同源性均大于99%，說(shuō)明PCR擴(kuò)增結(jié)果真實(shí)可靠。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果：三種病原與大學(xué)生性別、地域來(lái)源統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析表明，螨蟲(chóng)感染率高低與大學(xué)生來(lái)源地（疆內(nèi)外）有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見(jiàn)表2)，但與性別無(wú)相關(guān)性；痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌感染率高低與大學(xué)生來(lái)源地、性別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。SPASS分析表2數(shù)據(jù)表明，χ2=6.799， P＜0.05，故有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討論

痤瘡是由多種因素引起的常見(jiàn)慢性毛囊、皮脂腺炎癥性皮膚病，臨床表現(xiàn)為粉刺、丘疹、膿皰、結(jié)節(jié)、瘢痕等，好發(fā)于面、背、胸等富含皮脂腺的部位。目前研究認(rèn)為，痤瘡的發(fā)病機(jī)制與以下原因有關(guān)[8]：毛囊皮脂腺導(dǎo)管開(kāi)口處角化過(guò)度、皮脂分泌過(guò)多、痤瘡丙酸桿菌、金黃色葡萄球菌、螨蟲(chóng)、馬拉色菌等內(nèi)源性細(xì)菌的異常繁殖引起炎癥反應(yīng)，但本實(shí)驗(yàn)對(duì)病原學(xué)的分析表明，嚴(yán)重型或中等嚴(yán)重型痤瘡患者痤瘡丙酸桿菌的感染率為90.91%，金黃色葡萄球菌的感染率為72.73%，螨蟲(chóng)感染率為23.63%，說(shuō)明中度、重度或重度集簇性痤瘡病原感染有一定關(guān)系。另外，在本研究中發(fā)現(xiàn)：①痤瘡患者螨蟲(chóng)感染率高低與疆內(nèi)外大學(xué)生有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能的原因?yàn)樾陆罹觾?nèi)陸，極端干燥的大陸性氣候影響了螨蟲(chóng)人-人間的傳播機(jī)會(huì)；②痤瘡陰性對(duì)照組痤瘡的檢出率為12.50%，與陳雙雙等[9]報(bào)道的13.29%基本一致。

金黃色葡萄球菌和痤瘡丙酸桿菌是機(jī)體的正常菌群。正常菌群是指存在于正常人的體表和同外界相通的腔道（如口腔、腸道等）寄居的不同種類(lèi)和數(shù)量的微生物[10]。在本研究中，采集的陰性樣本先要進(jìn)行外科無(wú)菌處理，再?gòu)谋且矸置谖镏蝎@得，從而降低或去除正常菌群對(duì)PCR陽(yáng)性結(jié)果的污染。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)痤瘡丙酸桿菌和金黃色葡萄球菌，設(shè)計(jì)多對(duì)引物，通過(guò)對(duì)PCR反應(yīng)條件的不斷摸索，最終用同一PCR反應(yīng)參數(shù)和反應(yīng)條件對(duì)這兩種病原達(dá)到擴(kuò)增的目的。由于兩種細(xì)菌擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物大小分別為854bp和1528bp，從而能夠很好地區(qū)別。由于PCR方法具有準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好、易于推廣等特點(diǎn)，該方法對(duì)于臨床檢驗(yàn)及推廣應(yīng)用具有潛在價(jià)值。

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[收稿日期]2010-09-07 [修回日期]2010-12-10

編輯/李陽(yáng)利