蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血脂及脂代謝相關(guān)酶的影響

胡金鹿，陳偉平，卓瑪麗

（1.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所，浙江杭州310058；2.浙江大學(xué)城市學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江杭州310015）

蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血脂及脂代謝相關(guān)酶的影響

胡金鹿1，陳偉平2，*，卓瑪麗2

（1.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所，浙江杭州310058；2.浙江大學(xué)城市學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江杭州310015）

目的：研究蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血脂及脂代謝相關(guān)酶的影響。方法：SD大鼠60只，雄性，按體重并參考血脂水平隨機(jī)分為6組：正常對(duì)照組，高脂對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組（紫蘇籽油），預(yù)防低、中、高劑量組。適應(yīng)期后分別喂養(yǎng)對(duì)應(yīng)飼料，每?jī)芍軝z測(cè)血液中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TCH）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、卵磷脂膽固醇轉(zhuǎn)移酶（LCAT）、脂蛋白脂酶（LPL）、肝脂酶（HL）水平，第四周處死后，檢測(cè)肝中脂蛋白脂酶（LPL）、肝脂酶（HL）水平。結(jié)果：預(yù)防組的血脂（TG、TCH）、血脂蛋白（HDL、LDL）、LCAT及總酯酶水平與高脂對(duì)照組相比均具有顯著性差異（P＜0.05），并具有劑量依賴(lài)性，且相應(yīng)酶的變化早于血脂和血蛋白的變化。結(jié)論：蠶蛹油可以通過(guò)激活脂代謝相關(guān)酶，調(diào)整血清中血脂和脂蛋白的含量，從而達(dá)到預(yù)防高脂血癥的目的。

蠶蛹油，不飽和脂肪酸，脂代謝酶

高脂血癥的主要危害是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化，進(jìn)而導(dǎo)致眾多的相關(guān)疾病，其中最常見(jiàn)的一種致命性疾病就是冠心病。高脂血癥對(duì)身體的損害是隱匿、逐漸、進(jìn)行性和全身性的。它的直接損害是加速全身動(dòng)脈粥樣硬化，因?yàn)槿淼闹匾鞴俣家揽縿?dòng)脈供血、供氧，一旦動(dòng)脈被粥樣斑塊堵塞，就會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重后果。此外，高脂血癥也是增加高血壓、糖耐量異常、糖尿病發(fā)病率的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素。高脂血癥還可導(dǎo)致脂肪肝、肝硬化、膽石癥、胰腺炎、眼底出血、失明、周?chē)芗膊?、跛行、高尿酸血癥等。有些原發(fā)性和家族性高脂血癥患者還可出現(xiàn)腱狀、結(jié)節(jié)狀、掌平面及眼眶周?chē)S色瘤、青年角膜弓等［1］?，F(xiàn)代研究表明高脂膳食會(huì)引起肝臟總脂解酶、脂蛋白脂酶和肝脂酶活性的降低，造成代謝紊亂，引發(fā)高脂血癥［2］。LCAT，LPL，HL都是調(diào)節(jié)脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用。已有實(shí)驗(yàn)表明，蠶蛹油具有十分顯著的預(yù)防和治療非酒精性脂肪肝形成的效果［3］，但目前其機(jī)理并不明確，本實(shí)驗(yàn)研究蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血脂及脂代謝相關(guān)酶的影響，旨在探討蠶蛹油調(diào)節(jié)脂代謝的機(jī)理問(wèn)題。

表1 蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血脂及脂蛋白的影響（±s）

表1 蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血脂及脂蛋白的影響（±s）

注：統(tǒng)計(jì)分析：P＜0.05；a：與正常組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；b：與高脂組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；c：與陽(yáng)性組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；d：三個(gè)預(yù)防劑量組劑量依賴(lài)性比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表2、表3同。

組別 周數(shù) TG（mmol/L） TCH（mmol/L） HDL（mmol/L） LDL（mmol/L）正常對(duì)照組 2 1.73±0.30 1.71±0.17 0.529±0.081 0.502±0.067 4 1.69±0.22bc 2.18±0.38bc 0.513±0.070bc 0.504±0.058b高脂對(duì)照組 2 1.74±0.22 1.77±0.16 0.514±0.020 0.521±0.050 4 2.16±0.13ab 3.89±0.43ab 0.375±0.052a 0.568±0.048b預(yù)防低劑量組 2 1.62±0.26 1.69±0.13 0.508±0.074 0.501±0.064 4 4.68±0.55ac 10.08±0.88ac 0.327±0.073a 0.884±0.060ac陽(yáng)性對(duì)照組 2 1.75±0.31 1.68±0.13 0.518±0.055 0.500±0.049 4 2.67±0.12abcd 5.15±2.54abcd 0.349±0.059ad 0.859±0.061acd預(yù)防中劑量組 2 1.64±0.24 1.64±0.22 0.532±0.053 0.496±0.031 4 2.58±0.23abc 5.19±0.54abc 0.357±0.056a 0.765±0.088abc預(yù)防高劑量組 2 1.87±0.20 1.67±0.12 0.521±0.031 0.496±0.036 4 2.13±0.11ab 4.01±0.31ab 0.423±0.050ab 0.583±0.046b

1 材料和方法

1.1 材料與儀器

雄性SD大鼠（150±10g）、普通飼料 購(gòu)于浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；高脂飼料 膽固醇1%，蛋黃粉10%，豬油10%，普通飼料79%［4］；蠶蛹油 由作者實(shí)驗(yàn)室研制；陽(yáng)性對(duì)照物（紫蘇油軟膠囊） 購(gòu)于五臺(tái)山沙棘制品有限公司；TG、TCH、HDL、LDL、總酯酶測(cè)定試劑盒 購(gòu)于南京建成生物技術(shù)公司；FC測(cè)定試劑盒 購(gòu)于sigma公司。

FW135粉碎機(jī) 天津市泰斯特儀器公司；MEI-03L微波萃取儀 無(wú)錫普萊瑪儀器設(shè)備有限公司；RE-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 飼喂動(dòng)物及設(shè)計(jì) 取SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組，高脂對(duì)照組，陽(yáng)性對(duì)照組，預(yù)防高劑量組，預(yù)防中劑量組，預(yù)防低劑量組，每組10只，適應(yīng)期1周后，空白對(duì)照組仍喂食普通飼料，以3mL/kg水灌胃；模型對(duì)照組喂飼高脂飼料，以3mL/kg水灌胃；紫蘇對(duì)照組喂飼高脂飼料，以3mL/kg劑量紫蘇油灌胃；預(yù)防高、中、低劑量組喂飼高脂飼料，分別以1.5、3、4.5mL/kg劑量蠶蛹油灌胃。高脂喂食兩星期后，清晨空腹（隔夜忌食高脂），尾部采血約3mL，3000r/min離心15min，取血清進(jìn)行測(cè)定甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶、脂蛋白酯酶和肝酯酶的活性。高脂喂食四星期后，尾部采血約3mL，處死，取肝臟適量做勻漿，測(cè)定肝臟中總酯酶及LCAT含量，血液樣本部分的測(cè)定指標(biāo)同第二周。

1.2.2 血清和肝臟中TG、TCH、HDL、LDL、HP、LPL測(cè)定 均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.3 血清和肝臟中LCAT的測(cè)定 參照蔣憲成等的方法［5］：利用血清中原有卵磷脂與膽固醇作底物，保溫處理一段時(shí)間，由于LCAT作用，導(dǎo)致血清中膽固醇酯增加，游離膽固醇減少。利用膽固醇氧化酶處理血清，游離膽固醇發(fā)生氧化，同時(shí)產(chǎn)生H2O2，后者與4-氨基比林及苯酚在辣根過(guò)氧化酶作用下生成紅色醌亞胺，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定游離膽固醇（FC）含量，以FC的減少量（即膽固醇酯化量）表示LCAT活性大小。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS15.0進(jìn)行單因素方差分析，若具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），則采用LSD分析后檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；三個(gè)預(yù)防劑量組的比較用有序分組資料線性趨勢(shì)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 蠶蛹油對(duì)血脂及脂蛋白的影響

表1結(jié)果顯示，高脂喂食兩周后，與正常對(duì)照組相比，高脂對(duì)照組TG、TCH、HDL、LDL水平的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與陽(yáng)性對(duì)照組相對(duì)，各實(shí)驗(yàn)組TG、TCH、HDL、LDL水平的差異也均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三個(gè)預(yù)防劑量組之間各指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高脂喂食四周后，與正常對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組TG、TCH、HDL水平的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與陽(yáng)性對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組TG、TCH、HDL、LDL水平的差異也均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），三個(gè)預(yù)防劑量組之間各指標(biāo)差異比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 蠶蛹油對(duì)血清中LCAT、HL、LPL的影響

表2結(jié)果顯示，高脂喂食兩周后，與正常對(duì)照組相比，高脂對(duì)照組LCAT、HL、LPL水平的降低均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與高脂對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、預(yù)防高劑量和預(yù)防中劑量組的LCAT水平的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），三個(gè)預(yù)防劑量組比較時(shí)，LCAT、HL升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。四周后，與正常對(duì)照組相比，高脂對(duì)照組LCAT、HL、LPL水平的降低均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與高脂對(duì)照組相比，除LCAT的預(yù)防低劑量組、HL的預(yù)防低劑量組和預(yù)防中劑量組、LPL的陽(yáng)性對(duì)照組、預(yù)防低劑量組外，其它各實(shí)驗(yàn)組相應(yīng)指標(biāo)水平的升高均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），三個(gè)預(yù)防劑量組比較時(shí)，LCAT、HL、LPL升高均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 蠶蛹油對(duì)肝臟中HL、LPL的影響

表2 蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血清中LCAT、HL、LPL的影響（±s）

表2 蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠血清中LCAT、HL、LPL的影響（±s）

組別 周數(shù) LCAT（μmol/L） HL（μmol/L） LPL（μmol/L）正常對(duì)照組 2 1.73±0.37b 16.54±1.97bc 46.21±2.51b 4 1.78±0.33bc 16.26±2.14b 44.97±2.37b高脂對(duì)照組 2 1.16±0.12ac 10.99±1.48a 39.88±4.94a 4 1.36±0.22ab 15.69±1.59b 42.26±3.44b預(yù)防低劑量組 2 1.16±0.14acd 10.76±1.36acd 39.60±2.93a 4 0.95±0.11ac 8.40±1.06ac 22.00±2.17ac陽(yáng)性對(duì)照組 2 1.53±0.13b 13.09±1.67a 44.29±4.76 4 0.88±0.10acd 8.45±0.95acd 23.22±3.89acd預(yù)防中劑量組 2 1.54±0.05b 11.89±2.22a 39.38±4.97a 4 1.32±0.20ab 8.52±1.41ac 40.80±2.11ab預(yù)防高劑量組 2 1.74±0.25b 13.10±0.74a 38.95±4.72a 4 1.75±0.33bc 16.17±1.76b 45.57±2.94b

表3結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，高脂對(duì)照組中肝臟HL、LPL水平的降低均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與高脂對(duì)照組相比，除LPL預(yù)防低劑量組外，其它各劑量組HL、LPL水平的升高均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），三個(gè)預(yù)防劑量組比較時(shí)，HL、LPL水平的升高均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠肝臟中HL、LPL的影響（±s）

表3 蠶蛹油對(duì)高脂膳食大鼠肝臟中HL、LPL的影響（±s）

組別 HL（μmol/g） LPL（μmol/g）正常對(duì)照組 39.36±2.94b 53.98±3.74b高脂對(duì)照組 21.65±3.03ac 37.15±5.77ac陽(yáng)性對(duì)照組 35.93±2.98b 55.28±4.23b預(yù)防低劑量組 28.87±4.34abcd 39.32±3.45acd預(yù)防中劑量組 28.21±3.40abc 50.36±3.70b預(yù)防高劑量組 37.21±2.86b 55.53±5.12b

3 討論

隨著人類(lèi)生活水平的提高，人類(lèi)膳食由以植物性食物為主逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橐詣?dòng)物性食物為主，人們獲取豐富營(yíng)養(yǎng)的同時(shí)也引發(fā)了一系列營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩的問(wèn)題。由于高脂食物頻繁攝入而導(dǎo)致的高脂血癥等相關(guān)疾病已成為當(dāng)代重要疾病。據(jù)報(bào)道，我國(guó)人群近20年來(lái)血脂水平明顯異常，中年人群中高膽固醇血癥患病率已超過(guò)10%，近年來(lái)更是逼近15%；而血脂異常與動(dòng)脈粥樣硬化呈正相關(guān)，與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)疾病造成的死亡率達(dá)到35%～40%，是我國(guó)目前第一位死亡原因，冠心病發(fā)生率與死亡率隨血膽固醇水平增高而增加［6］。近年來(lái)的研究表明，富含α-亞麻酸的植物油在預(yù)防動(dòng)脈硬化發(fā)生方面起著重要的作用［7］，其主要是通過(guò)影響甘油三酯的水平，進(jìn)而調(diào)節(jié)血脂水平。蠶蛹油中含有豐富的不飽和脂肪酸，其含量在80%左右，其中 ω-3多不飽和脂肪酸（PUFA）的含量可以達(dá)到40%左右。而α-亞麻酸、二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）同屬ω-3PUFA家族［8］。而且，從古至今我國(guó)就是一個(gè)養(yǎng)蠶大國(guó)。建國(guó)以來(lái)，僅蠶絲產(chǎn)品就為我國(guó)累計(jì)創(chuàng)匯300億美元，蠶絲業(yè)是我國(guó)傳統(tǒng)的創(chuàng)匯支柱產(chǎn)業(yè)［9］。蠶蛹是繅絲工業(yè)的主要副產(chǎn)物，每生產(chǎn)1t生絲可得1t蠶蛹，據(jù)資料報(bào)道，我國(guó)近幾年生絲年產(chǎn)量約有53萬(wàn)t，同時(shí)相應(yīng)產(chǎn)生了53萬(wàn)t蠶蛹［10］。這是極其豐富而寶貴的資源，值得進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。蠶蛹油是在蠶蛹制作蠶蛹粉的過(guò)程中進(jìn)行分離提煉的，已有研究表明，蠶蛹油在食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)上的應(yīng)用價(jià)值都得到了一定的證實(shí)［11-13］，由此可見(jiàn)蠶蛹油的應(yīng)用不容忽視。

本實(shí)驗(yàn)主要研究蠶蛹油對(duì)脂代謝相關(guān)酶的影響，意在探索蠶蛹油調(diào)節(jié)脂代謝的作用機(jī)制。在血漿脂蛋白代謝過(guò)程中，有許多脂酶起著很重要的作用。主要包括脂蛋白脂酶（LPL）、肝臟甘油三酯酶（HTGL）、肝脂酶（HL）和卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）。LPL和HL可催化乳糜微粒（CM）和促進(jìn)極低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三酯水解。LCAT催化新生高密度脂蛋白（HDL）表面的游離膽固醇酯化，使HDL表面游離膽固醇酯化轉(zhuǎn)入核心部位，使體積小、圓盤(pán)狀的高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）逐漸轉(zhuǎn)化為體積更大的HDL-C，HDL就這樣轉(zhuǎn)運(yùn)消除酯化膽固醇［14］。以上說(shuō)明脂代謝酶的活性與血脂水平緊密相關(guān)，而且已有研究表明，LCAT、LPL、HL都是調(diào)節(jié)脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用［15］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，高脂喂食兩周后，TG、TCH、HDL、LDL水平均無(wú)明顯改變，而在酶水平上，LCAT、HL均有所改變；高脂喂食四周后，與高脂對(duì)照組相比，蠶蛹油能顯著降低高脂膳食大鼠血清中TG、TCH、LDL的含量，提高HDL、LCAT的含量，還能顯著提高高脂膳食性大鼠血清和肝臟中LPL、HL的水平，脂代謝酶的改變?cè)缬谘脱鞍椎母淖?，初步說(shuō)明了蠶蛹油調(diào)節(jié)TG、TCH、HDL和LDL的機(jī)制，即通過(guò)激活脂代謝酶LCAT、HL、LPL而達(dá)到降低TG、TCH、LDL，提高HDL水平的目的，也進(jìn)一步驗(yàn)證了脂代謝酶活性與血脂水平緊密相關(guān)。與陽(yáng)性（紫蘇）對(duì)照組相比，蠶蛹油組降低血脂的效果優(yōu)于紫蘇油組，而且蠶蛹油三個(gè)預(yù)防劑量組間相比較，高劑量組激活脂代謝酶，降低血脂和LDL、提高HDL效果優(yōu)于中、低劑量組，提示蠶蛹油預(yù)防高脂血癥效果有劑量依賴(lài)性。由此可見(jiàn)，蠶蛹油在高脂血癥的防治中有著較好的應(yīng)用前景，值得對(duì)其進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)利用。

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Effect of chrysalis oil on plasma lipids and lipid-metabolize-enzyme level of high-fat-diet rats

HU Jin-lu1，CHEN Wei-ping2，*，ZHUO Ma-li2
（1.Medicine College，Zhejiang University，Hangzhou 310058，China；2.Medicine and Lifescience College，Zhejiang University City College，Hangzhou 310015，China）

Objective：To observe the effect of the chrysalis oil on the plasma lipid and enzyme level in the high-fatdiet rats.Methods：A total of 60 male SD rats were equally randomized into 6 group by weight：normal control group，high-fat control group，positive control group，low，medium and high dose preventive group，and feeding them corresponded feedstuff.Then TG，TCH，HDL，LDL，LCAT，HL，LPL level in the blood were observed every two week.The rats were killed in the fourth week to observe LPL，HL level in the liver.Results：The plasma lipids（TG、TCH）and lipoprotein（HDL、LDL），LCAT，LPL and HL level of the rats in the preventive control groups were significantly difference to that in the high-fat-diet control group（P＜0.05），and also having dose dependence.The change of the enzyme level was earlier than the lipid and lipoprotein level.Conclusion：The schrysalis oil can regulate the plasma lipids and lipoprotein level in the blood by activated the correlated lipid-metabolizedenzyme，thereby to prevent the hyperlipidemia.

chrysalis oil；polyunsaturated fatty acids；lipid-metabolize-enzyme

TS225.2

A

1002-0306（2010）11-0343-04

2009-11-24 *通訊聯(lián)系人

胡金鹿（1983-），女，在讀碩士研究生，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)。

杭州市科技局科技創(chuàng)新項(xiàng)目（2006831H05）。