超微粉碎對(duì)羚玳息風(fēng)丸溶出特性的影響＊

孫文格，趙午申

(1.河北省石家莊市中醫(yī)院，河北 石家莊 050051; 2.河北省邢臺(tái)市中醫(yī)院，河北 邢臺(tái) 054001)

羚玳息風(fēng)丸是根據(jù)我國(guó)名中醫(yī)邢月朋主任中醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)方制成的純中藥制劑，具有滋陰潛陽(yáng)、涼肝息風(fēng)等功效，用于陰虛肝熱所致的頭痛眩暈、偏頭痛、煩躁失眠、目赤、急躁易怒。將超微粉碎技術(shù)應(yīng)用到該制劑工藝中，所制產(chǎn)品的臨床療效較好[1]。本研究旨在利用薄層色譜半定量法和高效液相色譜法對(duì)羚玳息風(fēng)丸(超微細(xì)粉和傳統(tǒng)蜜丸兩種蜜丸)的黃芩苷和延胡索乙素進(jìn)行定性、定量測(cè)定，探討超微粉碎技術(shù)對(duì)其溶出特性的影響。

1 儀器與試藥

島津2010型高效液相色譜儀;AUW-220D型電子分析天平;5210DT型超聲處理器(功率250 W，頻率33 kHz);WKZ-10型超微粉碎機(jī)(山東青州精誠(chéng)機(jī)械制造公司);BT-1500型離心沉降式粒度分布儀。延胡索乙素對(duì)照品(批號(hào)為110726-200809)，黃芩苷對(duì)照品(批號(hào)為110715-200815)，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;羚玳息風(fēng)丸(超微細(xì)粉，批號(hào) 20081026，20081105，20081207)，羚玳息風(fēng)丸(傳統(tǒng)蜜丸，批號(hào)為 20080326，20080606，20080810)，均由石家莊市中醫(yī)院生產(chǎn);甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

超微細(xì)粉丸:按處方比例稱取羚羊角絲、玳瑁、天麻等藥材適量，先粗粉碎，過(guò)3號(hào)篩，再放入超微粉碎機(jī)，粉碎1 h。經(jīng)測(cè)試，粒度在10 μm以下者大于95%。每100 g超微細(xì)粉加煉蜜70 g，制成小蜜丸。

傳統(tǒng)蜜丸:按處方比例稱取羚羊角絲、玳瑁、天麻等藥材適量，粉碎成細(xì)粉。每100 g細(xì)粉加煉蜜70 g，制成小蜜丸。

2.2 定性測(cè)定(薄層色譜半定量法)

極性目標(biāo)成分黃芩苷:分別取超微細(xì)粉丸和傳統(tǒng)蜜丸各5 g，加硅藻土5 g，研勻，加甲醇25 mL，超聲處理5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，制得供試品溶液A和B;另取超微細(xì)粉丸和傳統(tǒng)蜜丸各5 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液同上處理，作為供試品溶液C和D;再取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液A，C，D的斑點(diǎn)大小相等、顏色相同，而供試品溶液B則幾乎無(wú)斑點(diǎn)(圖1)。

脂溶性目標(biāo)成分延胡索乙素:分別取超微細(xì)粉丸和傳統(tǒng)蜜丸各 5 g，加硅藻土 5 g，研勻，加甲醇 25 mL，超聲處理 5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，制得供試品溶液A和B;另取超微細(xì)粉丸和傳統(tǒng)蜜丸各5 g，加硅藻土 5 g，研勻，加甲醇 25 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液同前處理，作為供試品溶液C和D;再取延胡索乙素對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗(yàn)，吸取上述5種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5∶4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果供試品溶液A，C，D色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，其中供試品溶液A和C與對(duì)照品溶液色譜的斑點(diǎn)大小相等，供試品溶液D的斑點(diǎn)略小于C，供試品溶液B則幾乎無(wú)斑點(diǎn);在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365 nm)下檢視，熒光斑點(diǎn)差異同前(圖2)。

圖1 黃芩苷薄層鑒別色譜圖

2.3 延胡索乙素含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[2]

色譜柱:DiscoveryC18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.1%磷酸(三乙胺調(diào)pH至6.0)-甲醇(45∶55);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL。在此色譜條件下，左旋延胡索乙素與相鄰的色譜峰分離完全，以延胡索乙素峰計(jì)理論板數(shù)為5 000，陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾(圖3)。

圖2 延胡索乙素薄層鑒別色譜圖

圖3 延胡索乙素含量測(cè)定高效液相色譜圖

2.3.2 溶液制備

精密稱取延胡索乙素對(duì)照品50.32 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液10 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取超微細(xì)粉丸和傳統(tǒng)蜜丸各約1 g，精密稱定，各加硅藻土1 g，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)的混合溶液50 mL，密塞，精密稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用濃氨試液-甲醇(1∶20)的混合溶液補(bǔ)足質(zhì)量，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取不含延胡索的陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液 1，2，3，4，5 mL，分別置50 mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按擬訂的色譜條件分別進(jìn)樣，記錄延胡索乙素峰面積值。以峰面積積分值(Y)對(duì)對(duì)照品質(zhì)量濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=4.23 X-6.30，r=0.999 1(n=5)。結(jié)果表明，延胡索乙素對(duì)照品質(zhì)量濃度在 2.062～202.10 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積的 RSD=0.73%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):分別取超微細(xì)粉丸(批號(hào)為20081026)和傳統(tǒng)蜜丸(批號(hào)為20080326)，按2.4.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0，1，2，3，4，5，6 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果超微細(xì)粉丸的 RSD=0.88%(n=7)，傳統(tǒng)蜜丸的 RSD=0.98%(n=7)，表明供試品溶液在6 h內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):分別取超微細(xì)粉丸(批號(hào)為20081026)和傳統(tǒng)蜜丸(批號(hào)為20080326)各6份，按2.4.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果超微細(xì)粉丸和傳統(tǒng)蜜丸含量的 RSD=0.85%和 RSD=0.73%(n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):分別取已知含量的超微細(xì)粉丸(批號(hào)為20081026)和傳統(tǒng)蜜丸(批號(hào)為20080326)各5份，每份加入對(duì)照品0.5 mL，按2.4.2項(xiàng)下方法制備待測(cè)溶液，進(jìn)樣10 μL，分別測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3.4 樣品含量測(cè)定

對(duì)超微細(xì)粉丸和傳統(tǒng)蜜丸各取3批樣品，按2.4.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20081026，20081105，20081207的超微細(xì)粉丸中延索乙素的含量分別為 53.01，53.69，53.57 μg/g，平均 53.59 μg/g;批號(hào)為20080326，20080606，20080810的傳統(tǒng)蜜丸中延胡索乙素的含量分別為 37.26，37.19，37.17 μg/g，平均 37.21 μg/g。

3 討論

薄層色譜半定量法定性和高效液相色譜法定量結(jié)果表明，超微細(xì)粉丸指標(biāo)成分溶出量大于傳統(tǒng)蜜丸，延胡索乙素含量多于傳統(tǒng)蜜丸(P＜0.05)，故超微細(xì)粉丸的溶出特性優(yōu)于傳統(tǒng)蜜丸。這說(shuō)明超微粉碎有利于提高羚玳息風(fēng)丸的溶出速率和溶出量。當(dāng)然，羚玳息風(fēng)丸中尚含有其他多種成分，超微粉碎對(duì)這些成分有何影響，有待進(jìn)一步研究。

藥材經(jīng)超微粉碎后，細(xì)胞破壁率提高，大大增加了比表面積，使藥材中化學(xué)成分的溶出效率提高。丸劑是中藥傳統(tǒng)劑型之一，也是中成藥中所占比例最大的劑型，在2010年版《中國(guó)藥典(一部)》中收載的丸劑總數(shù)為320個(gè)，占制劑總數(shù)的30%。在丸劑的制備工藝中，粉碎工序非常關(guān)鍵。采用普通粉碎得到的藥材細(xì)粉粒徑分布寬，均一性差;而超微粉碎后粒徑分布變窄，均一性顯著提高。超微粉碎技術(shù)不僅有利于有效成分的溶出，又保證了丸劑本身的質(zhì)量，值得研究。

[1]孫文格，李 紅，鄭 倩.羚玳息風(fēng)丸應(yīng)用超微粉碎技術(shù)的臨床研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(3):609-610.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄Ⅵ B，130.