三種毒菌的化學(xué)成分研究

龔慶芳,張玉梅,譚寧華,陳作紅＊

1湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,長(zhǎng)沙 410081; 2中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,昆明 650204

三種毒菌的化學(xué)成分研究

龔慶芳1,張玉梅2,譚寧華2,陳作紅1＊

1湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,長(zhǎng)沙 410081;2中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,昆明 650204

本文對(duì)三種毒菌的化學(xué)成分進(jìn)行了研究。從光蓋傘 (Psilocybe spp)分離鑒定了 4個(gè)化合物,經(jīng)波譜分析鑒定為:(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯 (1)、β-胡蘿卜苷 (2)、(22E,24R)-5α,6α-環(huán)氧麥角甾-8, 22-二烯-3β,7α-二醇(3)、色氨酸 (4);從假褐云斑鵝膏 (Am anita pseudoporphyria)分離鑒定了 4個(gè)化合物:(22E, 24R)-3β-羥基-5α,8α-過(guò)氧化麥角甾-6,22-二烯 (5)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇 (6)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基棕櫚酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇(7)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇 (8);大青褶傘 (Chlorophyllum m olybdites)發(fā)酵菌絲體分離鑒定了 4個(gè)化合物:5、6、(22E,24R)-5α,6α-環(huán)氧麥角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇 (9)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-醇 (10)。除化合物 9外其它化合物均為首次從以上相應(yīng)毒菌中分離得到。

光蓋傘;假褐云斑鵝膏;大青褶傘;化學(xué)成分

自然界的有毒菌種類(lèi)繁多,全球估計(jì)達(dá)1000種以上,我國(guó)的毒蘑菇 (包括懷疑有毒的)多達(dá) 421種,隸屬于 39科 112屬[1]。我國(guó)對(duì)毒蘑菇的化學(xué)成分研究甚少,開(kāi)展毒菌的化學(xué)成分研究,對(duì)開(kāi)發(fā)新藥和保障食用菌安全具有深遠(yuǎn)的意義。本文對(duì)三種未見(jiàn)化學(xué)成分報(bào)道的毒菌:光蓋傘 (Psilocybe spp),假褐云斑鵝膏 (Am anita pseudoporphyria)和大青褶傘(Chlorophyllum m olybdites)發(fā)酵菌絲體的化學(xué)成分進(jìn)行了研究。從光蓋傘分離鑒定了 4個(gè)化合物,經(jīng)波譜分析鑒定為:(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯 (1)、β-胡蘿卜苷 (2)、(22E,24R)-5α,6α-環(huán)氧麥角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇 (3)、色氨酸(4)。從假褐云斑鵝膏分離鑒定了 4個(gè)化合物:(22E,24R)-3β-羥基-5α,8α-過(guò)氧化麥角甾-6, 22-二烯 (5)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β,5α, 6β-三醇 (6)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E, 8E,2′R)-2-N-(2′-羥基棕櫚酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇(7)、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E, 2′R)-2-N-(2′-羥基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇(8)。日本學(xué)者 Kazuko Yoshikawa曾對(duì)大青褶傘子實(shí)體的化學(xué)成分進(jìn)行了研究,得到了 2個(gè)新甾醇類(lèi)化合物 (22E,24R)-3α-ureido-ergosta-4,6,8(14), 22-tetraene和 (22E,24R)-5α,8α-epidioxyergosta-6, 9,22-triene-3-O-β-D-glucopyranoside[2],但其發(fā)酵菌絲體的化學(xué)成分未見(jiàn)報(bào)道。本文從大青褶傘發(fā)酵菌絲體分離鑒定了 4個(gè)甾醇類(lèi)化合物:5、6、(22E, 24R)-5α,6α-環(huán)氧麥角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇 (9)、(22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-醇 (10)。除化合物 9外其它化合物均為首次從以上相應(yīng)毒菌中分離得到。

圖 1 化合物 1～10的結(jié)構(gòu)Fig.1 Structures of compounds 1-10

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

VGAuto Spec-3000型質(zhì)譜儀(美國(guó)Beckman公司);Bruker AM-400和 DRX-500核磁共振儀 ((瑞士Bruker公司),T MS為內(nèi)標(biāo);柱色譜硅膠 (200～300目)和硅膠 H及薄層色譜硅膠 GF254(青島海洋化工廠);Sephadex LH-20(Pharmacia公司);Agilent 1100高效液相色譜儀 (美國(guó) Agilent公司)。所用試劑為工業(yè)級(jí),經(jīng)重蒸后使用。

光蓋傘子實(shí)體 2003年 6月采集于湖南望城,標(biāo)本鑒定人為湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院張平博士,標(biāo)本保存在湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院真菌室。

假褐云斑鵝膏 2005年采集于湖南郴州臨武,由湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院陳作紅鑒定,標(biāo)本保存在湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院真菌室。

大青褶傘發(fā)酵菌絲體由本研究室發(fā)酵。

1.2 提取和分離

光蓋傘子實(shí)體 450 g,相繼用 CHCl3-MeOH(1︰ 1)和MeOH分別提取 3次,合并提取液,真空濃縮得浸膏(30 g)。將總浸膏加水混懸,用乙酸乙酯、正丁醇相繼萃取,得到乙酸乙酯浸膏(18 g)、正丁醇浸膏(12 g)。將乙酸乙酯部分用 200～300目的硅膠柱層析分離,以石油醚-丙酮進(jìn)行梯度洗脫,經(jīng)薄層層析追蹤檢測(cè),分為A-F組分。組分A經(jīng)減壓硅膠柱層析 (硅膠 H),以石油醚-乙酸乙酯 (19︰ 1)溶劑洗脫,分離得到化合物 1(23 mg);組分 C經(jīng)硅膠柱層析,以石油醚-丙酮(6︰ 1)溶劑洗脫,分離得到化合物 3(15 mg);組分D經(jīng)硅膠柱層析,以氯仿-甲醇(9︰ 1)溶劑洗脫,分離得到化合物 2(30 mg)。正丁醇部分經(jīng)反相 C-18柱層析,以甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫,分離得到化合物 4(120 mg)。

假褐云斑鵝膏 300 g相繼用MeOH和MeOHH2O(1︰ 1)分別提取 3次,得總浸膏 (45 g)。按照與光蓋傘相類(lèi)似的分離純化方法,經(jīng)硅膠、凝膠以及HPLC等柱層析,分離得化合物 5(320 mg)、6(210 mg)、7(10 mg)、8(8 mg)。

大青褶傘發(fā)酵菌絲體 250 g(由本研究室發(fā)酵)的提取方法和分離方法同光蓋傘的子實(shí)體,得乙酸乙酯部分 (20 g)。按照與光蓋傘相類(lèi)似的分離純化方法,經(jīng)反復(fù)使用硅膠、凝膠等柱層析方法,得到化合物 5(110 mg)、6(85 mg)、9(10 mg)、10(45 mg)。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1 C46H80O2,無(wú)色油狀,易溶于氯仿。EI-MSm/z:664[M]+,382[M-C18H36O2];1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:4.73(1H,m,H-7),0.55(3H, s,C-18),0.81(3H,s,C-19),1.04(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),5.26～5.17(2H,overlapped,m,H-22, 23),0.86(3H,d,J=7.4 Hz,H-26),0.90(3H,d,J =7.4 Hz,H-27),0.94(3H,d,J=6.6 Hz,H-28), 0.84(3H,s,C-18′);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ: 36.8(t,C-1),33.8(t,C-2),76.2(d,C-3),32.0(t, C-4),40.5(d,C-5),29.5(t,C-6),117.3(d,C-7), 139.5(s,C-8),49.3(d,C-9),32.5(s,C-10),21.8 (t,C-11),39.8(t,C-12),43.8(s,C-13),55.0(d,C-14),22.7(t,C-15),27.5(t,C-16),55.9(d,C-17), 12.1(q,C-18),13.0(q,C-19),40.1(d,C-20),21.1 (q,C-21),135.7(d,C-22),131.9(d,C-23),42.8 (d,C-24),34.8(d,C-25),19.6(q,C-26),19.9(q, C-27),17.6(q,C-28),173.5(s,C-1′),32.0(t,C-2′),25.1(t,C-3′),29.7～29.1(t,C-4′～17′),14.1 (q,C-18′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道一致,化合物鑒定為 (22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-十八烷酸酯。

化合物 2 C35H60O6,白色粉末,難溶于氯仿和甲醇。與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照,確定為β-胡蘿卜苷。

化合物 3 C28H44O3,無(wú)色結(jié)晶 (甲醇),易溶于氯仿,mp.172～173℃。EI-MSm/z:428[M]+,410 [M-H2O];1H NMR (400 MHz,CDCl3)δ:3.93 (3H,m,H-3),3.14(H,br s,H-6),4.39(H,br s, H-7),0.63(3H,s,C-18),1.27(3H,s,H-19),1.02 (3H,d,J=6.4 Hz,C-21),5.26～5.13(overlapped, H-22,23),0.84(3H,d,J=6.6 Hz,H-26),0.82 (3H,d,J=6.0 Hz,H-27),0.92(3H,d,J=5.8 Hz, H-28);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:30.8(t,C-1),29.1(t,C-2),68.5(d,C-3),38.9(t,C-4), 63.2(s,C-5),60.1(d,C-6),66.9(d,C-7),137.0 (s,C-8),126.4(s,C-9),37.8(s,C-10),23.0(t, C-11),36.1(t,C-12),41.8(s,C-13),51.1(d,C-14),22.8(t,C-15),30.8(t,C-16),54.3(d,C-17),11.5(q,C-18),23.6(q,C-19),40.5(d,C-20),20.9(q,C-21),135.4(d,C-22),132.1(d,C-23),42.8(d,C-24),33.1(d,C-25),19.6(q,C-26),19.6(q,C-27),17.6(q,C-28)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的一致,化合物鑒定為 (22E,24R)-5α,6α-環(huán)氧麥角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇。

化合物 4 C11H12N2O,白色結(jié)晶 (甲醇),易溶于水,mp.280～282℃。FAB+-MSm/z:205[M+ 1]+;1H NMR(500MHz,D2O)δ:7.14(H,s,H-2), 7.57(H,d,J=8.0 Hz,H-4),7.11(H,t,J=7.8 Hz,H-5),7.03(H,t,J=7.8 Hz,H-6),7.37(H,d,J =8.2 Hz,H-7),3.31(H,dd,J=15.4,4.7 Hz,Ha-10),3.13(H,dd,J=15.3,8.1 Hz,Hb-10),3.86 (H,m,H-11);13C NMR(100 MHz,D2O)δ:125.3 (d,C-2),107.8(s,C-3),118.8(d,C-4),119.8 (d,C-5),122.5(d,C-6),112.3(d,C-7),136.7 (s,C-8),127.0(s,C-9),26.8(t,C-10),55.4(d, C-11),175.0(C-12)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的一致,化合物鑒定為色氨酸。

化合物 5 C28H44O3,無(wú)色結(jié)晶 (甲醇),易溶于氯仿。與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照,確定為 (22E,24R)-3β-羥基-5α,8α-過(guò)氧化麥角甾-6,22-二烯。

化合物 6 C28H46O3,無(wú)色結(jié)晶 (甲醇),易溶于氯仿。與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照,確定為 (22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇。

化合物 7 C41H77NO9,無(wú)定形粉末,難溶于氯仿和甲醇。FAB-MSm/z:726[M-1]-。1H NMR(500 MHz,C5D5N)δ:4.73(2H,m,overlapped,H-2,3), 5.97(2H,m,overlapped,H-4,5),5.25(br.s,H-8), 4.56(m,H-2′),4.88(1H,d,J=7.7 Hz,H-1″), 1.62(3H,s,H-19);13C NMR(125 MHz,C5D5N)δ: 70.2(t,C-1),54.6(d,C-2),72.4(d,C-3),132.4 (d,C-4),132.0(d,C-5),33.1(t,C-6),32.2(t,C-7),124.2(d,C-8),135.9(s,C-9),40.1(t,C-10), 28.4(t,C-11),29.7～30.1(t,C-12～15),28.3(t, C-16),23.0(t,C-17),14.4(q,C-18),16.2(q,19-CH3),175.8(s,C-1′),72.6(d,C-2′),35.7(t,C-3′),29.7～30.1(t,C-4′～13′),28.3(t,C-14′), 23.0(t,C-15′),14.4(q,C-16′),105.7(d,C-1″), 75.1(d,C-2″),78.5(d,C-3″),71.6(d,C-4″),78.6 (d,C-5″),62.7(t,C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的一致,化合物鑒定為 1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基棕櫚酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇。

化合物 8 C43H81NO9,無(wú)定形粉末,難溶于氯仿和甲醇。FAB-MSm/z:754[M-1]-。13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:69.7(t,C-1),54.5(d,C-2),72.8 (d,C-3),134.6(d,C-4),131.1(d,C-5),33.8(t,C-6),33.1(t,C-7),124.8(d,C-8),136.7(s,C-9), 40.8(t,C-10),28.7(t,C-11),30.4～30.8(t,C-12～15),29.1(t,C-16),23.7(t,C-17),14.5(q,C-18),16.2(q,19-CH3),177.1(s,C-1′),73.0(d,C-2′),35.8(t,C-3′),30.4～30.8(t,C-4′～15′),29.1 (t,C-16′),23.7(t,C-17′),14.5(q,C-18′),104.6 (d,C-1″),74.9(d,C-2″),77.9(d,C-3″),71.5(d, C-4″),77.8(d,C-5″),62.7(t,C-6″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道的一致,化合物鑒定為 1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2′R)-2-N-(2′-羥基十八烷酰)-9-甲基-4,8-脫氫鞘氨醇。

化合物 9 C28H44O3,白色粉末,易溶于氯仿, mp.124～125℃。EI-MSm/z:410[M-H2O]+,377 [M-2H2O-Me]+;1H NMR (500 MHz,CDCl3)δ: 0.61(3H,s,H-18),1.17(3H,s,H-19),1.05(3H, d,J=6.4 Hz,H-21),0.87(3H,overlapped,H-26), 0.85(3H,overlaped,H-27),0.95(3H,d,J=6.7 Hz,H-28);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ:32.2(t, C-1),31.0(t,C-2),68.5(d,C-3),39.2(t,C-4), 65.6(s,C-5),62.3(d,C-6),63.9(d,C-7),125.1 (s,C-8),38.7(d,C-9),33.0(s,C-10),19.0(t,C-11),36.5(t,C-12),41.5(s,C-13),152.6(s,C-14),24.9(t,C-15),27.2(t,C-16),56.8(d,C-17),17.6(q,C-18),16.5(q,C-19),39.5(d,C-20),21.2(q,C-21),135.2(d,C-22),132.2(d,C-23),40.8(d,C-24),33.0(d,C-25),19.6(q,C-26),19.6(q,C-27),17.6(q,C-28)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道一致,故鑒定該化合物為 (22E,24R)-5α,6α-環(huán)氧麥角甾-8(14),22-二烯-3β,7α-二醇。

化合物 10 C28H46O,無(wú)色結(jié)晶 (甲醇),易溶于氯仿,mp.159～161℃。EI-MSm/z:398[M]+;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:3.36(1H,m,H-3),0.58 (3H,s,H-18),0.87(3H,s,H-19),0.83(3H,d,J= 8.4 Hz,H-21),5.22(2H,overlapped,H-22,23), 1.05(3H,d,J=6.5 Hz,H-26),0.95(3H,d,J= 6.5 Hz,H-27),0.87(3H,d,J=7.22 Hz,H-28);13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ:37.1(t,C-1),31.4(t, C-2),71.0(d,C-3),37.9(t,C-4),40.2(d,C-5), 29.6(t,C-6),117.4(d,C-7),139.0(s,C-8),49.4 (d,C-9),33.9(s,C-10),21.5(t,C-11),39.4(t, C-12),43.2(s,C-13),55.1(d,C-14),22.9(t,C-15),28.1(t,C-16),55.9(d,C-17),12.1(q,C-18),13.0(q,C-19),40.5(d,C-20),21.1(q,C-21),135.7(d,C-22),131.8(d,C-23),42.8(d,C-24),33.1(d,C-25),19.6(q,C-26),19.9(q,C-27),17.6(q,C-28)。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致,故鑒定該化合物為 (22E,24R)-麥角甾-7,22-二烯-3β-醇。

致謝:MS和NMR由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室分析測(cè)試中心測(cè)定。

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Chem ical Constituents of Three PoisonousM ushroom s

GONGQing-fang1,ZHANG Yu-mei2,TAN Ning-hua2,CHEN Zuo-hong1＊1College of L ife Science,Hunan Nor mal University,Changsha 410081,China;2State Key Laboratory of Phytochem istry and Plant Resources in W est China,Kunm ing Institute of Botany,Chinese Academ y of Sciences,Kunm ing 650204,China

Four known compoundswere isolated fromPsilocybespp,whichwere identified as(22E,24R)-octadecylergosta-7,22-dien-3β-ol(1),β-daucosterol(2),(22E,24R)-5α,6α-epoxyergosta-8,22-diene-3β,7α-diol(3),tryptophan (4).Four known compoundswere isolated fromAm anita pseudoporphyria,which were identified as(22E,24R)-5α,8αepidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(5),(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(6),(2S,3R,4E,8E)-1-(O-β-D-glucopyranosyl)-3-hydroxy-2-[(R)-2′-hydroxypa lmitoyl]amino-9-methyl-4,8-octadecadiene(7),(2S,3R,4E,8E)-1-(O-β-D-glucopyranosyl)-3-hydroxy-2-[(R)-2′-hydroxyoctadecanoyl]amino-9-methyl-4,8-octadecadiene(8).Four known compoundswere isolated from mycelium ofChlorophyllum molybdites,which were identified as 5,6,(22E,24R)-5α,6α-epoxyergosta-8(14),22-diene-3β,7α-diol(9),(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β-ol(10).This is the first time that compounds 1-8 and 10 were isolated from these titled mushrooms,respectively.

Psilocybespp;Am anita pseudoporphyria;Chlorophyllum m olybdites;chemical constituents

1001-6880(2010)02-0185-04

2009-02-04 接受日期:2009-03-18

＊通訊作者 Tel:86-871-5223800;E-mail:chengzh@hunnu.edu.cn

Q946.91;R284.1

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