工藝控制對(duì)復(fù)方丹參片保護(hù)麻醉犬心肌梗死的影響△

黃琳，林青，肖曉麗，李楚源

（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515）

藥理研究

工藝控制對(duì)復(fù)方丹參片保護(hù)麻醉犬心肌梗死的影響△

黃琳，林青*，肖曉麗，李楚源

（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司，廣東 廣州 510515）

目的：控制工藝條件制備了有效成分含量不同的復(fù)方丹參片，觀察其對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死的保護(hù)作用。方法：采用麻醉犬冠脈結(jié)扎導(dǎo)致心肌梗死的方法造模，觀察給藥前后的影響。結(jié)果：復(fù)方丹參片工藝A組、工藝B組能降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗死麻醉犬的HR和心肌耗氧量，復(fù)方丹參片工藝B組能降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗死麻醉犬的DAP、MAP，抑制冠脈結(jié)扎所致的動(dòng)靜脈氧差增加。結(jié)論：工藝參數(shù)的調(diào)整影響復(fù)方丹參片有效成分的含量，有效成分達(dá)到一定量時(shí)，可明顯緩解心肌缺血癥狀。

復(fù)方丹參片；麻醉犬；心肌缺血

復(fù)方丹參片主要由丹參、三七、冰片3味藥組成。其中丹參為君藥，三七為臣藥，冰片為佐使藥，具有活血化瘀、理氣止痛的功能，用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見胸悶、心前區(qū)刺痛；冠心病心絞痛見上述證候者。本文通過建立麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌缺血的動(dòng)物模型，研究工藝相同、調(diào)整工藝參數(shù)制備的復(fù)方丹參片（有效成分含量有差異）抗心肌缺血的作用效果。

1 材料

1.1 藥物與試劑

丹參（Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae）批號(hào)0601002、三七粉（Radix et Rhizoma Notoginseng）批號(hào)C6C001、冰片（Borneolum Syntheticum）批號(hào)0604007，所有供試品藥粉由廣州白云山和記黃埔中藥有限公司提供。每克相當(dāng)于丹參原生藥0.95g及三七生藥0.3g。為實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一給藥劑量，稀釋為人用量4.25g·d－1，相當(dāng)于原生藥5.32g·d－1。復(fù)方丹參片工藝A組、B組、C組分別按以下工藝參數(shù)制備。

復(fù)方丹參片工藝A組：80～90℃提取、濃縮、干燥，加熱時(shí)間總計(jì)65h（72h以內(nèi)），含丹參酮ⅡA1.08mg·g－1、丹酚酸B21.25mg·g－1；復(fù)方丹參片工藝B組：70～80℃提取、濃縮、干燥，加熱時(shí)間總計(jì)30h（36h以內(nèi)），含丹參酮ⅡA1.76mg·g－1、丹酚酸B34.83mg·g－1；復(fù)方丹參片工藝C組：80～90℃下提取、濃縮、干燥，加熱時(shí)間總計(jì)80h，含丹參酮ⅡA0.84mg·g－1、丹酚酸B13.34mg·g－1。

1.2 動(dòng)物

雜種犬，體重7～10kg，雌雄兼用，均由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心收購(gòu)自市郊的雜種犬，實(shí)驗(yàn)前在該中心馴養(yǎng)，經(jīng)檢疫及驅(qū)蟲后，用于該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

1.3 儀器

RM-6000八道生理記錄儀（日本NIHON KOHDEN公司），DH140人工呼吸器（浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠），BT01-100型恒流泵（保定蘭格恒流泵有限公司），日立7020全自動(dòng)生化分析儀（蘇州日立電器有限公司）。

1.4 試驗(yàn)分組與劑量

取雜種犬25只，隨機(jī)分為5組，每組5只動(dòng)物，雌雄兼用。分別為假手術(shù)組（給予等容積蒸餾水），蒸餾水組（給予等容積蒸餾水），工藝A組（0.12g生藥·kg－1），工藝B組（0.12g生藥·kg－1），工藝C組（0.12g生藥·kg－1）。將各組動(dòng)物所用藥物溶于蒸餾水中，給藥容積為1mL·kg－1，經(jīng)十二指腸給藥。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

指標(biāo)表達(dá)：

X給藥后—給藥后觀測(cè)值，X給藥前—為給藥前觀測(cè)值。

心肌耗氧量（kPa·min－1）＝平均動(dòng)脈壓（MAP）×心率（HR）

2 方法與結(jié)果

2.1 方法［1-4］

試驗(yàn)犬由前肢小隱靜脈用3%戊巴比妥鈉（30mg·kg－1）麻醉后，背位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪去頸部、胸部和左后肢內(nèi)側(cè)的毛。將針狀電極插入犬四肢皮下，記錄心電圖（ECG）。分離氣管并插入氣管插管，分離左側(cè)股動(dòng)脈、股靜脈，分離股靜脈插入靜脈插管，緩慢恒速輸入蒸餾水（約1mL·min－1）；分離股動(dòng)脈插入動(dòng)脈插管（管內(nèi)充滿500U·mL－1的肝素蒸餾水），接壓力換能器（TP－400T），經(jīng)放大（AP-641G）測(cè)量動(dòng)脈收縮壓（SAP）、動(dòng)脈舒張壓（DAP）、MAP，定標(biāo)靈敏度為13.33kPa（100mmHg）·cm－1。聯(lián)接記錄儀的連線板直接由動(dòng)脈壓觸發(fā)心率記數(shù)儀（AT-601G）記錄HR。于左側(cè)第四、五肋間開胸，暴露心臟，并接人工呼吸機(jī)。打開心包膜，縫于胸壁，做成荷包搖籃。暴露右心耳，靜注肝素5～10mg·kg－1使肝素化，用心耳鉗夾住右心耳，作一荷包縫口，將縫線穿于一小段橡皮管內(nèi)，用小鋼絲將線勾入橡皮管，于荷包口中心剪一小口，迅速插入冠狀竇插管（內(nèi)徑4～5mm，管口為斜角，近管口處為圓形膨大，斜角面避免管口與竇壁緊貼，膨大部為使冠狀竇血不致外溢），將小橡皮管內(nèi)荷包縫線拉緊，靠小橡皮管頂住插管，以避免出血，迅速將插管準(zhǔn)確插入冠狀竇，結(jié)扎右心耳處荷包縫線，固定插管。該插管的遠(yuǎn)端連接一三通管以備取血。用0號(hào)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支中下1／3處，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。選擇梗塞區(qū)附近位置12個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn)縫置心外膜電圖電極，并在遠(yuǎn)離梗塞區(qū)選一對(duì)照點(diǎn)，用手持絕緣金屬點(diǎn)狀電極按標(biāo)測(cè)點(diǎn)順序進(jìn)行標(biāo)測(cè)，經(jīng)傳感器（JB-642G）、放大器（AB-621G），用八道生理記錄儀記錄心外膜電圖（EECG）（定標(biāo)：1mm＝1mV）。結(jié)扎15min后經(jīng)十二指腸給藥。直接記錄動(dòng)脈SAP、DAP、MAP、HR，并描記EECG及動(dòng)脈壓（BP）曲線。記錄結(jié)扎前、結(jié)扎15min和給藥后（30，45，60，90，120，150，180min）的EECG、SAP、DAP、MAP、HR。各組分別于給藥前和給藥60min后，左心室取血測(cè)動(dòng)脈血氧，冠狀竇處取血測(cè)冠狀竇血氧，兩者氧差反映心肌耗氧。

2.2 結(jié)果

見表1～5。

表1 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死SAP的影響（±s）

表1 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死SAP的影響（±s）

注：n＝5

30 45 60 90 120 150 180假手術(shù)組－18.27±2.07 18.27±1.67 18.06±1.69 18.33±1.74 18.41±1.89 17.88±1.86 17.72±1.57 17.93±1組別劑量／g·k`g－1給藥前給藥后時(shí)間／min.74變化率%－0.62±2.00－1.76±3.91－0.33±3.58 0.04±3.02－2.84±4.01－3.58±4.66－2.47±4.98蒸餾水組－18.11±3.05 18.43±3.39 18.57±3.41 18.22±3.05 18.35±3.26 18.09±3.47 17.93±3.28 17.50±2.80變化率%1.70±2.62 2.44±3.34 0.76±2.58 1.34±3.07－0.29±5.05－0.98±5.39－3.04±4.42工藝A組0.12 18.19±2.51 17.69±3.26 17.53±2.94 17.85±2.85 17.88±3.18 17.88±3.08 17.53±2.97 17.82±3.26變化率%－3.74±5.04－4.27±6.56－2.46±4.44－2.59±2.87－2.49±3.62－4.34±3.65－2.86±5.73工藝B組0.12 19.29±2.56 18.78±2.21 18.11±2.00 18.22±2.62 17.69±2.79 18.14±2.02 18.11±2.12 17.98±2.01變化率%－1.91±2.85－5.33±3.02－4.96±5.58－7.91±5.44－5.18±3.55－5.36±4.03－6.02±3.43工藝C組0.12 19.34±1.29 18.89±1.96 19.36±1.45 18.86±2.19 18.94±2.15 18.57±2.39 18.78±2.37 18.35±1.45變化率%0.07±6.14 2.83±5.90－0.02±8.85 0.25±5.63－1.79±7.59－0.69±6.47－2.63±4.29

表2 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死后DAP的影響（±s）

表2 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死后DAP的影響（±s）

注：（1）n＝5，（2）與蒸餾水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

30 45 60 90 120 150 180假手術(shù)組－13.19±2.52 13.17±3.06 13.22±2.62 13.11±3.00 13.17±3.28 13.30±2.86 12.60±2.32 13.14±2組別劑量／g·kg－1給藥前給藥后時(shí)間／min.80變化率%－1.35±6.07－0.32±5.67－1.61±5.85－1.60±5.96 0.04±6.58－4.50±8.90－1.08±7.36蒸餾水組－12.40±4.06 13.11±4.41 12.98±4.58 12.90±4.37 13.03±4.20 12.50±4.44 12.48±4.35 12.05±3.93變化率%8.12±9.82 6.37±5.65 6.16±8.65 7.71±8.50 2.35±7.26 2.29±7.50－0.12±13.49工藝A組0.12 13.35±3.49 13.11±3.54 13.25±3.26 13.17±3.54 13.17±3.27 12.85±4.19 12.95±3.29 12.90±3.53變化率%－4.86±7.05－3.15±8.89－4.17±9.33－3.88±8.05－8.00±9.68－5.43±9.46－6.32±6.68工藝B組0.12 14.15±1.56 12.87±1.90 13.81±1.53 13.46±1.56 14.02±1.43 14.07±1.79 13.86±1.59 13.19±2.14變化率%－10.77±4.75**－4.03±4.18*－6.45±4.58－2.42±5.53－2.18±7.89－3.64±5.73－8.74±4.15工藝C組0.12 14.28±1.07 14.10±1.81 13.91±1.16 13.41±2.27 13.75±2.02 13.65±2.09 13.46±2.34 12.90±1.30變化率%3.26±10.02 2.51±12.12－1.59±16.83 0.42±8.02－0.29±10.49－1.96±9.24－5.43±6.36

表3 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死平均動(dòng)脈壓（MAP）的影響（±s）

表3 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死平均動(dòng)脈壓（MAP）的影響（±s）

注：（1）n＝5，（2）與蒸餾水組比較，*P＜0.05

30 45 60 90 120 150 180假手術(shù)組－14.88±2.23 14.90±2.50 14.90±2.11 14.80±2.53 14.90±2.74 14.90±2.38 14.30±1.99 14.74±2組別劑量／g·kg－1給藥前給藥后時(shí)間／min.28變化率%－0.31±4.39 0.10±4.72－0.97±4.54－0.50±4.25－0.14±5.35－3.82±6.09－1.14±5.46蒸餾水組－14.30±3.66 14.89±4.03 14.84±4.10 14.67±3.88 14.81±3.84 14.36±4.08 14.29±3.94 13.87±3.52變化率%5.06±5.86 4.62±4.28 3.68±5.20 4.69±5.51 1.06±6.06 0.77±6.10－1.62±8.39工藝A組0.12 14.83±3.30 14.90±2.98 14.64±3.07 14.69±3.30 14.43±3.65 14.88±3.34 14.34±3.32 14.54±3.41變化率%－0.52±7.01－2.35±8.27－2.21±8.84－4.76±5.38－0.97±9.05－4.79±7.24－3.47±7.52工藝B組0.12 15.76±1.57 14.91±1.85 15.25±1.69 14.87±1.80 15.43±1.77 15.47±1.80 15.18±1.67 14.79±2.02變化率%－5.41±5.72*－3.21±4.79*－5.72±5.01*－2.14±4.81－1.79±6.83－3.66±5.13－6.34±5.02工藝C組0.12 15.96±1.08 15.68±1.80 15.68±1.13 15.34±2.27 15.45±1.98 15.33±2.22 15.12±2.13 14.72±1.29變化率%1.99±8.31 2.45±9.73－0.20±12.90 0.29±7.02－0.52±9.19－1.93±7.83－4.15±5.29

表4 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死心率（HR）的影響（±s）

表4 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死心率（HR）的影響（±s）

注：（1）n＝5，（2）與蒸餾水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

30 45 60 90 120 150 180假手術(shù)組－159.98±15.58 158.93±18.66 161.40±21.88 158.68±16.67 157.00±14.04 160.98±14.74 160.7組別劑量／g·kg－1給藥前給藥后時(shí)間／min 8±19.98 157.77±20.55變化率%0.75±4.40 2.13±3.31 0.65±2.88－0.32±1.57 2.22±3.36 1.82±2.49－0.12±3.03蒸餾水組－146.60±5.64 149.80±6.26 151.20±7.82 150.00±4.74 150.40±8.38 150.60±6.77 150.20±7.29 151.40±5.22變化率%－1.29±2.48－0.43±1.43－1.13±2.40－0.96±2.04－0.77±2.65－1.01±4.15－0.22±2.37工藝A組0.12 160.00±16.20 155.40±17.08 161.59±19.28 162.40±18.69 163.87±20.86 167.05±20.39 164.87±20.74 167.60±24.12變化率%－6.11±2.77*－2.47±2.77－1.94±2.61－1.14±3.85 0.88±5.51－0.53±3.61 1.00±5.93工藝B組0.12 152.03±24.35 142.20±23.21 146.80±22.04 146.80±22.77 151.93±25.50 147.71±21.38 146.98±21.63 150.01±23.05變化率%－6.40±1.85**－3.20±1.38*－3.24±2.53－0.05±3.12－2.51±4.01－3.05±1.80－1.14±2.09工藝C組0.12 134.72±10.90 136.92±10.82 140.34±11.20 136.62±11.97 141.27±13.85 139.64±13.47 138.02±12.18 140.04±12.67變化率%－0.38±2.86 2.09±2.56－0.64±3.83 2.73±5.801.57±5.88 0.38±4.07 1.90±5.63

表5 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死心肌耗氧量的影響（±s）

表5 復(fù)方丹參片對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗死心肌耗氧量的影響（±s）

注：（1）n＝5，（2）與蒸餾水組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

給藥后時(shí)間／min組別劑量／g·kg－1給藥前30 45 60 90 120 150 180假手術(shù)組－2 392.54±479.64 2 341.06±－1.19±7.48蒸餾水組－2 092.67±529.96 574.84變化率%0.35±3.89 2 381.34±562.37 2 417.65±552.71 2 367.76±590.00 2 346.60±522.69 2 407.76±509.02 2 305.43±465.58 2.24±6.04－0.36±4.49－0.86±3.25 1.95±3.16－2.06±6.63－1.82±8.77工藝A組0.12 2 373.51±353.64 2 097.31±534.13變化率%3.80±8.21 2 210.49±504.69 2 229.64±564.57 2 195.59±561.35 2 204.29±461.80 2 147.29±544.56 2 147.12±615.33 4.18±4.59 2.51±5.97 3.74±6.80 0.22±5.31－0.29±6.51－4.20±7.78工藝B組0.12 2 408.30±542.78 2 346.23±302.44變化率%－11.76±6.85*2 160.68±270.42 2 337.87±254.80 2 335.41±304.28 2 285.55±369.15 2 373.16±265.83 2 363.10±291.31－4.20±9.92－4.73±5.97－6.98±9.04－2.95±7.29－3.27±10.46－12.17±8.04工藝C組0.12 2 176.74±255.20 2 235.00±551.01變化率%－14.16±7.48**2 175.09±495.99 2 429.10±522.56 2 386.77±517.41 2 360.61±582.54 2 300.30±517.76 2 242.79±495.49－4.18±3.86*－5.80±4.37*－7.31±7.08－9.37±7.19－11.59±4.66 2 057.43±228.49變化率%1.63±9.09 2 146.40±307.68 2 196.22±192.14 2 099.43±395.30 2 191.54±423.28 2 146.81±428.67 2 087.89±374.89－2.45±5.38 4.61±10.55－0.56±16.12 3.30±12.49 1.32±14.12－1.49±9.84

復(fù)方丹參片工藝A組、工藝B組能降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗死麻醉犬的HR和心肌耗氧量，與蒸餾水組比較有明顯差異（P＜0.05，P＜0.01），復(fù)方丹參片工藝B組能降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗死麻醉犬DAP、MAP和心肌耗氧量，與蒸餾水組比較有明顯差異（P＜0.05，P＜0.01）。

3 討論

復(fù)方丹參片的有效成分主要分為水溶性和脂溶性兩部分，分別以丹酚酸B、丹參酮ⅡA為代表，均為對(duì)熱敏感的化合物。工藝A、B、C組所用復(fù)方丹參片為不同工藝參數(shù)下制備，主要是控制提取、濃縮、干燥等加熱步驟的時(shí)間。加熱時(shí)間短、溫度低，所得丹參酮ⅡA、丹酚酸B為代表的有效成分含量較高。其中工藝A組復(fù)方丹參片含丹參酮ⅡA1.08mg·g－1、丹酚酸B 21.25mg·g－1，工藝B組含丹參酮ⅡA1.76mg·g－1、丹酚酸B 34.83mg·g－1，工藝C組含丹參酮ⅡA0.84mg·g－1、丹酚酸B 13.34mg·g－1。

對(duì)比3種工藝的復(fù)方丹參片，當(dāng)有效成分達(dá)到一定量時(shí)，有較好的抗心肌缺血作用，其效應(yīng)與劑量有關(guān)，即復(fù)方丹參片水溶性和脂溶性有效成分含量越高，抗心肌缺血的作用越好。經(jīng)測(cè)定考察，市售各廠家的復(fù)方丹參片有效成分含量波動(dòng)較大，對(duì)藥效作用必然存在影響。大部分市售復(fù)方丹參片，其丹酚酸B、丹參酮ⅡA為代表的水溶性成分和脂溶性成分含量接近工藝C，少數(shù)接近工藝A，更少數(shù)接近工藝B。因此，在處方固定的情況下，有必要通過優(yōu)化工藝、細(xì)化參數(shù)，提高有效成分的轉(zhuǎn)移率和終產(chǎn)品的有效成分含量，制造優(yōu)質(zhì)藥品，保證臨床療效。

［1］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)（第2版）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：854.

［2］馮國(guó)鳴，馮高閎，周前貴.甲基橙皮甙對(duì)犬冠脈、腎、腦循環(huán)的作用［J］.中國(guó)藥理學(xué)報(bào)，1988，9（6）：548.

［3］于占久.關(guān)于心肌梗死的試驗(yàn)研究-Ⅰ.動(dòng)物蒸餾水的建立及心外膜電圖標(biāo)測(cè)術(shù)［J］.中華心血管病雜志，1980，8（1）：65.

［4］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)（第3版）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1003.

Effects of Danshen Tablets Under Process Control on M yocardial Infarction Caused by Coronary Artery Ligation of Anesthetic Dogs

Huang Lin，Lin Qing，Xiao Xiaoli，Li Chuyuan
（Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan ChineseMedicine Company Limited，Guangzhou Guangdong510515，China）

Objective：Prepared Danshen tablets under different process control plans are to be observed protective effects on acutemyocardial infarction of dogs.MethodsTomake themodel of acutemyocardial infarction of dogs by coronary ligation and to observe changes before and after of administration.ResultsDanshen tablets have the protective effect on acute myocardial infarction.Both processes A and B appeared to decrease heart rate（HR）and myocardial oxygen consumption of the animalmodels；Processes B decrease DAP，MAP and the increase of arteriovenous oxygen difference.ConclusionDanshen Tablets can markedly relieve myocardial ischemia.The parameters of extraction impact on the content of themain effective constituents.The higher content of effective constituents induces themore remarkable protective effect.

Danshen Tablet；Anesthetic dog；Myocardial ischemia

廣州市科技局科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目（2004Z1-E5021）

*林青，Tel：（020）87100367，E-mail：linqing＠813zy.com

2009-11-20）