HPLC法同時測定大棗中蘆丁和酸棗仁皂苷B的含量

陳鑫，劉永剛，王耀欣，鄭麗英，何希輝，韓南銀#（.北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，北京市009；北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京市 000）

大棗為鼠李科植物棗Ziziphus jujubaMill.的干燥成熟果實，具有補中益氣、養(yǎng)血安神之功效[1]。2005年版《中國藥典》對大棗的質(zhì)量控制較為簡單，只有性狀、薄層和灰分檢查，沒有含量測定項。筆者在本試驗中嘗試增加蘆丁和酸棗仁皂苷B的含量測定，用于大棗的質(zhì)量研究和評價。

1 儀器與試藥

高效液相色譜（HPLC）儀、2998型二極管陣列檢測器（美國Waters公司）。蘆丁、酸棗仁皂苷B對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200306、110814-200506）；大棗（產(chǎn)于山西呂梁，購自山西柳林縣華安母棗公司，批號：20070203、20070204、20070205）；乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱：Agilent Extent-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：25 ℃；流速：1 mL·min-1；流動相：0.01%磷酸水溶液（A）-乙腈（B），二元梯度洗脫（0.01～15 min，20%B；15～30 min，20%～35%B；30～35 min，35%～45%B；35～40 min，45%～80%B；40～60 min，80%～20%B）；檢測波長：0.01～30 min、254 nm，30～40 min、210 nm，40～60 min、254 nm。理論塔板數(shù)按蘆丁峰計算應(yīng)不低于2 000。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液：精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24 h的蘆丁和酸棗仁皂苷B對照品各適量，加甲醇分別制成每1 mL含0.344 mg和0.112 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液：取本品8 g，加入50 mL水，混勻，用水飽和正丁醇萃取5次，每次30 mL，合并正丁醇層，用正丁醇飽和氨水溶液洗滌2次，每次20 mL，取正丁醇層蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容于5 mL量瓶中，搖勻，靜置，過0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

取上述蘆丁對照品貯備液適量，以甲醇稀釋成濃度分別為0.068 8、0.137 6、0.206 4、0.275 2 mg·mL-1的溶液；再將酸棗仁皂苷B對照品貯備液稀釋成濃度分別為0.022 4、0.044 8、0.067 2、0.089 6 mg·mL-1的溶液。取上述各溶液20 μL，分別注入液相色譜儀，測定。以進樣量（X）為橫坐標，峰面積積分值（Y）為縱坐標，制備標準曲線，分別得一條近似通過原點的直線，回歸方程分別為Y＝46 730.81X—184.8（r＝0.999 8）和Y＝10 509.5X+128.9（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，蘆丁和酸棗仁皂苷B的進樣量分別在1.38～6.88 μg和0.448～2.24 μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗

取“2.2.1”項下對照品貯備液，按上述色譜條件重復(fù)進樣6次，測定。結(jié)果，蘆丁和酸棗仁皂苷B峰面積積分值的RSD分別為0.64%和0.76%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗

取同一批大棗6份，每份8 g，精密稱定，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.8”項下方法操作，測定蘆丁和酸棗仁皂苷B的含量。結(jié)果，蘆丁的平均含量為0.031%，RSD＝0.852%；酸棗仁皂苷B的平均含量為0.008 8%，RSD＝0.82%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

分別取室溫放置0、1、2、4、6、8 h的供試品溶液適量，測定蘆丁和酸棗仁皂苷B的峰面積積分值。結(jié)果，二者峰面積積分值的RSD分別為1.85%和1.74%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱取蘆丁和酸棗仁皂苷B對照品各適量，加入到已知蘆丁和酸棗仁皂苷B含量的大棗中，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.8”項下方法操作，測定大棗中蘆丁和酸棗仁皂苷B的含量，計算加樣回收率，結(jié)果分別見表1、表2。

2.8 樣品含量測定

表1 蘆丁的加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test of rutin（n＝6）

表2 酸棗仁皂苷B的加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 2 Results of recovery test of jujuboside B（n＝6）

取樣品3份，精密稱定，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，各吸取10 μL注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，計算蘆丁和酸棗仁皂苷B的含量。結(jié)果，二者平均含量分別為0.31 mg·g-1和 87.7 μg·g-1。

3 討論

2005年版《中國藥典》（一部）沒有收載大棗單味藥材的含量檢測方法，本試驗方法遵循保證科學(xué)性、易于重復(fù)、從簡從優(yōu)原則，采用簡提取方法和流動相體系，對大棗中2種有效成分同時進行含量測定，分離基本良好，準確度、精密度高，易于操作，適用性強，可為大棗的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

蘆丁和酸棗仁皂苷B的紫外吸收差別較大，蘆丁為黃酮類化合物，主要在254 nm波長下吸收；而酸棗仁皂苷B為皂苷類化合物，主要在210 nm波長下吸收。為解決上述問題，本試驗在一個洗脫條件下采用不同檢測波長達到同時檢測2種成分的目的。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：16.

[2]劉同華，盧來春.高效液相色譜法測定曲克蘆丁注射劑的含量[J].中國藥房，2004，15（6）：365.