5種海洋微藻多糖體外免疫調(diào)節(jié)活性的篩選

周妍，王凌，孫利芹，王長(zhǎng)海

（煙臺(tái)大學(xué)海洋學(xué)院，山東 煙臺(tái) 264005）

5種海洋微藻多糖體外免疫調(diào)節(jié)活性的篩選

周妍，王凌，孫利芹，王長(zhǎng)海

（煙臺(tái)大學(xué)海洋學(xué)院，山東 煙臺(tái) 264005）

目的：研究5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠體外免疫細(xì)胞功能的影響，篩選出免疫調(diào)節(jié)活性強(qiáng)的微藻藻株。方法：考察5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖，腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖、吞噬中性紅、釋放NO能力的影響。結(jié)果：5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠免疫細(xì)胞具有不同的刺激能力，其中，紫球藻多糖可極顯著增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)巨噬細(xì)胞合成NO，促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞及腹腔巨噬細(xì)胞的增殖。證明紫球藻多糖具有增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫功能的作用。

微藻多糖；脾淋巴細(xì)胞；腹腔巨噬細(xì)胞；免疫調(diào)節(jié)；活性；

海洋微藻是海洋生態(tài)系統(tǒng)中最主要的初級(jí)生產(chǎn)者，也是海洋生物資源的重要組成部分。海洋微藻多糖是由多個(gè)相同或不同的單糖基通過(guò)糖苷鍵相連形成的高分子碳水化合物。作為一種廣泛存在于微藻體內(nèi)的天然大分子物質(zhì)，海洋微藻多糖除了具有傳統(tǒng)的工業(yè)價(jià)值外，近年來(lái)的研究表明它們還具有多種生物活性及藥用功能，如增強(qiáng)機(jī)體免疫活性、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、抗輻射等作用；大量研究表明海藻多糖是通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能發(fā)揮這些作用的。海藻多糖可以通過(guò)促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖與分化、刺激巨噬細(xì)胞的吞噬功能、促進(jìn)細(xì)胞因子和抗體的產(chǎn)生等途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)[1-3]。本文采用小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖以及腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖、吞噬中性紅、釋放NO的能力為活性篩選指標(biāo)，研究了5種海洋微藻多糖的免疫調(diào)節(jié)活性，旨在比較它們免疫增強(qiáng)作用的差異，篩選出免疫調(diào)節(jié)活性強(qiáng)的微藻，為研制新型免疫增強(qiáng)劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

紫球藻 (Porphyridium creuntum)、鹽藻 (Dunaliella peircei)、等鞭金藻3011 (Isochrysis galbana 3011)、塔胞藻 (Pyramimonas sp.)、綠色巴甫藻 (Pavlova viridi)，原種均購(gòu)于中國(guó)海洋大學(xué)海洋微藻種質(zhì)庫(kù)，后由煙臺(tái)大學(xué)海洋生化研究所純化并保存；小鼠巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞株RAW264.7 (ATCC TIB-71) 由上海細(xì)胞研究所提供；清潔級(jí)昆明種小鼠，雌雄不限，體重18 ～ 22 g，購(gòu)自山東綠葉制藥有限公司（許可證號(hào)：SYXK（魯）20030020）。

刀豆蛋白 A (ConA)、脂多糖 （LPS）、三羥甲基氨基甲烷 (Tris)、噻唑藍(lán) (MTT) 和十二烷基磺酸鈉(SDS) 均為Sigma公司生產(chǎn)；RPMI-1640培養(yǎng)基為Gibco公司生產(chǎn)；新生小牛血清為杭州四季青生物工程材料有限公司生產(chǎn)。Synergy HT型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀為美國(guó)Bio-TEK公司生產(chǎn)；TE2000U熒光倒置顯微鏡為上海精密儀器儀表有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 微藻的培養(yǎng) 5種海洋微藻的培養(yǎng)在自制15 L平板式光生物反應(yīng)器中進(jìn)行，在海水培養(yǎng)液中加入各種營(yíng)養(yǎng)鹽，其加入量參見文獻(xiàn)[4]，取生長(zhǎng)旺盛、顏色正常的微藻進(jìn)行接種，接種量為培養(yǎng)液的20%?？刂茰囟葹?(23 ± 1) ℃，通氣量為2.5 L/min，光強(qiáng)為50 μmol/m-2·s-1，連續(xù)光照，培養(yǎng)到穩(wěn)定期離心收集藻泥。

1.2.2 紫球藻胞外多糖制備 將收集的紫球藻藻液離心，取上清液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，加入3倍體積的乙醇沉淀，過(guò)濾、透析、冷凍干燥得粗多糖PEP。

1.2.3 胞內(nèi)多糖制備 將收集的藻液離心，獲得新鮮的藻泥；加入5倍體積的去離子水，置于冰箱 (-4 ℃)中冷凍，然后取出融化。如此反復(fù)3次提取水溶物；將凍融后的溶液超聲破碎，離心10 min，棄殘?jiān)∩锨逡?；將上清液在水浴中加熱，濃縮至原體積的 1/3，加入體積分?jǐn)?shù)為 3%的三氯乙酸沉淀蛋白，離心(12 000 r/min) 10 min，取上清液；加入5倍體積的乙醇溶液(體積分?jǐn)?shù)為95%)，離心取沉淀洗滌、透析、冷凍干燥得白色粉末為粗多糖[5]。免疫測(cè)定前，精密稱取紫球藻多糖PEP、鹽藻多糖PDS、等鞭金藻多糖IGP、塔胞藻多糖PSP、綠色巴甫藻多糖PVD各4 mg，溶于20 mL的RPMI-1640培養(yǎng)基中，得濃度為200 μg/mL的微藻多糖溶液，用直徑為0.22 μm的微孔濾膜過(guò)濾除菌備用。使用時(shí)依次倍比稀釋可得濃度為 100，50，25，12.5 μg/mL 的溶液。

1.2.4 小鼠單核巨噬細(xì)胞 RAW264.7釋放 NO能力的檢測(cè) 取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的小鼠單核－巨噬細(xì)胞RAW264.7，胰酶消化收集細(xì)胞，用含10% 胎牛血清的培養(yǎng)液將其制備成巨噬細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1 × 106個(gè)/mL，于96孔板接種100 μL/孔，置37 °C，5% CO2培養(yǎng)24 h。加入用培養(yǎng)液稀釋的不同濃度的微藻多糖100 μL/孔，并以100 μL LPS（2 μg/mL）、培養(yǎng)液作陽(yáng)性和空白對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，從每個(gè)孔取50 μL培養(yǎng)上清液到一個(gè)新的96孔板中，加入等量的Griess試劑，室溫反應(yīng)10 min，半小時(shí)之內(nèi)在520 ～ 550 nm之間 (540 nm) 測(cè)定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算NO的含量[6]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

1.2.5 RAW264.7吞噬中性紅實(shí)驗(yàn) 制備細(xì)胞濃度為1 × 106個(gè)/mL的巨噬細(xì)胞懸液，加入96 孔板，100 μL/孔，如1.2.4加藥，培養(yǎng)22 h后，每孔加入0.1%中性紅生理鹽水液100 μL，繼續(xù)培養(yǎng)20 min，傾去上清，溫PBS洗3遍，每孔加入細(xì)胞溶解液（為體積胞分?jǐn)?shù)50%的乙酸和體積分?jǐn)?shù)50%的無(wú)水乙醇）0.2 mL，室溫下靜置2 ～ 3 h，待細(xì)胞溶解后，即在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)540 nm處的吸光度[7]。

1.2.6 RAW264.7增殖能力的測(cè)定 制備細(xì)胞濃度為 5×105個(gè)/mL的巨噬細(xì)胞懸液，于 96孔板接種100 μL/孔，如1.2.4加藥，培養(yǎng)24 h后，SRB法檢測(cè)[8,9]570 nm處吸光值。

1.2.7 脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 無(wú)菌取脾，制備小鼠脾淋巴細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為 (8 ～ 10) × 106個(gè)/mL，于96孔板接種100 μL/孔，再分別加入培養(yǎng)液（空白對(duì)照）、10 μg/mL ConA（陽(yáng)性對(duì)照）及不同濃度的微藻多糖溶液各100 μL/孔，置37 °C，5% CO2培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h，用MTT法[8-9]測(cè)定酶標(biāo)儀在570 nm的吸光值。淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)SI=供試樣品組吸光值/空白對(duì)照組吸光值。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。t檢驗(yàn)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包完成，以P ＜ 0.05表示差異顯著；P ＜ 0.01表示差異極其顯著。

2 結(jié)果與討論

2.1 對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO的影響

5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO的影響結(jié)果如表1所示。結(jié)果顯示，紫球藻多糖 (PEP)和塔胞藻多糖 (PSP) 均可顯著地促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO的能力，在12.5 ～ 200 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，與空白對(duì)照組相比有極顯著差異 (P ＜ 0.01)。隨濃度增大，其促進(jìn)作用逐漸增強(qiáng)，至200 μg/mL時(shí)釋放NO的作用達(dá)到最大值。低濃度范圍內(nèi) (12.5 ～ 25 μg/mL) 鹽藻多糖 (PDS) 促NO釋放的作用與空白對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異 (P ＞ 0.05)，隨著濃度的升高，釋放NO的能力增強(qiáng)，至200 μg/mL時(shí)可極顯著地促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO，其活性呈一定的劑量的依賴性。12.5 ～ 100 μg/mL范圍內(nèi)，等鞭金藻多糖 (IGP) 與空白對(duì)照組基本無(wú)促進(jìn)NO釋放的能力 (P ＞ 0.05)，而高濃度200 μg/mL時(shí)表示出極顯著促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放NO的活性。而綠色巴甫藻多糖 (PVD) 促NO釋放的活性最大值出現(xiàn)在低劑量組12.5 μg/mL，濃度增大，各劑量組活性之間無(wú)顯著性差異 (P ＞ 0.05)。

表1 5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO的影響（x±s, n=9)Tab. 1 Effects of polysaccharides from five micro-algae on NO production（±s, n=9)

表1 5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO的影響（x±s, n=9)Tab. 1 Effects of polysaccharides from five micro-algae on NO production（±s, n=9)

注：與空白對(duì)照相比，*P＜0.05, **P＜0.01。下同。

組別Group 200 μg?mL-1 100 μg?mL-1 50 μg?mL-1 25 μg?mL-1 12.5 μg?mL-1 PEP 19.721 ± 1.109** 14.891 ± 2.168** 11.558 ± 1.134** 7.884 ± 0.918** 7.204 ± 0.667**NO/μmol?mL-1 PDS 16.932 ± 1.548** 6.932 ± 1.273* 5.912 ± 1.018* 4.211 ± 0.419 4.415 ± 1.388 IGP 12.102 ± 2.020** 5.027 ± 0.751 4.959 ± 0.928 4.823 ± 1.109 4.1436 ± 0.333 PSP 10.401 ± 0.976** 10.333 ± 2.175* 9.585 ± 0.673** 8.633 ± 1.424** 6.184 ± 0.601**PVD 7.272 ± 1.071** 8.156 ± 0.751** 9.109 ± 2.410* 9.381 ± 0.855** 12.510 ± 1.364**Control 3.598 ± 0.509 LPS 8.905 ± 0.385**

2.2 對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力的影響

5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的影響見表2。在12.5 ～ 100 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，隨濃度增大，紫球藻多糖 (PEP) 和等鞭金藻多糖 (IGP) 刺激小鼠巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力不斷增強(qiáng)，至100 μg/mL達(dá)到最大值，濃度繼續(xù)增大，其活性反而下降。鹽藻多糖 (PDS) 和塔胞藻多糖 (PSP) 巨噬細(xì)胞的吞噬活性呈現(xiàn)同樣的趨勢(shì)，不同的是在50 μg/mL時(shí)活性即達(dá)到最大值。綠色巴甫藻多糖 (PVD) 在低濃度范圍 (12.5 ～ 50 μg/mL) 內(nèi)可極顯著刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅 (P ＜ 0.01)，而在高濃度范圍內(nèi) (100 ～ 200 μg/mL) 對(duì)其吞噬能力呈現(xiàn)顯著的抑制作用 (P ＜ 0.01)。

表2 5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬中性紅活性的影響（x± s, n=9)Tab. 2 Effects of polysaccharides from five micro-algae on neutral red uptake of mouse macrophage（± s, n=9)

表2 5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬中性紅活性的影響（x± s, n=9)Tab. 2 Effects of polysaccharides from five micro-algae on neutral red uptake of mouse macrophage（± s, n=9)

組別Group 200 μg?mL-1 100 μg?mL-1 50 μg?mL-1 25 μg?mL-1 12.5 μg?mL-1 PEP 0.949 ± 0.038** 1.580 ± 0.013** 1.454 ± 0.033** 1.258 ± 0.028** 1.036 ± 0.0464**OD540 PDS 0.857 ± 0.042* 1.196 ± 0.007** 1.275 ± 0.007** 1.205 ± 0.018** 1.016 ± 0.061**IGP 0.755 ± 0.023 1.172 ± 0.040** 1.196 ± 0.007** 0.964 ± 0.008** 0.894 ± 0.079 PSP 0.917 ± 0.085* 1.009 ± 0.012** 1.612 ± 0.012** 1.537 ± 0.011** 1.517 ± 0.008**PVD 0.623 ± 0.094** 0.693 ± 0.080** 1.297 ± 0.046** 1.638 ± 0.036** 1.329 ± 0.015**Control 0.756 ± 0.007 LPS 1.168 ± 0.0129**

2.3 對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞增殖的影響

5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞增殖的影響結(jié)果如表3所示。100 μg/mL時(shí)，紫球藻多糖 (PEP)、塔胞藻多糖 (PSP) 和鹽藻多糖 (PDS) 的活性都達(dá)到最大值，均可極顯著地促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)增殖的能力(P ＜ 0.01)。等鞭金藻多糖 (IGP) 的促巨噬細(xì)胞增殖活性隨濃度增大呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢(shì)，在50 μg/mL時(shí)達(dá)到最大值。綠色巴甫藻多糖 (PVD) 低濃度時(shí)對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的增殖無(wú)顯著刺激作用 (P ＞ 0.05)，在高濃度200 μg/mL時(shí)可極顯著地促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的增殖 (P ＜ 0.01)。

表3 5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞增殖的影響（±s, n=9)Tab. 3 Effects of polysaccharides from five micro-algae on the proliferation of mouse peritoneal macrophage (±s, n=9).

表3 5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞增殖的影響（±s, n=9)Tab. 3 Effects of polysaccharides from five micro-algae on the proliferation of mouse peritoneal macrophage (±s, n=9).

OD570組別Group 200 μg?mL-1 100μg?mL-1 50μg?mL-1 25μg?mL-1 12.5 μg?mL-1 PEP 0.080 ± 0.003** 0.110 ± 0.001** 0.096 ± 0.006** 0.078 ± 0.002** 0.068 ± 0.004 PDS 0.066 ± 0.002 0.077 ± 0.002** 0.074 ± 0.005* 0.062 ± 0.004 0.061 ± 0.002 IGP 0.069 ± 0.004 0.089 ± 0.008** 0.120 ± 0.004** 0.093 ± 0.002** 0.094 ± 0.008**PSP 0.085 ± 0.003** 0.092 ± 0.007** 0.065 ± 0.002* 0.073 ± 0.004* 0.062 ± 0.001 PVD 0.090 ± 0.005** 0.070 ± 0.008 0.069 ± 0.003 0.062 ± 0.002 0.062 ± 0.000 Control 0.06 ± 0.002 LPS 0.072 ± 0.001**

2.4 對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

5種海洋微藻多糖對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響見表4。紫球藻多糖 (PEP) 可極顯著地刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖 (P ＜ 0.01)，并呈一定的劑量的依賴性，隨著濃度的升高，其增殖作用不斷增強(qiáng)。在12.5 ～50 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，隨濃度增大，等鞭金藻多糖 (IGP) 和綠色巴甫藻多糖 (PVD) 刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的能力不斷增強(qiáng)，至50 μg/mL達(dá)到最大值，濃度繼續(xù)增大，其活性反而下降。塔胞藻多糖 (PSP) 各個(gè)濃度組均可顯著或極顯著地促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用，且在12.5 ～ 100 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，隨濃度增大，作用不斷增強(qiáng)，在 100 μg/mL達(dá)到最大值。鹽藻多糖 (PDS) 對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖作用與其他 4種藻比，相對(duì)較低。

表4 五種海洋微藻多糖對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響 (x±s, n=9)Tab. 4 Effects of polysaccharides from five micro-algae on the spleen lymphopoiesis of mouse (x±s, n=9)

2.5 五種海洋微藻多糖各個(gè)指標(biāo)活性最大值的比較

分別以五種海洋微藻多糖四個(gè)指標(biāo)的活性最大值作圖，由圖1 (a) 和 (b) 所示，紫球藻多糖 (PEP) 的活性相對(duì)都較高；鹽藻多糖 (PDS) 除促巨噬細(xì)胞釋放 NO活性較高外，其余三個(gè)指標(biāo)相對(duì)于其它幾種藻活性較低；等鞭金藻多糖 (IGP) 除促巨噬細(xì)胞增殖的活性較強(qiáng)外，另外三個(gè)指標(biāo)活性相對(duì)較低；塔胞藻多糖 (PSP)、綠色巴甫藻多糖 (PVD) 的活性位于五種微藻多糖的中間水平。不同微藻的多糖，對(duì)同一免疫指標(biāo)的最佳反應(yīng)濃度不同：在巨噬細(xì)胞促進(jìn)NO的釋放試驗(yàn)中，除綠色巴甫藻多糖 (PVD) 活性最大值出現(xiàn)在低濃度 (12.5 μg/mL) 組，其它多糖均在最高濃度組 (100 μg/mL) 時(shí)出現(xiàn)最大值；在巨噬細(xì)胞吞噬中性紅試驗(yàn)中，紫球藻多糖 (PEP) 活性最大值出現(xiàn)在100 μg/mL，綠色巴甫藻多糖 (PVD) 出現(xiàn)在25 μg/mL，其余3種均出現(xiàn)在50 μg/mL；而在巨噬細(xì)胞增殖試驗(yàn)中，綠色巴甫藻多糖 (PVD) 活性最大值出現(xiàn)在高濃度 (200 μg/mL) 組，等鞭金藻多糖 (IGP) 出現(xiàn)在50 μg/mL，其余3種均出現(xiàn)在100 μg/mL；在促淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)中，紫球藻多糖 (PEP) 活性最大值出現(xiàn)在200 μg/mL，塔胞藻多糖 (PSP) 出現(xiàn)在100 μg/mL，其余3種微藻多糖活性最大值均出現(xiàn)在50 μg/mL。

圖1 (a) 五種海藻多糖活性最大值的比較 (1)Fig.1 (a) Maximal value comparison of five polysaccharides from five micro-algae (1)

圖1 (b) 五種海藻多糖活性最大值的比較 (2)Fig.1 (b) Maximal value comparison of five polysaccharides from five micro-algae (2)

3 結(jié) 語(yǔ)

已發(fā)現(xiàn)的免疫活性多糖，激活巨噬細(xì)胞是其最重要的作用機(jī)制之一[10]。多糖對(duì)巨噬細(xì)胞的激活作用可通過(guò)多種途徑實(shí)現(xiàn)：促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖，提高其對(duì)腫瘤細(xì)胞或病原微生物的毒性；提高吞噬活性；增加NO和ROS產(chǎn)量；誘導(dǎo)或調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和趨化因子的分泌等。脾臟是機(jī)體內(nèi)重要的免疫器官，是體外試驗(yàn)中淋巴細(xì)胞的重要來(lái)源。測(cè)定淋巴細(xì)胞體外增殖反應(yīng)是檢測(cè)淋巴細(xì)胞功能的常用方法[11,12]。本研究中 5種海洋微藻多糖可不同程度地激活巨噬細(xì)胞或促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，從而達(dá)到提高機(jī)體免疫功能的目的，其中，紫球藻多糖活性最強(qiáng)。

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn)，不同的海洋微藻多糖對(duì)同一免疫指標(biāo)的影響程度有較大差別（作用的強(qiáng)弱不同），或是通過(guò)對(duì)不同的免疫細(xì)胞活性進(jìn)行調(diào)節(jié)從而增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能（作用的靶細(xì)胞不同），例如，紫球藻能極顯著刺激淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，而鹽藻多糖則不能，這可能是其免疫增強(qiáng)作用的機(jī)制不同造成的，因此，還要結(jié)合其他的實(shí)驗(yàn)才能給這些多糖的免疫增強(qiáng)作用做出準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)。

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Immunomodulation activities of polysaccharides in vitro from five micro-algae

ZHOU Yan, WANG Ling, SUN Li-qin, WANG Chang-hai

(Marine School of Yantai University, Yantai 264005, China)

To study the effects of polysaccharides from five micro-algae on immunocell functions of mice in vitro, and screen out bioactive marine micro-alga. The immune stimulating activities of polysaccharides from five micro-algae toward mice cells，including stimulating spleen lymphocyte proliferation and macrophage proliferation, enhancing phagocytic activity of neutral red, increasing nitro oxide (NO) production were tested. The results showed that the polysaccharides from these five micro-algae had stimulating activities on cells mediated immunity in mice. The Porphyridium creuntum polysaccharides had the effect of enhancing phagocytic activity of neutral red, increasing nitro oxide (NO) production, and stimulating spleen lymphocyte proliferation and macrophage proliferation. It proved that Porphyridium creuntum polysaccharides had the effect of enhancing the immunocompence of the cells in mice.

Polysaccharides from micro-algae; splenic lymphocyte; peritoneal macrophage; immunomodulation;activities

A

1001-6932(2010)02-0194-05

2009-04-01；

2009-08-05

山東省自然科學(xué)基金（Y2007D59）；煙臺(tái)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金(080605)；煙臺(tái)市科技攻關(guān)項(xiàng)目（2009219）

周妍，女，(1985－)，山東東營(yíng)人，碩士研究生，從事海洋活性物質(zhì)方面研究

王長(zhǎng)海，教授，博士生導(dǎo)師，電子郵箱：chwang2001@sina.com