甲狀腺激素受體在大菱鲆組織細(xì)胞中的表達(dá)及其與甲狀腺激素的關(guān)系

田 娟,施志儀

(上海海洋大學(xué)生物技術(shù)研究中心,上海201306)

甲狀腺激素受體在大菱鲆組織細(xì)胞中的表達(dá)及其與甲狀腺激素的關(guān)系

田 娟,施志儀＊＊

(上海海洋大學(xué)生物技術(shù)研究中心,上海201306)

為了探討甲狀腺激素受體在大菱鲆(Scophthalmus maximus)體內(nèi)的表達(dá)情況及在細(xì)胞水平三碘甲狀腺原氨酸(T3)對(duì)甲狀腺激素受體(TR)表達(dá)量的影響,利用熒光定量PCR法檢測(cè)了大菱鲆8個(gè)組織中甲狀腺激素受體TRαA、TRβ的表達(dá)量,并設(shè)計(jì)了0,50,75,100和200 nmol/L 5個(gè)不同濃度的T3處理大菱鲆腎細(xì)胞(SMKC),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定T3處理后甲狀腺激素受體TRαA、TRβ的表達(dá)量。結(jié)果表明,甲狀腺激素受體TRαA、TRβ在大菱鲆不同組織中的表達(dá)量各不相同,但兩者均在腎臟組織中表達(dá)量最高。在不同濃度T3處理后甲狀腺激素受體的表達(dá)量存在明顯的差異,在低濃度條件下,TRαA、TRβmRNA的表達(dá)量增加,當(dāng)T3濃度達(dá)到100 nmol/L時(shí),TRαA、TRβmRNA表達(dá)量明顯降低,說明50,75 nmol/L的T3能夠引起細(xì)胞中甲狀腺激素受體TRαA、TRβ表達(dá)量的增加,而100,200 nmol/L的T3會(huì)相對(duì)抑制細(xì)胞中甲狀腺激素受體TRαA、TRβ的表達(dá)量。

大菱鲆;三碘甲狀腺氨酸(T3);甲狀腺激素受體(TR);大菱鲆腎細(xì)胞(SMKC);實(shí)時(shí)熒光定量PCR

脊椎動(dòng)物甲狀腺合成和分泌2種甲狀腺激素:三碘甲狀腺原氨酸(T3)和甲狀腺素(T4),它們?cè)诩棺祫?dòng)物的生長(zhǎng)和代謝過程中起著重要的作用。日本學(xué)者Inui等[1]研究發(fā)現(xiàn),用外源性甲狀腺素T4處理牙鲆后期仔魚,能夠促進(jìn)其提前變態(tài)并提高變態(tài)成活率,用抑制甲狀腺激素合成的硫脲處理,則使牙鲆后期仔魚變態(tài)停滯。唐嘯塵等[2]在用甲狀腺素T4分別處理變態(tài)前期和變態(tài)高峰期的斜帶石斑魚仔魚時(shí)發(fā)現(xiàn),高劑量與低劑量的T4對(duì)處于不同發(fā)育階段的斜帶石斑魚仔魚的影響作用各有差異。Miwa S等[3]對(duì)牙鲆變態(tài)發(fā)育過程研究發(fā)現(xiàn),甲狀腺激素T3與T4生物學(xué)效應(yīng)相似,并且T3相對(duì)T4具有更強(qiáng)的生物活性。

業(yè)已表明,甲狀腺激素產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)都是由甲狀腺激素受體介導(dǎo)[4-5],甲狀腺激素通過與其受體結(jié)合,調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá),以發(fā)揮其生物學(xué)作用。Yamano等[6-7]克隆了牙鲆甲狀腺激素受體(TRα和TRβ)基因,其中α又包括A型和B型,這二者和β型具有一定的差別,β型又分為2種序列相近的1和2亞型,二者序列高度相似,難以區(qū)分。在牙鲆受精卵中TRαA水平比較低,孵化后TRαA水平有所提高,變態(tài)前達(dá)到高峰期的一半,在變態(tài)高峰期達(dá)到最高水平,變態(tài)后又恢復(fù)較低水平[8]。施志儀等[9]研究發(fā)現(xiàn)在牙鲆變態(tài)發(fā)育期間,硫脲處理組與同日齡正常組相比,甲狀腺激素受體TRαA的表達(dá)水平增高;而甲狀腺激素處理組與同日齡正常組相比,甲狀腺激素受體TRαA的表達(dá)水平降低,表明甲狀腺素對(duì)變態(tài)期牙鲆TRαA基因表達(dá)可能有下降調(diào)節(jié)作用。Dace等[10]研究發(fā)現(xiàn)外源激素T3能誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物TRα1、TRβ2受體蛋白的快速降解,但不能誘導(dǎo)TRα2受體蛋白的降解。

大菱鲆(Scophthalmus maximus)屬于鰈形目(Pleuronectiformes)鲆科(Bothidae)菱鲆屬(Scophthalmus),在早期階段與牙鲆有相同的右眼移位變態(tài)發(fā)育過程,從生物進(jìn)化樹中分析也與牙鲆的親緣關(guān)系比較近。本研究以大菱鲆8個(gè)不同的組織及其腎細(xì)胞為材料,從體內(nèi)外研究甲狀腺激素受體的表達(dá)及其與三碘甲狀腺原氨酸(T3)的關(guān)系,為揭示鲆鰈魚類變態(tài)發(fā)育這一特殊生命現(xiàn)象以及激素與受體的關(guān)系提供新的資料。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

實(shí)驗(yàn)用大菱鲆成魚購(gòu)于上海銅川路水產(chǎn)市場(chǎng),在實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng);大菱鲆腎細(xì)胞(SMKC)由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所陳松林老師惠贈(zèng);DMEM培養(yǎng)基粉末、胎牛血清、Hepes、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)購(gòu)于Invitrogen;三碘甲狀腺原氨酸(T3)購(gòu)于Sigma公司;TRIzol、RNasin Ribonuclease Inhibitor、SY BR PremixEx Taq購(gòu)于TAKARA公司;M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶購(gòu)于Promage公司;

1.2 方法

1.2.1 大菱鲆各組織總RNA的提取與cDNA的合成

用手術(shù)剪準(zhǔn)確剪取大菱鲆腸、肌肉、脾臟、心臟、鰓、肝臟、腎臟及腦8個(gè)不同組織,生理鹽水洗凈后用TRizol試劑法提取8個(gè)組織的總RNA,分光光度計(jì)檢測(cè)其OD值,1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性,按Promage逆轉(zhuǎn)錄酶說明書反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理 SMKC用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),培養(yǎng)基中含15%胎牛血清、青霉素100 U/mL、鏈霉素100μg/mL、bFGF 2 ng/mL、Hepes 20 mmol/L,置于24℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞長(zhǎng)滿整瓶后用0.25%胰酶消化傳入六孔板中,待細(xì)胞長(zhǎng)滿孔板更換新鮮培養(yǎng)基,同時(shí)加入甲狀腺激素T3溶液作用12 h,參照Dace等[10]對(duì)GC細(xì)胞的實(shí)驗(yàn),設(shè)計(jì)了T3的處理濃度分別為0,50,75,100和200 nmol/L,重復(fù)3次。

1.2.3 總RNA的提取與cDNA的合成 PBS溶液沖洗細(xì)胞2次后用TRIzol法提取細(xì)胞的總RNA,分光光度計(jì)檢測(cè)其OD值,1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性,按Promage逆轉(zhuǎn)錄酶說明書反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。

1.2.4 引物設(shè)計(jì) 參照GenBank中大菱鲆TRαA (AF302253)、TRβ(AF302254)和β-actin(A Y008305)的相關(guān)序列,分別設(shè)計(jì)了各基因的特異性引物(見表1)。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所用引物Table 1 Primers used for Real-time quantitative PCR analysis

1.2.5 常規(guī)PCR擴(kuò)增 PCR反應(yīng)體系為:10×PCR Buffer(含Mg2+)2.5μL、dNTP 2μL、10μmol/L上下游引物各0.5μL、5 U/μL的TaqDNA酶0.2μL、反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物0.5μL,補(bǔ)充ddH2O至25μL。反應(yīng)條件為:94℃預(yù)變性3 min;94℃變性30 s、60℃退火30 s、72℃延伸30 s,共35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min。1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。擴(kuò)增產(chǎn)物回收純化后測(cè)序檢測(cè)。

1.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

1.2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 樣品cDNA進(jìn)行10倍系列稀釋,以稀釋后的cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,每個(gè)模板重復(fù)2次。反應(yīng)體系為:SYBR Premix ExTaq(2×)10μL、10μmol/L上下游引物各0.4μL、cDNA模板2μL,加ddH2O至20μL。反應(yīng)條件為:(1)95℃預(yù)變性1 min;(2)95℃變性10 s、60℃退火30 s、72℃延伸30 s,共40個(gè)循環(huán);(3)融解曲線制備:55～90℃,每0.5℃收集1次熒光信號(hào),共71個(gè)循環(huán)。

1.2.6.2 目的基因的定量 對(duì)樣品cDNA進(jìn)行目的基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增,反應(yīng)體系及反應(yīng)條件同

1.2.6.1 ,每個(gè)樣品重復(fù)3次。

1.2.6.3 數(shù)據(jù)分析 根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果,以β-actin為參照基因,根據(jù)目的基因及β-actin的Ct值,按照2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因的表達(dá)情況。運(yùn)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行多重比較分析差異顯著性,P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大菱鲆各組織及SM KC中TRαA、TRβ的表達(dá)情況

對(duì)大菱鲆8個(gè)不同組織及SM KC進(jìn)行了TRαA和TRβ的擴(kuò)增,發(fā)現(xiàn)8個(gè)不同組織和SM KC中均檢測(cè)到TRαA、TRβ基因的表達(dá)(見圖1)。

圖1 SMKC及大菱鲆8個(gè)組織中TRαA和TRβ的表達(dá)情況Fig.1 The expression of TRαA and TRβin SMKC and eight tissues ofScophthatmus maximus

2.2 大菱鲆不同組織中甲狀腺激素受體TRαA、TRβ的表達(dá)

對(duì)大菱鲆腸、肌肉、脾臟、心臟、鰓、肝臟、腎臟及腦8個(gè)不同組織的cDNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增,根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果,以β-actin為參照基因,根據(jù)目的基因及β-actin的Ct值,按照2-ΔΔCt法計(jì)算甲狀腺激素受體TRαA、TRβ在大菱鲆8個(gè)組織中的表達(dá)情況。從結(jié)果看出,甲狀腺激素受體TRαA、TRβ在大菱鲆不同組織中的表達(dá)量有明顯的差異(見圖2、圖3)。

圖2 大菱鲆不同組織中TRαA mRNA的表達(dá)量差異Fig.2 The expression of TRαA mRNA in different tissues ofScophthatmus maximus

圖3 大菱鲆不同組織中TRβmRNA表達(dá)量的差異Fig.3 The expression of TRβmRNA in different tissues ofScophthatmus maximus

從大菱鲆8個(gè)不同組織中甲狀腺激素受體TRαA、TRβ基因的表達(dá)量情況看來,腎臟組織中甲狀腺激素受體TRαA、TRβ基因的表達(dá)量均為最高,其次是肝臟組織中。以腸組織中的TRαA mRNA表達(dá)量為1個(gè)單位,腎臟中TRαA mRNA的表達(dá)量是腸組織中23.1倍,肝臟組織中的表達(dá)量是腸組織中的16.7倍,腦組織中表達(dá)量是腸組織中4倍,鰓組織中的表達(dá)量是腸組織中的2.8倍,心臟組織中的表達(dá)量是腸組織中的1.4倍,脾臟組織中表達(dá)量是腸組織中的1.1倍,肌肉組織中TRαA mRNA的表達(dá)量最少,只有腸組織中的0.7倍。以腸組織中的TRβmRNA表達(dá)量為1個(gè)單位,腎臟中TRβmRNA的表達(dá)量是腸組織中5.7倍,肝臟組織中的表達(dá)量是腸組織中的1.4倍,鰓組織中的表達(dá)量是腸組織中的1.2倍,心臟組織中的表達(dá)量是腸組織中的0.99倍,脾臟組織中表達(dá)量是腸組織中的0.7倍,肌肉組織中表達(dá)量是腸組織中0.6倍,腦組織中TRβmRNA的表達(dá)量最少,是腸組織中的0.2倍。由此看來,甲狀腺激素受體TRαA、TRβ在大菱鲆成魚組織中的表達(dá)量具有組織特異性。

2.3 T3處理對(duì)TRαA mRNA表達(dá)量的影響

根據(jù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果,以β-actin為參照基因,根據(jù)目的基因及β-actin的Ct值,按照2-ΔΔCt法計(jì)算不同濃度T3處理對(duì)TRαA mRNA表達(dá)量的影響。結(jié)果表明,各濃度處理后與正常組相比變化量明顯。

結(jié)果顯示,在T3濃度0～200 nmol/L范圍內(nèi),低濃度時(shí),與正常組比較TRαA mRNA表達(dá)量明顯上調(diào),T3濃度為50 nmol/L時(shí),TRαA mRNA的表達(dá)量(P=0.007<0.05)是正常組的7.9倍;T3濃度為75 nmol/L時(shí),TRαA mRNA表達(dá)量(P=0.034<0.05)達(dá)到最大值,表達(dá)量是正常組的11.4倍;當(dāng)T3濃度為100 nmol/L時(shí),TRαA mRNA表達(dá)量(P=0.043< 0.05)降低至正常組的3.2倍;T3濃度為200 nmol/L時(shí),TRαA mRNA表達(dá)量(P=0.013<0.05)也為正常組的3.2倍(見圖4)。

圖4 TRαA mRNA的相對(duì)表達(dá)量(不同字母間差異顯著,P<0.05)ig.4 The relative expression of TRαA mRNA(Significant difference between the different letters,P<0.05)

2.4 T3處理對(duì)TRβmRNA表達(dá)量的影響

T3處理后TRβmRNA表達(dá)量與正常組比較也有顯著差異。TRβmRNA表達(dá)量的變化趨勢(shì)與TRβ mRNA表達(dá)量的變化趨勢(shì)相同(見圖5)。當(dāng)T3濃度為50 nmol/L時(shí),TRβmRNA的表達(dá)量(P=0.003< 0.05)是正常組的5.8倍;T3濃度為75 nmol/L時(shí), TRβmRNA的表達(dá)量(P=0.006<0.05)是正常組的6倍;而當(dāng)T3濃度為100 nmol/L時(shí),TRαA mRNA表達(dá)量(P=0.002<0.05)降至正常組的2倍;T3濃度為200 nmol/L時(shí),TRαA mRNA表達(dá)量(P=0.012< 0.05)為正常組的1.7倍。

圖5 TRβmRNA的相對(duì)表達(dá)量(不同字母間差異顯著,P<0.05)Fig.5 The relative expression of TRβmRNA(Significant difference between the different letters,P<0.05)

3 討論

甲狀腺激素在魚類代謝活動(dòng)、生殖、胚胎發(fā)育、仔魚生長(zhǎng)、變態(tài)及其存活等方面起著重要作用[11],而甲狀腺激素產(chǎn)生的生物作用是通過TR介導(dǎo)的[1-2]。許多文獻(xiàn)表明甲狀腺激素誘導(dǎo)牙鲆變態(tài)是通過與TRs結(jié)合推動(dòng)特異基因轉(zhuǎn)錄的結(jié)果[8,12-13]。甲狀腺激素進(jìn)入細(xì)胞核后與受體結(jié)合,激活受體,并使之結(jié)合于基因的一段特定的DNA序列,即甲狀腺應(yīng)答因子,從而正向或反向調(diào)節(jié)特定基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)[14-15]。

在哺乳動(dòng)物中,TR有TRα和TRβ2種亞型,其中TRα有TRα1和TRα2的2種主要的異形體,TRβ有TRβ1和TRβ2 2種異形體[16]。其中TRа1、TRβ1和TRβ2可結(jié)合T3,為功能性受體[17]。牙鲆甲狀腺激素受體基因序列與哺乳類和兩棲類動(dòng)物的甲狀腺激素受體基因具有高度同源性[6-7]。Yamano通過RT-PCR和原位雜交實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)TR亞型在牙鲆變態(tài)期間(TRαA、TRαB和TRβ1、TRβ2)基因表達(dá)具有組織特異性和時(shí)間特異性[18]。Madhu S.Malo等在Caco-2細(xì)胞中檢測(cè)出2種甲狀腺激素受體TRα1、TRβ1,其中TRα1基因和蛋白表達(dá)量明顯高于TRβ1占主導(dǎo)地位[19]。本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),在大菱鲆腎細(xì)胞(SM KC)中表達(dá)TRαA、TRβ基因,但是未檢測(cè)到TRαB基因的表達(dá)。從大菱鲆8個(gè)組織中甲狀腺激素受體TRαA、TRβ的表達(dá)量差異來看,TRαA、TRβ在大菱鲆成魚組織中的表達(dá)量具有組織特異性。

為了進(jìn)一步研究甲狀腺素與其受體之間的關(guān)系,取組織中表達(dá)量最高的腎細(xì)胞(SM KC)進(jìn)行體外培養(yǎng),用不同濃度的三碘甲狀腺原氨酸(T3)處理,觀察受體表達(dá)情況。研究表明,T3對(duì)甲狀腺激素受體存在一定的調(diào)控作用。在50 nmol/L的T3處理后,受體表達(dá)量較未處理組的表達(dá)量增加;當(dāng)T3濃度達(dá)到75 nmol/L時(shí),受體的表達(dá)量達(dá)到最高;但當(dāng)T3濃度達(dá)到100 nmol/L時(shí),受體的表達(dá)量又相應(yīng)的降低,這表明,低濃度的T3能夠引起受體表達(dá)量的增加,而高濃度的T3會(huì)相對(duì)抑制受體的表達(dá)。T3對(duì)TRβmRNA的表達(dá)量也有相似的調(diào)控,但兩者又有所差別,在T3濃度為50 nmol/L時(shí),TRαA mRNA的表達(dá)量是正常組的7.9倍,TRβmRNA的表達(dá)量是正常組的5.8倍;T3濃度為75 nmol/L時(shí),TRαA mRNA、TRβmRNA表達(dá)量達(dá)到最大值,TRαA mRNA表達(dá)量是正常組的11.4倍,TRβmRNA的表達(dá)量是正常組的6倍。這說明外源性甲狀腺激素T3對(duì)TRαA mRNA表達(dá)的影響作用較對(duì)TRβmRNA的影響作用強(qiáng)。

在高濃度的T3作用下,腎細(xì)胞中的甲狀腺激素受體TRαA、TRβ的表達(dá)量相對(duì)降低,這一結(jié)果與施志儀等在牙鲆仔魚體內(nèi)試驗(yàn)的的結(jié)果相似,在用高濃度甲狀腺素T4處理牙鲆仔魚后與正常組比較,發(fā)現(xiàn)處理組的TRαA mRNA的表達(dá)降低[9]。關(guān)于這一現(xiàn)象, Dace[10]曾有過實(shí)驗(yàn)的說明,他們通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染和Western blotting研究發(fā)現(xiàn)外源激素T3能誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物TRα1、TRβ2受體蛋白的快速降解,但不能誘導(dǎo)TRα2受體蛋白的降解。研究表明蛋白酶介導(dǎo)的降解對(duì)于甲狀腺激素受體的轉(zhuǎn)錄活性起著關(guān)鍵作用。在哺乳動(dòng)物中,甲狀腺激素T3結(jié)合到甲狀腺激素受體上,能誘導(dǎo)甲狀腺激素受體降解,此降解過程經(jīng)蛋白酶體路線進(jìn)行,同時(shí)可受到泛素蛋白-蛋白酶體降解路線中的1種選擇性抑制劑Lactacystin的抑制,在蛋白酶體抑制劑存在的情況下,甲狀腺素β1受體水平升高,而T3依賴的轉(zhuǎn)錄活性和基因表達(dá)會(huì)受到抑制。這表明蛋白酶體調(diào)控的甲狀腺激素受體降解對(duì)甲狀腺激素受體的轉(zhuǎn)錄激活作用著重要的調(diào)控功能。由此推測(cè)甲狀腺激素的作用機(jī)制可能是T3與受體結(jié)合,導(dǎo)致了激素-結(jié)合受體構(gòu)型的改變,易于蛋白酶體的降解,生成可與共激活因子結(jié)合的活性區(qū)(可能是AF-2)從而激活靶基因的轉(zhuǎn)錄。在鲆鰈魚類中的甲狀腺激素受體的降低也可能與這種機(jī)制有關(guān),但還需要更多研究加以證實(shí)。

綜上所述,甲狀腺激素受體在大菱鲆成魚8個(gè)組織中均有表達(dá),但其表達(dá)量卻有明顯的差異,具有組織特異性。在腎細(xì)胞中的研究表明三碘甲狀腺原氨酸(T3)對(duì)甲狀腺激素受體TRαA和TRβ都有一定的調(diào)控作用,低濃度的T3增加受體的表達(dá)量,而高濃度的T3會(huì)相對(duì)抑制受體的表達(dá),其調(diào)控的分子機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。

致謝:在本研究中,中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所陳松林研究員在細(xì)胞培養(yǎng)中給予了幫助,特此感謝!

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Abstract: In order to study the expression of thyroid hormone receptor(TR)gene inScophthatmus maximusand the effects of triiodothyronine(T3)on the expression of thyroid hormone receptor(TR) gene at the cellular level,Real-time fluorescent quantitative PCR was applied to detect the expression of TRαA mRNA and TRβmRNA in eight different tissues ofScophthatmus maximusand the SM KC that was treated by T3 in five different concentrations(0,50,75,100 and 200 nmol/L).The results showed that the expression of TRαA mRNA and TRβmRNA were various in the different tissues ofScophthatmus maximus.Both TRαA mRNA and TRβmRNA showed their highest expression in the kidney tissue. There was a significant difference on the expression of thyroid hormone receptor(TR)after treated by T3 using different concentrations.The expression of TRαA and TRβmRNA were increased in low concentration.However,the TRαA and TRβmRNA expression decreased significantly when the concentration of T3 up to 100nM.It was shown that 50nM and 75nM of T3 can increase the TRαA and TRβmRNA expression,while 100nM and 200nM of T3 can inhibit their expression relatively.

Key words: Scophthalmus maximus;triiodothyronine(T3);thyroid hormone receptor(TR);SMKC; real-time fluorescence quantitative PCR

責(zé)任編輯 于 衛(wèi)

The Expression of Thyroid Hormone Receptor in the Tissues and Cells of Scophthatmus maximus and Relationship Between It and Thyroid Hormone

TIAN Juan,SHI Zhi-Yi
(Biotechnology Research Center,Shanghai Ocean University,Shanghai 201306,China)

S917;Q291

A

1672-5174(2010)09Ⅱ-105-05

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30571420);國(guó)家教育部博士項(xiàng)目基金(20040264001);上海市重點(diǎn)學(xué)科水生生物學(xué)建設(shè)項(xiàng)目(S3070)資助

2010-04-12;

2010-06-12

田 娟(1984-),女,碩士生,研究方向:魚類發(fā)育生物學(xué)。E-mail:tian_hjuan@163.com

Tel:021-61900051;E-mail:zyshi@shou.edu.cn