防哮顆粒對哮喘緩解期模型大鼠氣道炎性損傷的預(yù)防作用

邢向暉, 陳魯, 宋惠霄

支氣管哮喘是由多種炎性細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils,EOS)和T淋巴細(xì)胞參與,并有50多種炎癥介質(zhì)和25種以上的細(xì)胞因子相互作用的一種氣道慢性炎癥。氣道炎癥是哮喘患兒氣道可逆性阻塞和氣道高反應(yīng)性的重要決定因素。而血清白細(xì)胞介素4(interleukin,IL- 4)、血液中EOS和IgE在哮喘發(fā)病過程中起重要作用。為探討中醫(yī)藥治療哮喘緩解期的機制,筆者觀察了防哮顆粒對哮喘緩解期模型大鼠血清IL- 4、EOS和IgE的影響,以期從實驗方面對兒童哮喘緩解期的防治方藥進(jìn)行系統(tǒng)觀察與探討,尋求兒童哮喘緩解期的有效防治藥物。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選擇健康Wistar大鼠40只,體質(zhì)量(200±10)g,雌雄各半,由山東大學(xué)實驗動物中心提供,符合一級實驗動物標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 試劑與藥品 (1)大鼠IL 4、IgE ELISA試劑盒,購于晶美生物工程(北京)有限公司;(2)卵白蛋白粉劑,購于濟(jì)南科瑞生物科技有限公司(Sigma公司分裝,每瓶10 g);(3)酮替芬,購于江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司(每片1 mg,批號:20050521);(4)固本咳喘片,購于臺州南峰藥業(yè)有限公司(每片0.4 g,批號:060305);(5)防哮顆粒,由山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥劑教研室按正交試驗法篩選工藝,以最佳流程制備;組成 :黃芪、白術(shù)、防風(fēng)、陳皮、清半夏、熟地黃、仙靈脾、黃芩、蛤蚧、五味子、丹參;生藥購于山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房;大鼠灌胃藥以其制成濃縮液,每毫升含生藥約2 g;(7)其他:生理鹽水、0.4%戊巴比妥鈉。

1.3 實驗儀器 (1)402型超聲霧化器(上海四菱醫(yī)療器械廠);(2)HW1型電熱恒溫水箱(北京醫(yī)療設(shè)備廠);(3)B80型自動平衡離心機(白洋離心機廠);(4)JA2003型電子稱(上海恒平科學(xué)儀器有限公司);(5)Stat Fax- 2100型酶標(biāo)儀(美國AWARENESS公司)。

1.4 藥物配制 (1)固本咳喘片研磨成末,用生理鹽水配成0.02 g/L;(2)酮替芬研磨成末,用生理鹽水配成0.02 g/L;(3)防哮顆粒濃縮液2 g/mL。

1.5 實驗方法 將40只大鼠按隨機數(shù)字表法分成5組,每組8只,雌雄各半,5組分別為空白對照組、模型對照組、中藥治療組、中藥對照組、西藥對照組,常規(guī)飼養(yǎng)1周后致敏。致敏用抗原液由卵白蛋白加生理鹽水配成10%卵白蛋白溶液。除空白對照組外,其余各組大鼠常規(guī)皮膚消毒后腹腔注射10%卵白蛋白生理鹽水1 mL致敏,常規(guī)飼養(yǎng)1周后放入密閉的動物造模霧室內(nèi),用卵白蛋白與生理鹽水配成1%的液體,加入超聲霧化器霧化進(jìn)行大鼠哮喘誘發(fā)實驗,記錄大鼠喘息時的癥狀、體征(大鼠出現(xiàn)躁動不安、呼吸加速、腹部內(nèi)凹等呼吸困難表現(xiàn)說明誘發(fā)哮喘成功);每日誘發(fā)哮喘30 min,連續(xù)誘發(fā)14 d。誘發(fā)實驗結(jié)束后常規(guī)飼養(yǎng)1周,開始灌胃。根據(jù)“常用動物與人體面積比值”計算大鼠灌胃藥量(D2=D1/R1×R2)[1]。中藥治療組大鼠防哮顆粒用量9 g/(kg·d),即0.9 mL;中藥對照組大鼠固本咳喘片用量0.09 mg/(kg·d),即0.9 mL;西藥對照組大鼠酮替芬用量0.09 mg/(kg·d),即0.9 mL;空白對照組、模型對照組大鼠以等量生理鹽水代替,即0.9 mL/(kg·d)。共灌胃30 d。灌胃結(jié)束后用0.4%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(10 mL/kg)大鼠,腹主動脈取血,以3 000 r/min離心5 min,取血清待用。

1.6 觀測指標(biāo) (1)IL- 4水平測定;(2)EOS計數(shù)測定;(3)IgE水平測定。采用ELISA法檢測血清中、IgE(具體步驟按試劑說明進(jìn)行操作)。EOS計數(shù)的檢測,麻醉、取血同上,取一滴血滴入肝素抗凝管,按常規(guī)方法進(jìn)行。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計處理,計量資料行t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 防哮顆粒對哮喘緩解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS計數(shù)的影響 見表1。

表1 各組哮喘緩解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS計數(shù)的比較(±s,n=8)

表1 各組哮喘緩解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS計數(shù)的比較(±s,n=8)

注:與空白對照組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型對照組比較,cP<0.05,dP<0.01;與中藥對照組比較,eP<0.05,fP<0.01;與西藥對照組比較,gP<0.01。

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3 討論

《景岳全書·喘促》云:“未發(fā)時以扶正氣為主,既發(fā)時以攻邪氣為主?！薄夺t(yī)宗必讀·喘》:“治實者攻之即效,無所難也。治虛者補之,未必即效,須悠久成功,其間轉(zhuǎn)折進(jìn)退,良非易也?！毕≡诜?源在脾,根在腎。緩解期肺、脾、腎三臟不足,兼有痰濁、瘀血。根據(jù)“急則治標(biāo),緩則治本”的治療原則,確立以補肺、腎為主,補脾為輔,佐以化痰、活血的治療大法。方中黃芪補肺氣、益衛(wèi)氣;蛤蚧補肺氣、納腎氣,兩藥合用外御衛(wèi)表,內(nèi)補肺腎共為君藥。五味子上斂肺,下滋腎,助芪蛤補肺益腎澀精,為臣藥。熟地、仙靈脾補腎陽、滋腎陰,以培先天;白術(shù)、陳皮、清半夏補益脾肺,理氣化痰,以滋后天,共為佐助之品。黃芩清伏痰蘊郁之熱,且防芪、蛤、靈、夏辛燥、溫?zé)崽^,為佐制之品。丹參活血行血,化瘀走里;防風(fēng)辛散透達(dá),助芪御表,共為使藥。諸藥合用,共有補腎固本,益氣固表,祛痰通絡(luò),虛實并治,標(biāo)本兼顧之效。筆者經(jīng)臨床應(yīng)用表明:防哮顆?？筛纳葡純旱捏w質(zhì)狀態(tài),提高機體免疫功能及肺功能,減少感冒次數(shù)及哮喘發(fā)作次數(shù),降低氣道反應(yīng)性,從而達(dá)到改善和防治本病的目的。

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