GATA3在乳腺癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

謝軼群 裔海鷹 施俊義 李曦洲 隋金珂

1.第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院普外科，上海 200433；2.上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院乳腺外科，上海 200002

GATA3屬于GATA轉(zhuǎn)錄因子家族［1］，能調(diào)節(jié)多種細(xì)胞類型的遺傳分化方向(lineage determination)。其中包括自主神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元、T輔助細(xì)胞、毛囊的毛根內(nèi)鞘、脂肪細(xì)胞、腎病腎管(nephritic ducts of the kidney)、耳蝸及乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞［2-4］。近期國(guó)外研究表明GATA3作為轉(zhuǎn)錄因子 與正常乳腺組織以及乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，同時(shí)與乳腺癌的預(yù)后也可能相關(guān)。目前，國(guó)內(nèi)相關(guān)研究未見報(bào)道，而國(guó)外相關(guān)研究尚存爭(zhēng)議。為探討GATA3與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系，本研究采用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)乳腺癌組織中GATA3的表達(dá)，分析其與其他臨床病理指標(biāo)以及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 標(biāo)本及主要試劑

1.1.1 一般資料及組織標(biāo)本 所有標(biāo)本均系抽取上海市黃浦區(qū)中心醫(yī)院 乳腺外科2004—2005年間手術(shù)切 除的乳腺癌組織標(biāo)本，共100例，并經(jīng)病理HE染色和本院2位以上病理科醫(yī)師確診。各組織 標(biāo)本均有完整術(shù)后病理資料：其中導(dǎo)管原位癌13例，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌56例，浸潤(rùn)性小葉癌22例，浸潤(rùn)性神經(jīng)內(nèi)分泌癌2例，黏液腺癌4例，派杰氏病3例；其中ER(＋)70例，2 4例伴有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以術(shù)后病理檢查為準(zhǔn))。乳腺癌 患者手術(shù)前均未經(jīng)過抗癌治療(包括放療、化療及內(nèi)分泌治療等)。乳腺癌患者均為女性，年齡26～83歲(平均55歲)。

1.1.2 主要試劑 GATA3多克隆兔抗人抗體購(gòu)自上海億欣生物科技有限公司；EnVision試劑購(gòu)自上海藍(lán)創(chuàng)生物科技發(fā)展有限公司；對(duì)二甲胺基偶氮苯(DAB)顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

免疫組化染色：所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，經(jīng)常規(guī)脫水透明石蠟包埋，做4 μm厚連續(xù)切片，備常規(guī)HE染色及免疫組織化學(xué)染色，免疫組織化學(xué)染色采用EnVision法。根據(jù)一抗說明書要求進(jìn)行前處理。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水后，以3%H2O2室溫下溫育10 min以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。石蠟切片浸入0.05 mol/L EDTA pH=8.0的緩沖液微波(98 ℃)加爐熱10 min，重復(fù)2次，自然冷卻20 min，進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。滴加一抗兔抗GATA3多克隆抗體(1∶100)，4 ℃溫育過夜。滴加酶標(biāo)記的二抗(EnVision試劑)，室溫濕盒中溫育60 min。DAB顯色3 min，蘇木精襯染，常規(guī)酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，光鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)中以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，以已知陽性片作陽性對(duì)照，以確保實(shí)驗(yàn)的特異度和靈敏度。

1.3 結(jié)果判定

GATA3染色陽性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)：乳腺癌細(xì)胞胞核中出現(xiàn)棕褐色顆粒染色為GATA3陽性表達(dá)細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，按陽性細(xì)胞數(shù)占同類細(xì)胞的百分比分類，陽性細(xì)胞數(shù)≥20%為GATA3表達(dá)陽性切片［5］。ER、PR、Her-2均記為(+)和(-)。ER(+)為原術(shù)后病理資料ER(+～+++)；ER(-)為原術(shù)后病理資料ER(-)。PR(+)為原術(shù)后病理資料PR(+～+++)；PR(-)為原術(shù)后病理資料PR(-)。Her-2(+)為原術(shù)后病理資料Her-2(+++)；Her-2(-)為原術(shù)后病理資料Her-2(-～++)。乳腺癌組織病理類型、腫瘤組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)均以原術(shù)后病理資料為判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 隨訪

本組全部100例乳腺癌均從病理確診時(shí)開始計(jì)算生存時(shí)間，隨訪截止時(shí)間為2010年3月。失訪8例，隨訪率92%，中位隨訪時(shí)間約5.3年。

1.5 統(tǒng)計(jì)處理

采用SPSS 11.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。GATA3在乳腺癌中的表達(dá)與其他臨床病理指標(biāo)、預(yù)后的關(guān)系，均采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，其中相關(guān)性采用Spearman相關(guān) 系數(shù)r表示；GATA3在ER陽性并接受他莫昔芬治療的患者中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系，采用Fish確切概率法進(jìn)行分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 乳腺癌中GATA3的表達(dá)與其他臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

乳腺癌中可見有GATA3的陽性表達(dá)，為深棕色及棕黃色顆粒，細(xì)胞核著色。GATA3的低表達(dá)與腫瘤高組織分級(jí)、淋巴結(jié)陽性、ER陰性狀態(tài)、PR陰性、Her-2/neu過度表達(dá)等表示預(yù)后較差的指標(biāo)相關(guān)(P<0.05)，但與確診年齡、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05，表1)。

2.2 所有乳腺癌患者中GATA3的表達(dá)與預(yù)后的關(guān) 系

本組100例乳腺癌患者中，獲得隨訪92例，失訪8例。GATA3陽性組55例，死亡9例，5年總生存率為83.6%；GATA3陰性組37例，死亡14例，5年總生存率為62.2%。經(jīng)χ2檢驗(yàn)分析，本組乳腺癌患者中GATA3的表達(dá)水平與預(yù)后相關(guān)(P=0.02)，提示在乳腺癌患者中GATA3表達(dá)陽性者預(yù)后較好(表2)。

表1 乳腺癌中GATA3的表達(dá)與其他臨床病理指標(biāo)的關(guān)系Tab.1 T he relationship between GATA3 expression and other clinicopathologic factors

2.3 ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中GATA3的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

本組全部病例中，ER陽性70例(均接受他莫昔芬治療5年)，獲得隨訪64例，失訪6例。GATA3陽性組49例，死亡6例，5年總生存率為87.8%；GATA3陰性組15例，死亡6例，5年總生存率為60.0%。經(jīng)Fish確切概率法分析，本組ER陽性乳腺癌患者中GATA3的表達(dá)水平與預(yù)后相關(guān)(P=0.03)，提示在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中GATA3表達(dá)陽性者，預(yù)后較好(表3)。

表2 GATA3與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系Tab.2 The relationship between GATA3 and the prognosis in breast carcinoma

表3 ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中GATA3與預(yù)后的關(guān)系Tab.3 The relationship between GATA3 and the prognosis in ER-positive breast carcinoma with tamoxifen therapy

3 討 論

GATA3屬于GATA轉(zhuǎn)錄因子家族(成員包括GATA1至GATA6)，它們以高親和力結(jié)合于共同序列(A/T)GATA(A/G)，共有一個(gè)類固醇激素受體超家族的C4鋅指結(jié)構(gòu)DNA結(jié)合基序［1］，定位于染色體10p15［6］。GATA家族依據(jù)結(jié)構(gòu)特征和表達(dá)模式被分為兩大類：第一類GATA1、GATA2和GATA3主要在造血細(xì)胞中表達(dá)，而第二類GATA4、GATA5和GATA6則主要在心血管系統(tǒng)及包括肝、肺、胰腺和腸道在內(nèi)的內(nèi)胚層來源的組織中表達(dá)［7］。研究證實(shí)，GATA3促成了多種組織的正常發(fā)育［2-4］。

本研究顯示在56例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中腫瘤組織學(xué)分級(jí)與GATA3的陽性表達(dá)顯著相關(guān)(P<0.01，r=0.39)，提示腫瘤組織學(xué)分級(jí)越高，GATA3表達(dá)率越低。這說明GATA3是重要的分化調(diào)節(jié)因子，不僅能促進(jìn)乳腺細(xì)胞的分化，同樣能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的分化。本研究還顯示在84例浸潤(rùn)性乳腺癌中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。浸潤(rùn)性乳腺癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)與GATA3陽性表達(dá)相關(guān)(P=0.01，r=-0.27)，提示在浸潤(rùn)性乳腺癌中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者GATA3表達(dá)率低?？梢?，GATA3在乳腺癌中的表達(dá)與乳腺癌的分化水平、轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。在分化好、轉(zhuǎn)移性低的乳腺癌細(xì)胞中，GATA3往往呈陽性表達(dá)。

本研究顯示GATA3的低表達(dá)與腫瘤高組織分級(jí)、淋巴結(jié)陽性、ER陰性狀態(tài)、PR陰性狀態(tài)、Her-2/neu過度表達(dá)等表示預(yù)后較差的指標(biāo)相關(guān)，但與確診年齡、腫瘤大小無關(guān)，與國(guó)外研究相符［5,8-9］。此外，本研究顯示GATA3與ER密切相關(guān)(r=0.49，P<0.01)。

故我們先后對(duì)GATA3在全部乳腺癌患者中以及在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中判斷預(yù)后的作用進(jìn)行了研究。本研究顯示乳腺癌患者中GATA3的表達(dá)水平與預(yù)后相關(guān)(P=0.02)，提示在乳腺癌患者中GATA3表達(dá)陽性者，預(yù)后較好。本研究還顯示在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中GATA3的表達(dá)水平與預(yù)后相關(guān)(P=0.03)，提示在ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中GATA3表達(dá)陽性者，預(yù)后較好。

GATA3在乳腺癌預(yù)后分析中的作用是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一，相關(guān)研究結(jié)果也存在分歧。Mehra等［8］發(fā)現(xiàn)，在預(yù)后很差的浸潤(rùn)性癌中GATA3為主要的低表達(dá)基因之一，GATA3低表達(dá)的腫瘤較高表達(dá)的腫瘤生存期明顯縮短。但Voduc等［9］對(duì)3 119例浸潤(rùn)性乳腺癌病例的研究發(fā)現(xiàn)，雖然單因素分析中GATA3的表達(dá)是預(yù)后較好的標(biāo)志，但多因素(包括患者年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)狀態(tài)、ER狀態(tài)、Her-2狀態(tài)等)分析中，GATA3并不是獨(dú)立的預(yù)后因子。同時(shí)在ER陽性的患者中，無論是否接收他莫昔芬治療，GATA3均不是獨(dú)立的預(yù)后因子。Ciocca等［10］在一項(xiàng)10年隨訪研究中發(fā)現(xiàn)，GATA3陽性和陰性的腫瘤之間復(fù)發(fā)率和生存率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而在ER陽性并接受內(nèi)分泌治療的患者中，GATA3的表達(dá)具有中強(qiáng)度預(yù)后價(jià)值。Jacquemier等［11］發(fā)現(xiàn)，在240例接受激素治療的ER陽性乳腺癌患者中，多因素分析顯示GATA3、血管癌旁浸潤(rùn)(vascular peritumoral invasion，VPI)、Ki67、P53 的預(yù)

后價(jià)值有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢姡珿ATA3在判斷預(yù)后中是否具有價(jià)值存在爭(zhēng)議。本研究顯示其表達(dá)與ER表達(dá)高度相關(guān)，而ER在乳腺癌中具有重要的指導(dǎo)內(nèi)分泌治療及判斷預(yù)后的作用。因此，結(jié)合國(guó)外學(xué)者相關(guān)研究，我們認(rèn)為在分析GATA3判斷乳腺癌預(yù)后中的作用時(shí)應(yīng)充分考慮ER作用的影響，否則GATA3的作用與ER的作用將難以區(qū)分。我們建議首先在ER陽性的患者中進(jìn)行GATA3判斷預(yù)后價(jià)值的研究。綜上所述，GATA3在判斷預(yù)后中的作用仍有爭(zhēng)議，本研究顯示GATA3在乳腺癌患者以及ER陽性并接受他莫昔芬治療的乳腺癌患者中GATA3表達(dá)陽性者，預(yù)后均較好。

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