解離的小鼠牙胚上皮細(xì)胞在重聚發(fā)育過(guò)程仍維持牙齒發(fā)育基因的表達(dá)

胡雪峰，林陳勝，王冰梅，韓萍萍，張彥定

福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建省發(fā)育與神經(jīng)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福州 350108

組織工程與細(xì)胞培養(yǎng)

解離的小鼠牙胚上皮細(xì)胞在重聚發(fā)育過(guò)程仍維持牙齒發(fā)育基因的表達(dá)

胡雪峰，林陳勝，王冰梅，韓萍萍，張彥定

福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 福建省發(fā)育與神經(jīng)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福州 350108

為了解牙胚細(xì)胞解離重聚過(guò)程的細(xì)胞形態(tài)和分子機(jī)制，將小鼠帽狀期牙胚解離細(xì)胞重聚，移植到小鼠腎囊膜下培養(yǎng)，組織切片，HE染色，觀察再生牙齒的形態(tài)發(fā)生過(guò)程，并用原位雜交的方法進(jìn)一步檢測(cè)了與牙上皮發(fā)育密切相關(guān)的基因在再生牙上皮中的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，解離重聚的牙胚細(xì)胞在牙齒器官的再生過(guò)程重現(xiàn)了正常牙齒的形態(tài)發(fā)生過(guò)程；解離的牙上皮細(xì)胞在重聚和再生過(guò)程中保持Fgf8、Noggin和Shh等牙上皮發(fā)育基因表達(dá)。以上結(jié)果表明，即便是被解離形成分散狀態(tài)的牙上皮細(xì)胞，在與牙胚間充質(zhì)細(xì)胞重新聚合后，仍保持牙向分化的潛能。該結(jié)果為理解牙齒再生的機(jī)理提供新的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)利用干細(xì)胞進(jìn)行牙齒再生的研究有重要的提示意義。

牙齒再生，細(xì)胞重聚，牙上皮，基因表達(dá)

Abstract:Generation of bio-engineered teeth by using stem cells will be a major approach for bioengineered implantation.Previous studies have demonstrated that dissociated tooth germ cells are capable of generating a tooth after reaggregationin vitro.However, the cellular and molecular mechanisms underlying this tooth regeneration are not clear. In this study, we dispersed E13.5 molar germ into single cells, immediately reaggregated them into cell pellet, then grafted the reaggregates under mouse kidney capsule for various times of culture. We investigated the morphogenesis and the expression of several developmental genes in dental epithelial cells in reaggregates of tooth germ cells. We found that dissociated tooth germ cells, after reaggregation, recapitulated normal tooth developmental process. In additon, dissociated dental epithelial cells retained the expression ofFgf8,Noggin, andShhduring reaggregation and tooth regeneration processes. Our results demonstrated that, despite of under dissociated status, dental epithelial cells maintained their odontogenic fate after re-aggregation with dental mesenchymal cells. These results provided important information for futurein vitrogeneration of bio-engineered teeth from stem cells.

Keywords:tooth regeneration, reaggregation, dental epithelium, gene expression

在組織工程研究領(lǐng)域中，牙齒再生技術(shù)的建立已經(jīng)成為該領(lǐng)域引人注目的發(fā)展方向[1-6]。有關(guān)牙齒再生的研究已有多年的嘗試。將兔子切牙牙胚的上皮和間充質(zhì)打散后，植入到雞胚的尿蘘絨毛膜上培養(yǎng)，這些分散的細(xì)胞可以重新聚集起來(lái)，形成發(fā)育良好的牙齒結(jié)構(gòu)[7]。在大鼠中，將打散的牙胚組織植入到皮下，也能得到同樣的結(jié)果[8]。在由組織工程支架材料 PLGA (poly-L-lactate-co-glycolate) 或PGA/PLLA (Polyglycolate/poly-L-lacate) 構(gòu)成的牙型支架中，植入打散豬胚磨牙牙胚或大鼠的磨牙牙胚，均能形成牙齒的結(jié)構(gòu)[6,9-12]。我們的研究工作也證實(shí)了，在具有誘導(dǎo)牙齒發(fā)育能力的 E13.5 (E：胚股發(fā)育天數(shù)) 的小鼠牙胚間充質(zhì)中，盡管已經(jīng)出現(xiàn)基因表達(dá)的不對(duì)稱性和明顯的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)，但將其打散重聚后仍具有誘導(dǎo)牙齒發(fā)育能力[13]。因此，如果能啟動(dòng)與誘導(dǎo)牙齒發(fā)育過(guò)程有關(guān)的基因表達(dá)譜和信號(hào)通路，細(xì)胞可以自發(fā)地聚集并形成特定的牙齒結(jié)構(gòu)。牙齒發(fā)育的這一特性對(duì)利用干細(xì)胞進(jìn)行牙齒再生有重要的意義。然而，目前對(duì)重聚成牙過(guò)程中所發(fā)生的細(xì)胞形態(tài)變化以及其分子機(jī)制所知甚少。本研究探討了牙胚細(xì)胞在重聚成牙中的組織形態(tài)的發(fā)生過(guò)程以及牙胚上皮細(xì)胞是否維持其牙向分化的潛能。為此，我們檢查了重聚牙齒發(fā)育過(guò)程的形態(tài)學(xué)變化，并進(jìn)一步檢測(cè)了相關(guān)的牙上皮發(fā)育基因的表達(dá)。結(jié)果證實(shí)，即使在解離的狀態(tài)下，牙胚的上皮細(xì)胞仍保持其發(fā)育基因的表達(dá)和牙向分化的潛能。這一結(jié)果對(duì)利用干細(xì)胞進(jìn)行組織工程牙齒制備的研究有重要的提示意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

所用小鼠購(gòu)自福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，由本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。將12周齡雄性昆明鼠與10周齡雌性昆明鼠合籠交配，每日早晨檢查，以發(fā)現(xiàn)陰道栓之時(shí)起記為E0.5。將孕鼠斷頸處死，消毒外腹部后，取不同發(fā)育時(shí)期的胚胎，將 E13.5的鼠胚分離下頜置于PBS中，E13.5和E14.5及出生3 d的小鼠頭部置于4%多聚甲醛中，4℃固定24 h后包埋，按常規(guī)組織切片，厚度為10 μm，HE染色。

1.2 方法

1.2.1牙胚組織的體外重聚

如圖1所示，取E13.5的小鼠磨牙牙胚，用0.125%的胰蛋白酶在37℃消化5 min，用窄口長(zhǎng)頸玻璃吸管將消化后牙胚反復(fù)吹打，直至在顯微鏡下觀察形成單細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液以每 1.0×105～1.5×105個(gè)細(xì)胞為 1份，分配到幾個(gè)無(wú)菌EP管中；3 000 r/min室溫下離心3 min，使牙胚細(xì)胞重聚形成細(xì)胞團(tuán)塊。吸棄上清，加入0.5 mL細(xì)胞培養(yǎng)液，于37℃培養(yǎng)1 h。用闊口長(zhǎng)頸玻璃吸管將重聚的牙胚小心吸出，滴加到Trowell器官培養(yǎng)皿內(nèi)覆蓋有微孔濾膜的不銹鋼培養(yǎng)支架上，添加細(xì)胞培養(yǎng)液到淹沒(méi)重聚牙胚的1/3，將培養(yǎng)皿外槽內(nèi)加2 mL PBS，37℃、5% CO2培養(yǎng) 16～18 h。

圖1 利用解離的牙胚細(xì)胞重聚再生牙齒過(guò)程示意圖Fig.1 Schematic diagram showing generation of tooth from dissociated tooth germ cells after reaggregation and grafting under mouse kidney capsule. The mouse tooth germ is isolated from mandible, and dissociated into single cells. Then, the single cell suspension is reaggregated into cell pellets, and grafting under mouse kidney capsule. Tooth is formed 2?3 weeks after transplantation.

1.2.2重聚牙胚的體內(nèi)移植

用 400 μL麻醉劑進(jìn)行腹腔注射以麻醉昆明小鼠，切開(kāi)腰背部皮膚，暴露腎臟后，用顯微外科鑷輕輕挑起腎囊膜，并用鈍頭玻璃針?lè)蛛x腎囊膜與腎臟；將培養(yǎng)的重聚牙胚用窄口長(zhǎng)頸玻璃吸管轉(zhuǎn)移到昆明小鼠腎臟表面，并用鈍頭玻璃針輕輕將其推入分離的腎囊膜下 (以每只裸鼠接受 2～3個(gè)移植塊為準(zhǔn))，縫合創(chuàng)口。移植3 d、6 d、8 d和14 d后，將昆明小鼠處死，取移植塊，用4%多聚甲醛固定24 h，在37℃下用脫鈣液脫鈣，然后進(jìn)行脫水、包埋、組織切片 (切片厚度10 μm)。用HE法對(duì)4 d、8 d和14 d的移植塊進(jìn)行形態(tài)觀察，同時(shí)用原位雜交的方法對(duì)3 d和6 d的移植塊進(jìn)行基因表達(dá)分析 (圖1)。

1.2.3RNA反義探針制備

用NotI、SmaI、HindIII將帶有Noggin、Fgf8、Shh基因特異性片段的質(zhì)粒線性化，用膠回收試劑盒純化后，以線性化質(zhì)粒為模板、T3或T7聚合酶合成反義RNA探針。反應(yīng)體系為：T7/T3聚合酶1 μL，T7/T3 buffer 1 μL，Dig RNA labeling mix 2 μL，RNase inhibitor 0.5 μL，DNA模板900 ng，加去RNase水至 20 μL體系。36℃反應(yīng)2 h，加無(wú)水乙醇75 μL，8 mol/L LiCl 1.3 μL，?80℃沉淀 1.5 h 后 15 000 r/min離心15 min，75%乙醇洗滌，50 μL DEPC水溶解。

1.2.4原位雜交

參照Z(yǔ)hang等[14]的實(shí)驗(yàn)方法，取組織塊切片在梯度酒精 (100%、90%、70%、50%、35%) 復(fù)水，蛋白酶K (1 μg/mL) 消化1 min，將其乙?；笥锰荻染凭撍?；每片加入110 μL含有探針 (2 ng/μL)的雜交液，60℃雜交反應(yīng)16 h。雜交后，經(jīng)5× SSC漂洗 3次，每次 15 min，含50% Formamide的2×SSC漂洗2次，每次15 min，NTE (含有20 mg/mL RNase A 和 1 μL RNase T1) 中酶解 30 min，2× SSC漂洗10 min，0.1× SSC漂洗2次，每次5 min。用含有牛血清白蛋白的 2%封閉液預(yù)封閉 1 h，加入200 μL含0.2 μL抗 DiG抗體 2%封閉液，4℃孵育過(guò)夜。用NTMT 1 h×8洗去多余探針，最后NTMT(加左旋咪唑至終濃度為2 mmol/L) 室溫過(guò)夜。每張切片加400 μL BM Purple 堿性磷酸酶底物，避光放置于4℃顯色，脫水，透明、中性樹(shù)脂封片，拍照。

2 結(jié)果

2.1 重聚牙胚的發(fā)育再現(xiàn)了正常牙齒發(fā)育的過(guò)程

小鼠牙胚發(fā)育到 E14.5時(shí)，牙上皮外周的細(xì)胞增殖速度比牙蕾中心部位的細(xì)胞增殖速度快，因此外周部位的細(xì)胞突起深入間充質(zhì)，并包圍間充質(zhì)，形成帽狀結(jié)構(gòu)，稱為帽狀期。同時(shí)，牙胚間充質(zhì)細(xì)胞迅速增殖凝聚成細(xì)胞團(tuán)狀的牙乳頭 (圖2A)，打散重聚的牙胚牙上皮細(xì)胞自發(fā)地與牙間充質(zhì)細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)，聚合形成牙上皮組織，然后重新啟動(dòng)牙齒發(fā)育，移植4 d后的重聚牙胚形態(tài)與E14.5的牙齒形態(tài)相似，其上皮細(xì)胞外周增殖快，包圍間充質(zhì)形成帽子結(jié)構(gòu)，間充質(zhì)細(xì)胞也迅速增殖凝聚形成牙乳頭(圖 2D)。正常小鼠牙胚發(fā)育到 E17.5，牙上皮凹陷更深，其兩邊繼續(xù)生長(zhǎng)，形成鐘狀結(jié)構(gòu)，稱為鐘狀期。此時(shí)的上皮細(xì)胞分化形成外釉上皮、星網(wǎng)層和內(nèi)釉上皮，其中內(nèi)釉上皮細(xì)胞被拉長(zhǎng)成柱狀 (圖2B)；移植8 d后的重聚牙齒形態(tài)與E17.5的牙齒形態(tài)相似，發(fā)育到鐘狀期。其上皮細(xì)胞分化形成內(nèi)外釉細(xì)胞和星網(wǎng)層，與牙乳頭相臨的內(nèi)釉上皮細(xì)胞拉長(zhǎng)成柱狀(圖 2E)。到了鐘狀晚期，內(nèi)釉上皮分化形成成釉細(xì)胞，分泌牙釉質(zhì)；靠近內(nèi)釉上皮的間充質(zhì)細(xì)胞分化成一層柱狀的成牙本質(zhì)細(xì)胞，分泌形成牙本質(zhì) (圖2C)。而移植14 d的重聚牙齒最終形成發(fā)育良好的牙齒，可見(jiàn)高柱狀的成釉細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞，能分泌形成牙釉質(zhì)、牙本質(zhì) (圖 2F)。再生牙齒的發(fā)育過(guò)程重現(xiàn)了正常牙齒的發(fā)生過(guò)程。但是，重聚牙胚的形態(tài)學(xué)發(fā)生過(guò)程因?yàn)樾枰掀ぜ?xì)胞的重新聚集，與正常牙齒的發(fā)育相比明顯出現(xiàn)發(fā)育的延遲。

2.2 重聚牙胚牙上皮表達(dá)Fgf8、Noggin和Shh基因

小鼠的牙胚發(fā)育受上皮-間充質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的信號(hào)分子的調(diào)控，在發(fā)育中的小鼠牙胚中，F(xiàn)gf8、Noggin和Shh都是僅在牙上皮特異表達(dá)的標(biāo)志基因，在牙上皮的分化中起重要作用。在 E13.5的小鼠牙胚中，F(xiàn)gf8、Noggin和Shh在磨牙牙胚的牙上皮表達(dá) (圖 3A?C)，而在間充質(zhì)中幾乎沒(méi)有Fgf8、Noggin和Shh的表達(dá)。移植3 d的重聚牙胚細(xì)胞發(fā)生了重排，間充質(zhì)細(xì)胞與牙上皮細(xì)胞發(fā)生分離，牙上皮細(xì)胞自發(fā)地聚合形成牙上皮組織，在牙上皮細(xì)胞中仍然維持Fgf8和Noggin的表達(dá) (圖 3D?E)；移植6 d的重聚牙胚上皮組織表達(dá)Shh(圖3F)，而在間充質(zhì)幾乎檢測(cè)不到Fgf8、Noggin和Shh的表達(dá)(圖3D?F)。顯然，解離的牙胚上皮細(xì)胞在重新發(fā)育過(guò)程中，仍能保持牙齒發(fā)育基因的表達(dá)和牙向分化的潛能。

圖2 正常牙胚和重聚牙胚發(fā)育過(guò)程的組織形態(tài)比較觀察Fig.2 Histological comparison between development of the normal tooth and that of the reaggregated tooth germ after kidney transplantation. (A?C) Developmental process of a molar tooth. (A) The cap stage at E14.5. (B) The bell stage at E17.5. (C) The terminal differentiation stage at PN3. (D?F) Developmental process of a reaggregated tooth germ. (D) The cap stage after 4 days kidney capsule culture. (E) The bell stage after 8 days kidney capsule culture. (F) The terminal differentiation stage after 14 days kidney capsule culture. Abbreviation: d, dentin; e, enamel; p, dental pulp; am, ameloblast; de, dental epithelium; dp, dental pappila;od, odontoblast; pn, postnatal; iee, inner enamel epithelium; oee, outer enamel epithelium.

圖3Fgf8、Noggin和Shh在正常和重聚牙胚上皮中的表達(dá)Fig.3 Expression ofFgf8,Noggin, andShhin the epithelium of nornal and reaggregated tooth germs. (A?C) The expression of tooth developmental genes in the dental epithelia of the normal molar tooth germ at the bud stage. (A) Expression ofFgf8. (B)Expression ofNoggin. (C) Expression ofShh. (D?F) The expression of tooth developmental genes in the dental epithelia of the reaggregated tooth germ after 3 or 6 days kidney capsule culture. (D) Expression ofFgf8. (E) Expression ofNoggin. (F) Expression ofShh. Abbreviation: de, dental epithelium.

3 討論

牙齒的發(fā)育與其他器官的發(fā)育一樣，上皮組織與間充質(zhì)之間存在誘導(dǎo)和被誘導(dǎo)的關(guān)系。就牙齒發(fā)育而言，作為誘導(dǎo)者，能誘導(dǎo)相鄰組織表達(dá)特定基因并指導(dǎo)牙齒發(fā)生的組織，稱該組織具有誘導(dǎo)牙齒發(fā)育的潛能 (Odontogenic potential)。反之，能對(duì)具有誘導(dǎo)牙齒發(fā)育潛能的組織的發(fā)育信號(hào)起反應(yīng)，而被誘導(dǎo)進(jìn)入牙齒發(fā)生過(guò)程的組織，我們稱該組織具有牙齒發(fā)育的被誘導(dǎo)潛能 (Odontogenic competence)。只有具有誘導(dǎo)牙齒發(fā)育潛能的組織存在時(shí)，牙齒的發(fā)育才能得以進(jìn)行。經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)胚胎學(xué)組織重組實(shí)驗(yàn)證明，誘導(dǎo)牙齒發(fā)育潛能先是位于牙上皮，隨后轉(zhuǎn)移到牙間充質(zhì)。在 E11.5天時(shí)，將牙上皮與頭面部非牙源性的間充質(zhì)組織重組后，能發(fā)育形成牙齒的結(jié)構(gòu)。因而，此時(shí)牙齒發(fā)育的潛能位于牙上皮中。而到了 E12.5天后，誘導(dǎo)牙齒發(fā)育的潛能則轉(zhuǎn)移到牙胚組織的間充質(zhì)中，此時(shí)將牙上皮與其他間充質(zhì)組織重組不能形成牙齒的結(jié)構(gòu)。而牙間充質(zhì)與非牙上皮組織重組則能誘導(dǎo)該上皮發(fā)育形成牙齒的結(jié)構(gòu)[15-16]。而且，哺乳動(dòng)物的牙胚具備獨(dú)特的發(fā)育性能。將磨牙牙胚組織解離成單細(xì)胞，這些細(xì)胞能保持牙向分化的潛能，重新聚合后，能重新啟動(dòng)牙齒器官的發(fā)育程序，發(fā)育形成組織結(jié)構(gòu)完整的牙齒器官[13]。從時(shí)間上，形態(tài)學(xué)發(fā)生過(guò)程與正常牙齒的發(fā)育明顯出現(xiàn)延遲。發(fā)育延遲的原因主要是在聚合后牙齒的重新發(fā)育過(guò)程中，牙上皮細(xì)胞和牙間充質(zhì)細(xì)胞出現(xiàn)了分離和聚合的過(guò)程。在聚合的組織塊中，牙上皮細(xì)胞自發(fā)地與牙間充質(zhì)細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)，聚合形成牙上皮組織，然后才重新啟動(dòng)牙齒發(fā)育的形態(tài)學(xué)過(guò)程，包括蕾狀期、帽狀期、鐘狀期和終末分化期等，重現(xiàn)了正常的發(fā)育過(guò)程。本研究進(jìn)一步支持了領(lǐng)域中的觀點(diǎn)，即再生的過(guò)程是重新發(fā)育的過(guò)程。

Fgf8、Noggin和Shh都是牙齒早期發(fā)育過(guò)程中在牙上皮中表達(dá)的基因。FGF8與牙齒發(fā)育過(guò)程中牙間充質(zhì)中Bax1、Lhx6和Lhx7等多種與模式形成和形態(tài)發(fā)生密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的誘導(dǎo)表達(dá)有關(guān)[2]。Bmp2，Bmp4和Bmp7等均在牙上皮和釉節(jié)中表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞分裂與凋亡，決定牙尖的數(shù)目形成部位，即牙齒的模式。Noggin是 BMP信號(hào)的拮抗物，可以調(diào)控 BMP信號(hào)的強(qiáng)度。SHH是牙胚早期不可缺少的生長(zhǎng)因子。E13.5的牙上皮細(xì)胞雖然已經(jīng)失去了誘導(dǎo)牙齒分化的潛能，但仍保持著牙齒發(fā)育的被誘導(dǎo)潛能。我們的研究結(jié)果表明，這些牙上皮細(xì)胞被解離成單細(xì)胞，進(jìn)而自發(fā)重聚成牙上皮后，仍然表達(dá)了牙上皮在牙齒發(fā)育過(guò)程所表達(dá)的基因，從而導(dǎo)致重現(xiàn)牙齒的正常發(fā)育過(guò)程，發(fā)育形成牙齒。因此我們推測(cè)，解離的牙上皮細(xì)胞在重聚形成牙上皮之前，即使是被解離的單個(gè)細(xì)胞，仍能保持牙向分化所需的牙齒發(fā)育基因的表達(dá)。E13.5的牙間充質(zhì)細(xì)胞具有誘導(dǎo)牙齒發(fā)育的潛能，解離的牙上皮細(xì)胞之所以能保持牙齒發(fā)育基因的表達(dá)，可能是通過(guò)與牙間充質(zhì)細(xì)胞的相互作用，從而維持了牙向分化的潛能。

近年來(lái)的研究表明，在成體的牙組織中存在多種干細(xì)胞，具有牙向分化的潛能，在特定的誘導(dǎo)條件下能形成牙本質(zhì)等牙齒組織。但是，這些干細(xì)胞都是間充質(zhì)源性的，只能被誘導(dǎo)形成間充質(zhì)源性的牙組織[17]。牙上皮將發(fā)育形成成釉質(zhì)細(xì)胞層，完成釉質(zhì)分泌后凋亡，不復(fù)存在。因此，無(wú)法分離到牙上皮源性的干細(xì)胞。在組織工程牙齒的研究中，利用皮膚的表皮干細(xì)胞，誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞進(jìn)行牙上皮的誘導(dǎo)分化，是重要的研究?jī)?nèi)容之一。我們已有的研究證實(shí)，利用小鼠的牙間充質(zhì)的誘導(dǎo)牙齒發(fā)育的潛能，可以將人的皮膚表皮干細(xì)胞誘導(dǎo)形成可分泌牙釉質(zhì)的成釉質(zhì)細(xì)胞[18]。本研究結(jié)果表明，解離的牙上皮細(xì)胞在重聚和再生過(guò)程中保持Fgf8、Noggin和Shh等牙上皮發(fā)育基因表達(dá)。這一結(jié)果提示我們，在利用干細(xì)胞進(jìn)行組織工程牙齒制備的研究中，如果能夠激活牙向分化基因的表達(dá)，可誘導(dǎo)干細(xì)胞的牙向分化，包括牙上皮的分化。

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Dissociated mouse tooth germ epithelial cells retain the expression of tooth developmental genes during reaggregation process

Xuefeng Hu, Chensheng Lin, Bingmei Wang, Pingping Han, and Yanding Zhang

Key Laboratory of Developmental and Neuro Biology of Fujian Province,College of Life Sciences,Fujian Normal University,Fuzhou350108,China

Received:July 14, 2010;Accepted:September 2, 2010

Supported by:National Basic Research Program of China (973 Program) (No. 2010CB944802), National Natural Science Foundation of China(No. 30771132), Fujian Natural Science Foundation (No. 2010J01143), Specialized Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education(No. 20093503110001).

Corresponding author:Yanding Zhang. Tel: +86-591-22868218; Fax: +86-591-22868199; E-mail: ydzhang@fjnu.edu.cn

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃 (973計(jì)劃) (No. 2010CB944802)，國(guó)家自然科學(xué)基金 (No. 30771132)，福建省自然科學(xué)基金 (No. 2010J01143)，高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金 (No. 20093503110001) 資助。