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    消脂護肝片中總黃酮的含量測定

    2010-10-16 03:15:20陳蕾姜林
    中國現(xiàn)代中藥 2010年10期
    關鍵詞:護肝片消脂中總

    陳蕾,姜林

    (新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院,新疆 烏魯木齊 830000)

    消脂護肝片中總黃酮的含量測定

    陳蕾*,姜林

    (新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院,新疆 烏魯木齊 830000)

    目的:建立消脂護肝片中總黃酮的含量測定方法。方法:采用分光光度法,以蘆丁為對照品,對其進行絡合顯色,在510 nm波長處測定吸光度,從而測定消脂護肝片中總黃酮的含量。結果:線性范圍在0.008~0.08 mg·mL-1(r=0.999 7),平均回收率為97.0%,RSD=1.84%(n=6)。結論:該法簡便易行、重現(xiàn)性好、結果可靠,可用于該制劑的質量控制。

    消脂護肝片;總黃酮;分光光度法

    消脂護肝片為新疆維吾爾自治區(qū)區(qū)中醫(yī)醫(yī)院院內制劑。由郁金、赤芍、白芍、丹參、山楂、決明子、瓜蔞、海藻、昆布、香附、雞內金、黨參、西紅花13味中藥組成,具有疏肝、行氣、活血的功能,用于高血脂癥、脂肪肝、早期肝纖維化。主要化學成分有黃酮類、苷類、有機酸、生物堿類、多糖等。該制劑原質量標準除片劑檢查通項外,只有芍藥苷的薄層色譜。本實驗采用分光光度法對總黃酮進行含量測定,通過對消脂護肝片中總黃酮的含量測定,為該制劑的質量標準提供定量依據(jù)?,F(xiàn)將結果報道如下。

    1 儀器與試藥

    UV-cintra20紫外分光光度計(澳大利亞GBC scientific Equipment),蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號100080-200707),消脂護肝片(批號080707,081223,、090511),水為本院實驗中心超純水,其他試劑均為分析純。

    2 方法與結果

    2.1 對照品溶液制備[1-2]

    精密稱取蘆丁對照品40 mg,置100 mL容量瓶中,加入甲醇50 mL溶解,再加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得0.4 mg·mL-1的對照品溶液。

    2.2 供試品溶液制備[3-4]

    精密稱取樣品1 g,加入70%乙醇50mL,超聲提取30 min(功率250 W,頻率59 KHz),放冷,過濾待用,作為供試品溶液。

    2.3 波長的選擇[5-6]

    對蘆丁對照品溶液和供試品溶液從400~800 nm進行掃描,得到紫外-可見吸光圖譜,見圖1。從圖1可知510 nm為最大吸收波長。

    圖1 蘆丁及供試品溶液的紫外-可見圖譜

    2.4 標準曲線的制備[7-8]

    精密量取對照品溶液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL,分別置于25 mL容量瓶中,各加水至6 mL。加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL,使混勻,放置6 min;加入10%硝酸鋁溶液1 mL,搖勻,放置6 min;加入氫氧化鈉試液10 mL,再加入水至刻度,搖勻,放置15 min。在510 nm的波長處測定吸收度。以吸收度為橫坐標,濃度為縱坐標,繪制標準曲線,并計算得回歸方程Y=0.053 7X+0.001 0(r=0.999 7),表明蘆丁對照品溶液在0.008~0.08 mg·mL-1呈良好的線性關系。

    2.5 穩(wěn)定性試驗

    取同一供試品溶液,分別于配制后0,10,20,30,40,50,60,90 min,依照“2.4”項方法測定吸光度,計算RSD=2.33%,結果表明溶液制備后90 min穩(wěn)定。

    2.6 精密度試驗

    取同一供試品溶液6份,依照“2.4”項方法測定吸光度,計算RSD=1.39%,結果表明儀器精密度良好。

    2.7 重復性試驗

    取供試品溶液1份,依照“2.4”項方法重復測定吸光度值6次,計算RSD=0.40%,結果表明重復性良好。

    2.8 重現(xiàn)性試驗

    制備同一濃度供試品溶液6份,依照“2.4”項方法測定吸光度,計算RSD=0.98%,結果表明重現(xiàn)性良好。

    2.9 加樣回收率試驗

    精密稱取樣品1.0 g,按2.2項下方法制備成供試品溶液,分別精密量取供試品溶液1mL,共6份,每份分別加入一定量蘆丁對照品,按2.4項下方法測定吸光度,計算回收率,結果見表1。

    表1 蘆丁對照品加樣回收率

    2.10 樣品含量測定

    取批號080707,081223,090511的消脂護肝片,分別按2.2項下方法制備成供試品溶液,各精密量取1 mL按2.4項下方法測定吸光度,代入回歸方程計算消脂護肝片中總黃酮含量,結果見表2。

    表2 樣品中總黃酮含量測定

    根據(jù)以上結果,確定該制劑中總黃酮含量應不低于35 mg·g-1。

    3 討論

    目前,文獻報道總黃酮的含量測定方法[1-9],主要有紫外分光光度法、HPLC、熒光光度法等。本試驗采用分光光度法測定消脂護肝片中總黃酮的含量,簡便易行、重現(xiàn)性好、結果可靠。本實驗以蘆丁為對照品,經(jīng)波長掃描確定最大吸收波長510 nm為檢測波長。

    黃酮類化合物易溶于甲醇、乙醇等溶劑,甲醇毒性大,且浸透能力強,提取范圍廣,雜質較多,故采用乙醇做溶劑提取消脂護肝片中總黃酮。通過比較超聲提取、回流提取,結果表明超聲提取效率明顯高于回流提取,且超聲提取時間短,操作方便,而且不用加熱,避免高溫對黃酮結構的影響,故采用超聲提取法。

    在實驗中,我們通過考察樣品、蘆丁對照品在400~800 nm波長范圍的光譜圖,結果樣品與蘆丁對照品的吸收光譜在510 nm為一平峰,故選擇510 nm為測定波長。在實驗中我們發(fā)現(xiàn)供試品溶液的顯色受溫度影響且隨時間有變化,因此比色測定應平行操作,并按照規(guī)定時間進行。黃酮類化合物母核上多帶有酚羥基,對光和空氣中的氧很敏感,其溶液長時間久置后吸光度會下降,因此,待測液不宜久放,并避光低溫保存。

    [1]邵彩云.蒙藥文冠木不同部位總黃酮的含量測定[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2005,11(1):28-29.

    [2]劉斌,石任兵,周素蓉.苦參湯有效部位總黃酮含量測定方法研究[J].中國實驗方劑學雜志,2004,10(6):24-26.

    [3]黃永林,趙志國,文永新.不同部位艾納香中總黃酮的含量測定[J].廣西植物,2006,26(4):453-455.

    [4]黃永林,阮俊,文永新,等.不同部位紫玉盤總黃酮的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2006,17(10):1900-1901.

    [5]宋永強,湛樂剛.分光光度法測定裸花紫珠片中總黃酮含量[J].海南醫(yī)學,2005,16(6):152.

    [6]謝鳴,彭鑲心,劉超,等.紫外分光光度法側定夏枯草微丸中總黃酮的含量[J].西南民族大學學報,2006,32(1):136.

    [7]郭亞健,范麗,王曉強.關于NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法測定總黃酮方法的探討[J].藥物分析雜志,2002,22(2):97-99.

    [8]馬陶陶,張群林,李俊,等.三氯化鋁比色法測定中藥總黃酮方法的探討[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,19(1):54-56.

    [9]楊書良.HPLC測定雙果膠囊中總黃酮的含量[J].中國中藥雜志,2004,29(6):586.

    Determination of Total Flavones in Xiaozhihugan Tablets

    Chen Lei,Jiang Lin
    (Traditional Chinese Medical Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi Xinjiang830000,China)

    Objective:To establish ultraviolet sepctrophotometry for the determination of total flavones in Xiaozhihugan tablets.Methods:Quercetin was selected as reference material,and the samples were determined at510 nm.Results:The linear range for quercetin was 0.008~0.08 mg·mL-1(r=0.999 7).The recovery rate was 97.0%,RSD=1.84%(n=6).Conclusion:This method is easy to handle with good accuracy and reproducibility,and is suitable for the quality control of Xiaozhihugan tablets.

    Xiaozhihugan tablets;Total Flavones;Sepctrophotometry

    *陳蕾,E-mail:leibaobao@sina.cn

    2010-06-05)

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