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    親子鑒定中男性個(gè)體Amelogenin基因座X片斷缺失一例報(bào)道

    2010-09-21 08:48:42胡錫階劉祖林萬(wàn)衛(wèi)紅

    胡錫階,劉祖林,萬(wàn)衛(wèi)紅

    (1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院法醫(yī)學(xué)鑒定中心法醫(yī)物證鑒定技術(shù)室,貴州遵義563003)

    親子鑒定中男性個(gè)體Amelogenin基因座X片斷缺失一例報(bào)道

    胡錫階1,2,劉祖林1,2,萬(wàn)衛(wèi)紅1,2

    (1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院貴州省細(xì)胞工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院法醫(yī)學(xué)鑒定中心法醫(yī)物證鑒定技術(shù)室,貴州遵義563003)

    男性個(gè)體;Amelogenin基因座;X片斷缺失;報(bào)道

    我鑒定中心對(duì)親子鑒定案例進(jìn)行鑒定分析時(shí),檢出1例男性個(gè)體Amelogenin基因座X片斷缺失,其STR分型圖上只存在Y染色體Amelogenin擴(kuò)增產(chǎn)物,而無(wú)X染色體Amelogenin特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,出現(xiàn)AMELX等位基因缺失,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 對(duì)象和方法

    1.1 對(duì)象親子鑒定受檢者爭(zhēng)議父37歲(實(shí)驗(yàn)室編號(hào):2008-0035-1),子5歲(實(shí)驗(yàn)室編號(hào):2008-0035-2)。

    1.2 方法DNA的提取采用固相法提取,檢材為EDTA-K2抗凝靜脈血;試劑為Qiagen公司的Generation Capture Column;用美國(guó)ABI公司的產(chǎn)品AmpFlSTR誖IdentifilerTM試劑分別對(duì)15個(gè)STR基因座(D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539D、2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA、)和1個(gè)性別基因座Amelogenin按技術(shù)手冊(cè)所給條件進(jìn)行PCR復(fù)合擴(kuò)增,3100 Avant遺傳分析儀進(jìn)行電泳分離,并通過(guò)GeneScan Software V3.7軟件、Genotyper Software V3.7軟件進(jìn)行DNA的STR基因分型。后加做Promega公司的PowerPlex16體系,除Amelogenin等相同基因座外,增加其獨(dú)有的Penta D、Penta E基因座,使檢測(cè)基因座增加到17個(gè)。等位基因分型結(jié)果見(jiàn)表1,Amelogenin基因座分型圖譜見(jiàn)圖1、圖2。

    2 結(jié)果和討論

    表1 STR基因分型結(jié)果

    圖1 Identifile體系STR分型的Amelogenin基因座圖譜A:等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物ladder;B:父;C:子。父親檢樣的AMELX等位基因缺失,只存在AMELY等位基因

    從表1分析可以看到,常染色體上的17個(gè)STR基因座的分型在此案例中都符合孟德?tīng)栠z傳規(guī)律,經(jīng)計(jì)算其PI(父權(quán)指數(shù))為5243925.22,RCP(父權(quán)相對(duì)機(jī)會(huì))為99.999980930%;盡管父親的X染色體上Amelogenin等位基因缺失,但大多數(shù)情況下在STR分型中Amelogenin只是生物樣本性別鑒別的有效方法,并不用于親權(quán)指數(shù)的計(jì)算,也不影響親權(quán)結(jié)論的得出,因此在這個(gè)案例中我們作出的是認(rèn)定親生血緣關(guān)系的結(jié)論。

    圖2 PowerPlex16體系STR分型的Amelogenin基因座圖譜A:子;B:父;C:等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物ladder。父親檢樣的AMELX等位基因缺失,只存在AMELY等位基因

    Amelogenin是編碼牙釉蛋白的基因,為X、Y染色體同源基因,其特異PCR引物最早由FSS(英國(guó)法庭科學(xué)服務(wù)部)設(shè)計(jì),這種引物PCR擴(kuò)增X和Y染色體可同時(shí)分別得到106pb和112bp的特異性產(chǎn)物[1]。正常男性的Amelogenin基因座分型表現(xiàn)為XY,正常女性則分型表現(xiàn)為XX。本案例在用Identifiler體系進(jìn)行分析時(shí),發(fā)現(xiàn)爭(zhēng)議父的Amelogenin基因座的分型圖譜上只存在Y特異片段的譜帶,而無(wú)X特異片段的譜帶,出現(xiàn)AMELX等位基因缺失。不同公司設(shè)計(jì)的引物有可能存在差異,利用不同公司試劑盒檢測(cè)相同基因座能在較大程度上避免產(chǎn)生無(wú)效等位基因,因此,為了避免不同STR商品試劑盒中引物帶來(lái)的影響,我們用PowerPlex16體系來(lái)再次驗(yàn)證分析結(jié)果,性別基因座Amelogenin上同樣是X片斷缺失,兩個(gè)不同公司試劑盒檢測(cè)結(jié)果一致,可以不考慮“假”突變。

    本鑒定中心是首次發(fā)現(xiàn)這種缺失,有資料顯示這一現(xiàn)象在男性的檢驗(yàn)中是3/7000的比例[1]。通常情況下,無(wú)論是具有正常染色體核型的男性(46,XY)和女性(46,XX),還是性反轉(zhuǎn)病人(46,XX男性和46,XY女性),因都不可能缺少X染色體,所以AMELX等位基因缺失變異不會(huì)導(dǎo)致性別的錯(cuò)判,但如果在產(chǎn)前診斷中,通過(guò)這種方法進(jìn)行性染色體數(shù)目異常定量檢測(cè)[2],對(duì)一些核型是47,XXY(Klinefelter綜合征)的胚胎,可造成染色體數(shù)目判斷錯(cuò)誤,從而干擾產(chǎn)前診斷的結(jié)果。陳愛(ài)萍等對(duì)這種AMELX等位基因缺失的樣本進(jìn)行了序列分析,結(jié)果顯示在其引物結(jié)合區(qū)發(fā)生了兩種類型的點(diǎn)突變,并報(bào)道其突變率為0.042%[3],這些突變影響了引物與DNA模板的結(jié)合和DNA鏈的延伸,導(dǎo)致擴(kuò)增失敗,造成AMELX等位基因的缺失。另外,STR分型時(shí)Amelogenin基因座的非正常結(jié)果不僅出現(xiàn)在X染色體上,Y染色體上也有Amelogenin等位基因的缺失[4],AMELY等位基因的缺失常導(dǎo)致DNA的STR分型時(shí)男性被誤判為女性,如果用此方法進(jìn)行產(chǎn)前性別鑒定[5],可造成伴性遺傳病胎兒出生的風(fēng)險(xiǎn),也可在一些刑偵案件上造成性別錯(cuò)判,因此,對(duì)于這些個(gè)案,我們應(yīng)引起高度的重視。在這次鑒定分析中,爭(zhēng)議父除了進(jìn)行DNA的STR分型,還作了染色體核型分析,其核型為正常的46,XY。

    [1]布爾特爾(John M.Butler).法醫(yī)DNA分型[M].北京:科學(xué)出版社,2007.84-85.

    [2]陳萱,李佩玲,王雪清,等.應(yīng)用Amelogenin基因進(jìn)行胎兒和兩性畸形病人性別判定的研究[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志,2004,20(12):735-736.

    [3]陳愛(ài)萍,陳勇,王會(huì)品,等.中國(guó)人群Amelogenin基因的突變頻率和突變類型[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2007,24(6):615-619.

    [4]曾于寶,聶勝潔,唐文如,等.男性個(gè)體Amelogenin基因座Y片段缺失1例[J].法律與醫(yī)學(xué)雜志,2007,14(3):235-237.

    [5]鹿亞超,朱斌,姜海燕,等.孕婦血漿Amelogenin基因6bp差異檢測(cè)對(duì)產(chǎn)前胎兒性別的鑒定價(jià)值[J].蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2005,25(3):417-418.

    R394.3[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B[文章編號(hào)]1000-2715(2010)01-0079-02

    2009-12-30]

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