• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    大米草多糖的提取及其單糖組成的GC-MS分析

    2010-10-23 03:02:18徐年軍何艷麗嚴(yán)小軍
    海洋科學(xué) 2010年9期
    關(guān)鍵詞:單糖半乳糖多糖

    徐年軍, 何艷麗, 武 敏, 嚴(yán)小軍

    (寧波大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院, 教育部應(yīng)用海洋生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 浙江 寧波 315211)

    大米草多糖的提取及其單糖組成的GC-MS分析

    徐年軍, 何艷麗, 武 敏, 嚴(yán)小軍

    (寧波大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院, 教育部應(yīng)用海洋生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 浙江 寧波 315211)

    分析了海洋灘涂生物大米草(Spartina anglica)中的多糖成分和單糖組成, 為這種生物資源的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。利用水提醇沉、Sevag法脫蛋白得到純大米草多糖, 經(jīng)三氟乙酸降解、糖腈乙酸酯衍生,最后用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)分析大米草多糖中的單糖組成。結(jié)果表明大米草單糖組成為鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖, 其質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別是: 4.13%, 3.02%, 11.94%, 8.89%,6.82%, 27.18%, 38.00%。大米草多糖是一種可利用的食品資源, 其主要成分半乳糖、葡萄糖都是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的單糖, 大米草多糖可深入研究開發(fā)其生物活性用作保健食品。

    大米草(Spartina anglica); 多糖; 單糖組成; GC-MS分析

    大米草(Spartina anglica)是一種具有生態(tài)影響的海洋灘涂植物, 目前對(duì)我國(guó)沿海生態(tài)和生物多樣性、灘涂養(yǎng)殖等造成了較大的負(fù)面影響。但大米草是一種具有頑強(qiáng)生命力的植物, 其有效的控制和生態(tài)防除是一個(gè)世界性的難題[1]。同時(shí)大米草在沿海灘涂防風(fēng)護(hù)堤、促淤造田等方面也具有一定的正面生態(tài)效應(yīng)[2]。在這種情況下, 對(duì)大米草生物資源的開發(fā)利用是一種最佳的選擇[3]。

    大米草生物量大、用途很多, 大米草多糖和黃酮類活性物質(zhì)可用作保健食品。關(guān)于大米草多糖的新聞報(bào)道很多, 主要涉及多糖的提取等, 如上海壽琪多糖食品研究所與福州中衛(wèi)多糖科技公司合作進(jìn)行了大米草多糖的提取并申請(qǐng)了相關(guān)的專利。但大米草生物活性物質(zhì)的研究報(bào)道很少, 大米草多糖理化性質(zhì)及單糖組成分析方面的研究未見(jiàn)報(bào)道[4]。作者首次研究了大米草多糖的單糖成分分析, 為大米草多糖的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    新鮮大米草(Spartina anglica)于2005年4月采于浙江象山縣鶴浦沿海灘涂。大米草洗凈后去除根部,將莖葉剪碎后備用。

    1.2 儀器和試劑

    單糖標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自美國(guó) Sigma-Aldrich公司, 本實(shí)驗(yàn)中所用的主要有赤蘚糖(erythrose)、鼠李糖(rhamnose)、核糖(ribose)、阿拉伯糖(arabinose)、巖藻糖(fucose)、木糖(xylopyranose)、甘露糖(mannose)、葡萄糖(glucose)、半乳糖(lactose)和肌醇(inositol)。試劑盒 HMDS(Hexamethyldisilazane, 六甲基二硅胺烷)+TMCS, 3:1(Sylon HT)購(gòu)自美國(guó) Supelco 公司, 其他試劑為國(guó)產(chǎn)分析純。主要分析儀器有島津公司的氣相色譜-質(zhì)譜儀(Shimadzu QP2010 GC-MS), Supelco 公司生產(chǎn)的30 m×0.25 mm×0.25 μm SPB-50色譜柱; Thermo公司的Multiskan MK3型酶標(biāo)儀等。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 大米草多糖的提取純化

    新鮮大米草樣品40 g于60oC烘干12 h, 液氮冷凍后碾碎, 于90oC恒溫水浴浸提5 h, 過(guò)濾, 濾渣重復(fù)提取2次, 合并提取液, 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至100 mL。加入乙醇于冰箱中過(guò)夜沉淀, 沉淀物用無(wú)水乙醇洗滌數(shù)次, 60 mL水溶解。按Sevag法[5]除蛋白質(zhì), 透析除去雜質(zhì)。加適量蒸餾水溶解, 冷凍干燥, 得大米草多糖共64 mg。

    1.3.2 大米草多糖的進(jìn)一步純化

    將得到的大米草多糖樣品進(jìn)行 Sephadex DEAE A50凝膠柱層析(2.2 cm×20 cm), 蒸餾水和1 mol/L NaCl恒速洗脫, 等體積自動(dòng)接收, 硫酸苯酚法[6]檢測(cè)洗脫樣品中的總糖含量, 繪制洗脫曲線, 根據(jù)洗脫樣品峰截取第8~18管(每管4 mL, SPI), SPI為大米草多糖主要組分, 為均一多糖。

    1.3.3 多糖降解時(shí)間的確定

    在4個(gè)反應(yīng)瓶中各自加入15 μL的2 g/L的大米草多糖溶液, 氮?dú)獯蹈珊蠓謩e加入1 mL的2 mol/mL的三氟乙酸, 120oC分別油浴45、60、75、90 min, 獲得4個(gè)降解單糖樣品, 加入甲醇1 mL(3次), 減壓蒸餾徹底去除三氟乙酸。

    1.3.4 醛糖衍生化

    單糖標(biāo)準(zhǔn)品和降解單糖樣品分別加入10 mg鹽酸羥胺和0.5 mL吡啶, 密封條件下在90oC加熱反應(yīng)30 min生成糖肟, 加入1:1的醋酸酐后90oC油浴30 min生成具有揮發(fā)性的糖腈乙酸酯衍生物, 氮?dú)獯蹈珊笥枚燃淄槎ㄈ? GC-MS進(jìn)樣分析。每個(gè)樣品作3個(gè)平行樣。

    1.3.5 酮糖衍生化

    酮糖衍生化直接用試劑盒, 待測(cè)樣品加入六甲基二硅胺烷(HMDS)80oC油浴60 min后生成可揮發(fā)的衍生物, 氮?dú)獯蹈珊笳和槎ㄈ? 直接進(jìn)行GC-MS分析。每個(gè)樣品作3個(gè)平行樣分析。

    1.3.6 GC-MS檢測(cè)條件

    主要實(shí)驗(yàn)條件參照Ye等[7]。GC條件: 進(jìn)樣口溫度為250, ℃載氣為99.99%的高純氦, 柱流速1 mL/min, 初始柱前壓26.3 kPa, 柱起始溫度100, ℃保持3.5 min, 以15/min℃升至160, ℃保持20 min,再以15/min℃升至200, ℃保持15 min, 再以20/min℃升至280, ℃保持5 min。分流進(jìn)樣, 分流比為9.6。

    MS條件: 用電子轟擊(Electron Impact, EI)源分析, 電子能量為70 eV, 離子源溫度200, ℃接口溫度250℃。選取全程離子碎片掃描(SCAN)模式時(shí), 質(zhì)量掃描范圍為50~600, 溶劑延遲3.5 min。選取特征離子碎片掃描(SIM)模式時(shí), 醛糖選用145 m/z、酮糖選用217 m/z為定量時(shí)的目標(biāo)離子, 另選兩個(gè)離子作為定性時(shí)的參考離子。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 大米草多糖的提取率

    本實(shí)驗(yàn)為了保證提取樣品的純度, 提取率不是很高, 僅為0.16%。提取過(guò)程中的主要損失步驟包括酒精沉淀、有機(jī)溶劑去蛋白、乙醇洗滌及層析柱純化等。不同的提取方法, 特別是多糖提取過(guò)程中的脫蛋白的方法很多, Sevag法是比較經(jīng)典的方法, 目前已經(jīng)廣泛用于生物樣品中糖復(fù)合物的提純及提取過(guò)程中蛋白質(zhì)的去除[6]。

    大米草多糖的提取未見(jiàn)有專業(yè)文獻(xiàn)報(bào)道。新聞報(bào)道中只提到雙酶水解法和超低溫冷凍干燥技術(shù)獲得大米草多糖, 但具體的提取方法未見(jiàn)報(bào)道。相關(guān)的專利中大米草多糖的提純方法(申請(qǐng)?zhí)枺?00410069331.7)主要采用浸泡、酶解法獲得大米草多糖, 采用超濾膜分離技術(shù)將大米草濃縮液過(guò)濾,從而使大米草多糖的純度提高了 60%以上, 沒(méi)有對(duì)大米草多糖進(jìn)行進(jìn)一步純化, 沒(méi)有獲得提取率等參數(shù)。

    本文采用的提取方法具有較好的重復(fù)性, 特別是提取的純度高, 可用于進(jìn)行單糖組成分析和結(jié)構(gòu)分析, 在隨后的實(shí)驗(yàn)中也采用這種提取方法, 均獲得了較滿意的結(jié)果。

    2.2 大米草多糖的純度測(cè)定

    大米草多糖用 Sephadex G-100柱層析法檢測(cè),得到了一個(gè)主要的洗脫峰, 根據(jù)其對(duì)稱性特點(diǎn)判斷其為均一多糖。紫外分光光度法檢測(cè)表明大米草多糖無(wú)蛋白質(zhì)存在。

    2.3 大米草多糖酸降解時(shí)間的確定

    在運(yùn)用三氟乙酸對(duì)大米草多糖進(jìn)行降解時(shí), 研究了不同時(shí)間梯度下(45, 60, 75, 90 min)所獲得的大米草單糖組成差異, 結(jié)果其組成和含量無(wú)顯著差異(P<0.05), 本文取含量相對(duì)較高的 60 min作為最佳降解時(shí)間。

    2.4 單糖標(biāo)準(zhǔn)品的GC-MS色譜分析

    由于酮糖分析中未檢測(cè)到酮糖, 本文僅列出 10種醛糖的檢測(cè)及其定量結(jié)果。

    圖 1為用 SIM 模式檢測(cè)得到的 10種醛糖的GC-MS色譜圖, 圖示了10種單糖的出峰時(shí)間, 其中1為赤蘚糖, 2為鼠李糖, 3為核糖, 4為阿拉伯糖, 5為巖藻糖, 6為木糖, 7為甘露糖, 8為葡萄糖, 9為半乳糖, 10為肌醇,其出峰時(shí)間分別是15.47, 30.77, 30.99 , 31.77 ,31.88 , 32.67, 43.61, 44.96, 46.01, 48.22 min。根據(jù)其質(zhì)譜裂解峰分別對(duì)其對(duì)應(yīng)的峰進(jìn)行了確認(rèn)。

    2.5 大米草單糖的GC-MS色譜分析

    運(yùn)用同樣的方法對(duì)大米草多糖進(jìn)行單糖組成分析(圖2)。結(jié)果運(yùn)用GC-MS分析方法, 從大米草單糖中共檢測(cè)出7個(gè)明顯的波峰, 根據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜(圖1)的出峰時(shí)間對(duì)比, 以及對(duì)該峰的質(zhì)譜鑒定, 可判斷出大米草單糖組成為鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖。根據(jù)各峰面積比計(jì)算其相對(duì)百分含量, 分別為 4.13%, 3.02%, 11.94%,8.89%, 6.82%, 27.18%, 38.00%。

    結(jié)果表明大米草多糖的單糖成分中主要是半乳糖(38.00%), 葡萄糖(27.18%)和阿拉伯糖(11.94%),共占單糖總量的77.12%。而這3種糖都是人類食品中主要的單糖成分, 表明大米草多糖是一種很好的多糖資源, 可用于開發(fā)相關(guān)的保健食品或藥品。

    圖1 標(biāo)準(zhǔn)單糖的GC-MS色譜圖Fig. 1 GC-MS chromatogram of standard monosaccharides

    圖2 大米草單糖的GC-MS色譜圖Fig. 2 GC-MS chromatogram of the monosaccharides from Spartina anglicaa.赤蘚糖, b.鼠李糖, c.核糖, d.阿拉伯糖, e.木糖, f.甘露糖, g.葡萄糖, h.半乳糖, i.肌醇a. Erythrose, b. Rhamnose, c. Ribose, d. Arabinose, e.Xylopyranose, f. Mannose, g. Glucose, h. Lactose, i. inositol

    2.6 GC-MS進(jìn)行單糖分析的優(yōu)點(diǎn)

    目前對(duì)多糖的單糖組成分析主要用氣相色譜法(GC)[8]、高效液相色譜(HPLC)[9]或者高效毛細(xì)管電泳(HPCE)分析。一般認(rèn)為, GC、HPLC、HPCE在定量方面具有一定的優(yōu)勢(shì), 但在定性方面卻存在不足:?jiǎn)渭円揽繒r(shí)間定性不夠準(zhǔn)確, 特別是有雜質(zhì)峰干擾的情況下, 無(wú)法準(zhǔn)確判斷色譜圖中的峰是屬于樣品峰, 還是屬于雜質(zhì)峰。相對(duì) GC-MS, 氣相色譜所獲得的色譜峰缺乏選擇性, 雜質(zhì)峰混在樣品峰中勢(shì)必帶來(lái)峰面積的增加, 樣品處理過(guò)程中的雜質(zhì)也容易引起積分面積的變化, 給樣品制備和定量帶來(lái)了一定的困難。GC-MS在單糖組成的定性方面具有特效、快速的特點(diǎn), 依靠其 FID圖譜的峰面積定量具有和直接用GC的色譜圖同樣的效果[10,11]。

    2.7 大米草多糖成分分析的意義

    大米草是一種具有負(fù)生態(tài)效應(yīng)的海洋灘涂生物,對(duì)其開發(fā)利用具有很重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)生態(tài)意義,許多報(bào)紙上都介紹了上海壽琪多糖食品有限公司在大米草多糖提取上的成功事例。但到現(xiàn)在為止, 該技術(shù)還未見(jiàn)有新的進(jìn)展, 主要因?yàn)榇竺撞荻嗵蔷烤褂惺裁礃拥纳锘钚赃€不是很清楚, 相關(guān)的應(yīng)用性基礎(chǔ)研究還有很多工作有待完成。本實(shí)驗(yàn)室對(duì)大米草多糖進(jìn)行了一年多的研究, 發(fā)現(xiàn)了大米草多糖降解產(chǎn)物對(duì)羥基自由基具有較強(qiáng)的清除活性, 對(duì)α-葡萄糖苷酶也具有一定的抑制活性(數(shù)據(jù)未發(fā)表)。而對(duì)大米草多糖的組成分析是深入了解大米草多糖的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成的必要步驟。接下來(lái)的工作我們準(zhǔn)備用不同方法降解大米草多糖, 研究其降解產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與生物活性之間的關(guān)系, 為大米草開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。

    [1] Hacker S D, Heimer D, Hellquist C E, et al. A marine plant Spartina anglica invades widely varying habitats:potential mechanisms of invasion and control [J]. Biological Invasion, 2001, 3: 211-217.

    [2] Lorne K K, Paul H. Exotic species and estuaries: managing Spartina anglica in Tasmania, Australia [J].Ocean & Coastal Management, 2000, 43(7): 573-584.

    [3] Qin P, Xie M, Jiang Y S, et al. Sparitna green food ecological engineering [J]. Ecological Engineering,1998, 11(1-4): 147-156.

    [4] 徐年軍, 嚴(yán)小軍, 徐繼林, 等. 大米草中生物活性物質(zhì)的篩選[J]. 海洋科學(xué), 2005, 29(3): 17-19.

    [5] Bimalendu R. Polysaccharides from Enteromorpha compressa: Isolation, purification and structural features[J]. Carbohydr Polym, 2006, 66(3): 408-416.

    [6] 張惟杰. 糖復(fù)合物生化研究技術(shù)(第 2版)[M]. 杭州:浙江大學(xué)出版社, 1999. 36-41.

    [7] Ye F T, Yan X J, Xu J L, et al. Determination of aldoses and ketoses by GC-MS using differential derivatisations[J]. Phytochemical Analysis, 2006, 17(6): 379-383.

    [8] Osborn H M I, Lochey F, Mosley L, et al. Analysis of polysaccharides and monosaccharides in the root mucilage of maize (Zea mays L.) by gas chromatography[J], Journal of Chromatography A, 1999, 831(2): 267-276.

    [9] Yang X B, Zhao Y, Wang Q W, et al. Analysis of the monosaccharide components in Angelica polysaccharides by high performance liquid chromatography [J].Analytical Sciences, 2005, 21(10): 1177-1180.

    [10] 鄧永智, 李文權(quán), 袁東星. 海水小球藻中多糖的提取及其單糖組成的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].分析化學(xué),2006, 34(12): 1697-1701.

    [11] Zhou P, Xie M Y, Nie S P, et al. Primary structure and configuration of tea polysaccharide [J]. Sciences in China Series C (Life Sciences), 2004, 47(5): 416-424.

    Extraction of polysaccharides from Spartina anglica and analysis of the monosaccharide composition by gas chromatography-mass spectrometry

    XU Nian-jun, HE Yan-li, WU Min, YAN Xiao-jun
    (Applied Marine Biotechnology Key Laboratory of the Ministry of Education, College of Life Science and Biotechnology, Ningbo University, Ningbo 315211, China)

    Mar., 9, 2010

    Spartina anglica; polysaccharides; monosaccharide composition; GC-MS

    To study the polysaccharides and analysis their monosaccharide compositions of the Spartina anglica, purified polysaccharides were obtained by hot water extraction, ethanol precipitation, and de-protein by Sevag method. The polysaccharides were hydrolyzed to monosaccharides by 2 mol/mL trifluoroacetic acid in 120℃ oil-bath for 1h. The derived monosaccharides were analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The S. anglica polysaccharides consisted of rhamnose, ribose, arabinose, xylopyranose, mannose, glucose, lactose, with their relative percentages being 4.13%, 3.02%, 11.94%, 8.89%, 6.82%, 27.18%, and 38.00%, respectively. It is predicted that the polysaccharides of the S. anglca are a potential food resource, with the main monosaccharides, i.e. lactose and glucose, being of very high nutritional value. Further study for their applications in functional foods is warranted.

    Q539

    A

    1000-3096(2010)09-0015-04

    2010-03-09;

    2010-04-23

    浙江省衛(wèi)生廳項(xiàng)目(2005B149); 浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(Y507263); 浙江省錢江人才計(jì)劃項(xiàng)目(2007R10038); 寧波市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2007A610071)

    徐年軍(1973-), 男, 湖北赤壁人, 博士, 研究員, 主要從事海洋生物活性物質(zhì)研究,電話: 0574-87600458, E-mail: xunianjun@nbu.edu.cn

    (本文編輯: 張培新)

    猜你喜歡
    單糖半乳糖多糖
    海藻多糖的單糖組成對(duì)體外抗氧化活性的影響
    澤蘭多糖對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用
    中成藥(2018年8期)2018-08-29 01:28:24
    米胚多糖的組成及抗氧化性研究
    熟三七多糖提取工藝的優(yōu)化
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:45
    黃芩-黃連藥對(duì)防治D-半乳糖癡呆小鼠的作用機(jī)制
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:11
    蹄葉槖吾葉多糖提取工藝優(yōu)化及單糖組成研究
    半乳糖凝集素-3與心力衰竭相關(guān)性
    HPLC-ELSD法測(cè)定煙草中單糖含量
    半乳糖凝集素-3在心力衰竭中的研究進(jìn)展
    酶法降解白及粗多糖
    中成藥(2014年11期)2014-02-28 22:29:50
    国产91av在线免费观看| 好男人视频免费观看在线| 91精品伊人久久大香线蕉| 精品久久久精品久久久| 性色avwww在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 久久综合国产亚洲精品| 69av精品久久久久久| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产av不卡久久| 国产亚洲最大av| 亚洲av男天堂| 精品一区二区免费观看| 日韩制服骚丝袜av| 久久久国产一区二区| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产成人福利小说| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产精品久久久久久久久免| 日日啪夜夜爽| 日韩在线高清观看一区二区三区| 岛国毛片在线播放| 1000部很黄的大片| 看十八女毛片水多多多| 日本熟妇午夜| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲欧洲国产日韩| 国产成人福利小说| 综合色av麻豆| 亚洲国产精品专区欧美| 高清日韩中文字幕在线| 国产精品人妻久久久影院| 精品一区在线观看国产| 精品久久国产蜜桃| 黑人高潮一二区| videossex国产| 色视频www国产| 免费人成在线观看视频色| 国产午夜福利久久久久久| 草草在线视频免费看| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲不卡免费看| 国产精品人妻久久久久久| 精品人妻偷拍中文字幕| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲成人久久爱视频| 男人添女人高潮全过程视频| av.在线天堂| 七月丁香在线播放| 美女cb高潮喷水在线观看| 伊人久久国产一区二区| av天堂中文字幕网| 少妇丰满av| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产探花极品一区二区| 看非洲黑人一级黄片| av在线播放精品| 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲欧美精品专区久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品国产三级国产专区5o| 秋霞伦理黄片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 男女国产视频网站| 久久久久性生活片| 99re6热这里在线精品视频| 国产精品偷伦视频观看了| 舔av片在线| 青春草国产在线视频| 人人妻人人看人人澡| 日韩人妻高清精品专区| 偷拍熟女少妇极品色| 三级国产精品片| 国产精品国产av在线观看| 午夜福利高清视频| 18禁在线播放成人免费| 免费看av在线观看网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久久伊人网av| 亚洲高清免费不卡视频| 观看免费一级毛片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品三级大全| 97精品久久久久久久久久精品| 波多野结衣巨乳人妻| 免费观看av网站的网址| 日日撸夜夜添| 六月丁香七月| 亚洲av福利一区| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久精品国产亚洲av天美| 有码 亚洲区| 精品少妇久久久久久888优播| 嘟嘟电影网在线观看| 九草在线视频观看| 午夜福利在线在线| 午夜福利视频精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 伊人久久国产一区二区| 久久久久久九九精品二区国产| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 人体艺术视频欧美日本| 大香蕉97超碰在线| 午夜亚洲福利在线播放| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲精品国产色婷婷电影| 91久久精品国产一区二区三区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 伊人久久国产一区二区| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲经典国产精华液单| av播播在线观看一区| 国产精品福利在线免费观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产久久久一区二区三区| 大码成人一级视频| 欧美日韩视频精品一区| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 97在线人人人人妻| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 97热精品久久久久久| 视频区图区小说| 日本午夜av视频| 欧美xxⅹ黑人| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产老妇女一区| 婷婷色综合www| 国产精品国产三级专区第一集| av播播在线观看一区| 91aial.com中文字幕在线观看| 日本色播在线视频| 深夜a级毛片| 看非洲黑人一级黄片| 深爱激情五月婷婷| 国产精品.久久久| 日韩av在线免费看完整版不卡| 99热网站在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 国产91av在线免费观看| 国产高清不卡午夜福利| 听说在线观看完整版免费高清| 啦啦啦在线观看免费高清www| 精品少妇久久久久久888优播| 精品久久久久久久久av| 热99国产精品久久久久久7| 久久久精品免费免费高清| 欧美三级亚洲精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品av视频在线免费观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜精品一区二区三区免费看| 精品久久久噜噜| 成人综合一区亚洲| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲欧美日韩东京热| 最近中文字幕2019免费版| 制服丝袜香蕉在线| 色综合色国产| 在线a可以看的网站| 久久久久久久久久久免费av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲成人av在线免费| 边亲边吃奶的免费视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成人国产麻豆网| 久久6这里有精品| 欧美丝袜亚洲另类| 黄色欧美视频在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 精品午夜福利在线看| 美女cb高潮喷水在线观看| 又爽又黄a免费视频| 色5月婷婷丁香| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 可以在线观看毛片的网站| 身体一侧抽搐| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲成人av在线免费| 日日撸夜夜添| 性色av一级| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲经典国产精华液单| 精品国产三级普通话版| 久久精品夜色国产| 日韩国内少妇激情av| 高清日韩中文字幕在线| 午夜福利视频1000在线观看| 五月天丁香电影| 国产黄色视频一区二区在线观看| 1000部很黄的大片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产乱人偷精品视频| 国产淫片久久久久久久久| 国产成人a∨麻豆精品| 日韩欧美精品免费久久| 免费大片18禁| 国产淫片久久久久久久久| 美女cb高潮喷水在线观看| 免费观看的影片在线观看| 观看美女的网站| 日本一二三区视频观看| 嘟嘟电影网在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲av成人精品一区久久| 成人欧美大片| 日韩欧美一区视频在线观看 | 天堂俺去俺来也www色官网| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 欧美国产精品一级二级三级 | 精品酒店卫生间| 欧美人与善性xxx| 欧美激情国产日韩精品一区| 免费观看在线日韩| 成人国产麻豆网| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲最大成人av| 免费大片18禁| 午夜日本视频在线| 国产精品无大码| 日日撸夜夜添| 成人漫画全彩无遮挡| 国产人妻一区二区三区在| 99久久人妻综合| 成人美女网站在线观看视频| 一级爰片在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 插逼视频在线观看| 男女边摸边吃奶| 亚洲精品久久午夜乱码| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 视频中文字幕在线观看| 亚洲高清免费不卡视频| 99热这里只有是精品在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 中文资源天堂在线| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲国产欧美在线一区| 最后的刺客免费高清国语| 中文字幕久久专区| 亚洲电影在线观看av| 丰满乱子伦码专区| 在线 av 中文字幕| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 白带黄色成豆腐渣| 七月丁香在线播放| 在线观看美女被高潮喷水网站| 一本一本综合久久| 日本黄色片子视频| 在线播放无遮挡| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美性感艳星| 简卡轻食公司| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲不卡免费看| 国产av码专区亚洲av| 91久久精品电影网| 亚洲精品视频女| av免费在线看不卡| 嫩草影院精品99| 美女内射精品一级片tv| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产有黄有色有爽视频| xxx大片免费视频| 51国产日韩欧美| 日韩国内少妇激情av| 成人黄色视频免费在线看| 又大又黄又爽视频免费| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 天天一区二区日本电影三级| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产成人午夜福利电影在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 大片免费播放器 马上看| 新久久久久国产一级毛片| 黄色日韩在线| 亚洲欧洲日产国产| 18禁动态无遮挡网站| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲自偷自拍三级| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 91久久精品电影网| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲av免费高清在线观看| 婷婷色av中文字幕| 性色avwww在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 丝袜美腿在线中文| 男女国产视频网站| 欧美zozozo另类| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 18禁动态无遮挡网站| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美xxⅹ黑人| 男女国产视频网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 精品熟女少妇av免费看| 超碰av人人做人人爽久久| 久久精品久久久久久久性| 亚洲精品一二三| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美潮喷喷水| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲电影在线观看av| 欧美国产精品一级二级三级 | 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品爽爽va在线观看网站| 老司机影院成人| 成人欧美大片| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲av一区综合| 如何舔出高潮| 91久久精品电影网| 国产免费视频播放在线视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 精品久久久久久久久亚洲| 插阴视频在线观看视频| 97超碰精品成人国产| 久久久久久伊人网av| 亚洲人与动物交配视频| h日本视频在线播放| 国产av不卡久久| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品一二三| 久久久精品94久久精品| 内地一区二区视频在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜爱| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美三级亚洲精品| 一本一本综合久久| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 777米奇影视久久| 特大巨黑吊av在线直播| 最近中文字幕2019免费版| xxx大片免费视频| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲电影在线观看av| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| av播播在线观看一区| av一本久久久久| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品.久久久| 久久精品综合一区二区三区| 免费黄网站久久成人精品| 日韩一本色道免费dvd| 69人妻影院| 国产成人精品婷婷| 亚洲国产精品成人久久小说| 白带黄色成豆腐渣| 成人特级av手机在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 男的添女的下面高潮视频| 深爱激情五月婷婷| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产成人福利小说| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久精品94久久精品| 18禁动态无遮挡网站| 永久网站在线| 国产免费一区二区三区四区乱码| 黄色一级大片看看| 22中文网久久字幕| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 丰满乱子伦码专区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品人妻久久久久久| 日韩欧美 国产精品| 亚洲av男天堂| 亚洲精品久久午夜乱码| 麻豆乱淫一区二区| 日韩一区二区视频免费看| 美女主播在线视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产在线一区二区三区精| h日本视频在线播放| 国产精品久久久久久精品电影| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲人与动物交配视频| 在线天堂最新版资源| 亚洲精品,欧美精品| 日韩强制内射视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 日韩制服骚丝袜av| 如何舔出高潮| 亚洲av国产av综合av卡| 99热这里只有是精品在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 简卡轻食公司| 波多野结衣巨乳人妻| 一本色道久久久久久精品综合| 青春草国产在线视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 中文在线观看免费www的网站| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 熟女av电影| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品伦人一区二区| 亚洲精品aⅴ在线观看| av卡一久久| 中国美白少妇内射xxxbb| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成人无遮挡网站| 欧美三级亚洲精品| 性插视频无遮挡在线免费观看| 午夜视频国产福利| 欧美精品国产亚洲| 免费看不卡的av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | av免费观看日本| 六月丁香七月| 中文字幕久久专区| 亚洲国产精品专区欧美| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品视频人人做人人爽| 国产成人91sexporn| 国产视频内射| 夫妻性生交免费视频一级片| 老司机影院成人| av天堂中文字幕网| 久久韩国三级中文字幕| 国产淫语在线视频| 国产视频首页在线观看| 日韩一区二区三区影片| 身体一侧抽搐| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 麻豆久久精品国产亚洲av| 好男人视频免费观看在线| 特级一级黄色大片| 欧美少妇被猛烈插入视频| 中文字幕亚洲精品专区| 国产免费福利视频在线观看| 久久久久性生活片| 伦精品一区二区三区| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产综合懂色| 97在线视频观看| 成人一区二区视频在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产免费福利视频在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 成年女人在线观看亚洲视频 | 一区二区三区精品91| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美丝袜亚洲另类| 国产熟女欧美一区二区| 精品午夜福利在线看| 热re99久久精品国产66热6| 永久免费av网站大全| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 高清毛片免费看| 国产av国产精品国产| 日日啪夜夜爽| 三级经典国产精品| 有码 亚洲区| 99久久人妻综合| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲性久久影院| 亚洲欧洲国产日韩| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 97在线视频观看| 黄色欧美视频在线观看| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 波多野结衣巨乳人妻| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 久久热精品热| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 日韩一本色道免费dvd| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品,欧美精品| 91久久精品电影网| 91久久精品电影网| 18禁在线播放成人免费| 成人特级av手机在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 色播亚洲综合网| 久久久久久久大尺度免费视频| 午夜福利在线在线| 卡戴珊不雅视频在线播放| 一级爰片在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 熟女人妻精品中文字幕| 国产av码专区亚洲av| 久久99热这里只频精品6学生| 久久这里有精品视频免费| 久久久久久久精品精品| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美bdsm另类| 观看免费一级毛片| av播播在线观看一区| 高清在线视频一区二区三区| www.色视频.com| 一个人观看的视频www高清免费观看| 在线天堂最新版资源| 欧美一区二区亚洲| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 欧美日韩精品成人综合77777| 99热这里只有是精品50| 国产亚洲91精品色在线| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产男女内射视频| 男人添女人高潮全过程视频| 国产av不卡久久| 免费人成在线观看视频色| 欧美一区二区亚洲| 国产在线男女| 成人特级av手机在线观看| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 丰满少妇做爰视频| 黄色配什么色好看| 最近2019中文字幕mv第一页| 观看免费一级毛片| 18禁在线播放成人免费| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲自偷自拍三级| a级一级毛片免费在线观看| 国内精品美女久久久久久| 国产中年淑女户外野战色| 国产黄频视频在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 色网站视频免费| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 国产精品无大码| 超碰97精品在线观看| 中文在线观看免费www的网站| av一本久久久久| av在线亚洲专区| 色播亚洲综合网| 色网站视频免费| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产老妇女一区| 亚洲成人一二三区av| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久精品94久久精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久99热这里只有精品18| 久久精品久久久久久久性| 网址你懂的国产日韩在线| 精品久久久久久久末码| 日日啪夜夜撸| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产成人精品婷婷| 日日啪夜夜爽| 久久人人爽人人爽人人片va| 赤兔流量卡办理| 精品久久久久久久久av| 在线a可以看的网站| 日本wwww免费看| 国产毛片在线视频| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 毛片女人毛片| 久久国产乱子免费精品| 97在线人人人人妻| 免费电影在线观看免费观看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产爱豆传媒在线观看| videos熟女内射| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费大片18禁| 午夜福利高清视频| 免费观看的影片在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 一级毛片久久久久久久久女| 黄色欧美视频在线观看| 在线观看免费高清a一片| 成人亚洲欧美一区二区av| 水蜜桃什么品种好| 亚洲欧美精品专区久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 好男人在线观看高清免费视频| 男女啪啪激烈高潮av片|