HPLC法測(cè)定注射用復(fù)方甘草酸苷中甘草酸單苷的含量

王冬梅

注射用復(fù)方甘草酸苷主要用于治療慢性肝炎，改善肝功能異常。注射用復(fù)方甘草酸苷主要由甘草酸單銨鹽、甘氨酸和L-鹽酸半胱氨酸三種成分組成。本文以HPLC法測(cè)定注射用復(fù)方甘草酸苷中甘草酸單銨的含量，檢測(cè)方法靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于甘草酸單苷的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

高效液相系統(tǒng)（Waters 2695泵，Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器，Waters Empower色譜工作站）；乙腈為色譜純。樣品來(lái)源：江蘇揚(yáng)州中寶藥業(yè)有限公司；樣品批號(hào)：20030729、2003073、20030731。參比樣品來(lái)源：日本米諾發(fā)源制藥株式會(huì)社（進(jìn)口注冊(cè)證號(hào)：H20030185），參比樣品批號(hào)：00344。甘草酸單銨對(duì)照品：成都圣諾科技發(fā)展有限公司，HPLC純度99.5%。

圖 1 甘草酸苷峰面積與其濃度的線性關(guān)系圖

表 1 甘草酸苷回收率試驗(yàn)結(jié)果

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18，5 μ，4.6×250 mm，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流動(dòng)相：乙腈-0.01 mol/L 磷酸溶液（38∶62），流速 1.0 ml/min，在室溫下操作，理論板數(shù)按甘草酸苷計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱取本品10 mg，用5 ml注射用水溶解，置25 ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，制成甘草酸苷400 μg/ml的溶液，作為供試品溶液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 甘草酸單銨對(duì)照品適量，用注射用水溶解，加流動(dòng)相制成甘草酸單銨530 μg/ml（相當(dāng)甘草酸苷 400 μg）的對(duì)照溶液。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取甘草酸單銨對(duì)照品54.6 mg（相當(dāng)于甘草酸苷對(duì)照品41.2 mg），置50 ml量瓶中，用水定容至刻度， 分別取 4.0、4.5、5.0、5.5、6.0 ml置 10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至10 ml，使每1 ml中含甘草酸苷329.6 μg、370.8 μg、412.0 μg、453.2 g、494.4 μg 的溶液。 分別取 10 μl注入液相色譜儀，記錄各溶液的主峰面積，并以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程：A=1 0036C-23912（n=5，r=0.9998）。 甘草酸苷在 329.6～494.4μg/ml，峰面積與其濃度呈良好線性關(guān)系，其線性關(guān)系見(jiàn)圖1。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取線性測(cè)定中濃度為412.0 μg/ml樣品，連續(xù)進(jìn)樣 6次，測(cè)得峰面積分別為 4 094 830、4 089 490、4 093 948、4 093 766、4 089 363、4 091 630， 平均 值為 4 092 171，RSD 0.06%。結(jié)果表明，測(cè)定方法的重復(fù)性很好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取線性測(cè)定中濃度為412.0 μg/ml樣品，分別于 0、4、8、12、24 h 進(jìn)樣，記錄峰面積，分別為 4 085 787、

2.7 回收率試驗(yàn) 按高、中、低三個(gè)濃度梯度，精密稱取甘草酸單銨對(duì)照品約10.6、13.25、15.9 mg（相當(dāng)于甘草酸苷8、10、12 mg）各3份，置25 ml量瓶中，另按處方比例加入其它組分，加水稀釋至刻度，搖勻，備用。另取甘草酸單銨對(duì)照品13.4 mg（約相當(dāng)于甘草酸苷10 mg），置25 ml量瓶中，加氨試液0.2 ml和水少許溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液，照甘草酸苷測(cè)定項(xiàng)下操作，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1，可見(jiàn)該法的回收率符合方法學(xué)要求。

2.8 甘草酸苷的含量測(cè)定 精密稱取本品10 mg，用5 ml注射用水溶解，置25 ml量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，制成甘草酸苷400 μg/ml溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液2.5 ml置10 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，制成甘草酸苷100 μg/ml溶液，作為預(yù)試液。取預(yù)試液10 μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰峰高約為滿量程的80%～90%，再取供試品溶液10 μl，注入液相色譜議，記錄色譜圖。4085592、4078651、4089232、4083496，平均值為 4084552，RSD 0.10%。此樣品于24 h內(nèi)進(jìn)行測(cè)定，RSD%為0.10%，說(shuō)明樣品在24 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。另取甘草酸苷對(duì)照品，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。依本法測(cè)定三批樣品，結(jié)果為，其標(biāo)示量（%）分別為20030729，101.10；20030730，103.29；20030731，100.02。 其參比樣品為103.19。

3 討論

注射用復(fù)方甘草酸苷為甘草酸單銨鹽、鹽酸半胱氨酸、甘氨酸制成的注射用粉劑，主要用于治療慢性肝炎，改善肝功能異常，也可用于治療濕疹、皮膚炎，蕁麻疹，目前廣泛地應(yīng)用于臨床。本文所討論的用高效液相色譜法對(duì)注射用復(fù)方甘草酸苷中甘草酸單苷含量進(jìn)行測(cè)定方法的準(zhǔn)確度和精密度良好，專屬性強(qiáng)，能有效控制樣品中甘草酸單銨的含量符合含量測(cè)定的方法學(xué)要求，適用于本品的測(cè)定。