HPLC法測定腸安康顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ與蒼術(shù)酮的含量

何雄偉（重慶市第九人民醫(yī)院，重慶市 400700）

HPLC法測定腸安康顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ與蒼術(shù)酮的含量

何雄偉＊（重慶市第九人民醫(yī)院，重慶市 400700）

目的：建立腸安康顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ與蒼術(shù)酮的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為伊利特ODS色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（梯度洗脫），流速為1 mL·min-1，檢測波長為220 nm。結(jié)果：白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ進樣量在0.1～2.0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0.999 9），平均回收率為98.84%，RSD＝0.76%（n＝6）；蒼術(shù)酮進樣量在0.5～10.0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0.999 9），平均回收率為98.43%，RSD＝1.14%（n＝6）。結(jié)論：本方法簡便、準(zhǔn)確，可用于腸安康顆粒的質(zhì)量控制。

腸安康顆粒；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ；蒼術(shù)酮；高效液相色譜法；含量測定

＊主管藥師。研究方向：中藥制劑與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。電話：023-68289034

腸安康顆粒是根據(jù)國家級名中醫(yī)臨床驗方研發(fā)的醫(yī)院制劑，由黃芪、益母草、白術(shù)、龜板、鱉甲等7味藥材組成，具有補氣、活血、軟堅散結(jié)之功效，是腸癌輔助治療用藥，抗轉(zhuǎn)移療效確切[1～3]。為提高制劑質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法同時測定了腸安康顆粒中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ與蒼術(shù)酮的含量，方法簡便、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 材料

1.1 儀器

LC-10ATvp HPLC儀、SPD-10Avp紫外檢測器（日本島津公司）；色譜工作站（杭州英譜科技開發(fā)有限公司）；電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-400型超聲提取儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、蒼術(shù)酮標(biāo)準(zhǔn)品均由浙江省中醫(yī)藥研究院制備（純度均＞98%）；腸安康顆粒（批號：20071011、20071015、20071102）及陰性樣品均由重慶市第九人民醫(yī)院自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：伊利特ODS色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（洗脫程序見表1）；柱溫：室溫；流速：1 mL·min-1；檢測波長：220 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：精密稱取干燥至恒重的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制得白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ貯備液；再取蒼術(shù)酮標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置于5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制得蒼術(shù)酮貯備液。精密吸取2種貯備液各1 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1 mL含白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ0.04 mg及蒼術(shù)酮0.20 mg的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradient elution program

2.2.2 供試品溶液：取裝量差異項下的本品約1.0 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，放置1 h，超聲處理30 min，放冷至室溫，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足減失的質(zhì)量，濾過，取續(xù)濾液過0.2 μm微孔濾膜，即得。

2.2.3 陰性對照溶液：取缺白術(shù)的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法操作，即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗

分別吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件記錄色譜圖。結(jié)果，供試品色譜中指標(biāo)成分與相鄰峰的分離度分別為3.26與5.79；理論塔板數(shù)以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ及蒼術(shù)酮色譜峰計算應(yīng)＞3 000；陰性對照在與標(biāo)準(zhǔn)品出峰相應(yīng)保留時間位置未出現(xiàn)雜質(zhì)峰，表明本法專屬性強。色譜圖見圖1。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液，分別稀釋成梯度濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，精密吸取10 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。以峰面積積分值（Y）對進樣量（X，μg）進行線性回歸，得白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的回歸方程為Y＝27 183.3X—2 062.1（r＝0.999 9）；蒼術(shù)酮的回歸方程為Y＝2 927.3X—705.6（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、蒼術(shù)酮的進樣量分別在0.1～2.0、0.5～10.0 μg范圍內(nèi)與各自峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖A.混合標(biāo)準(zhǔn)品；B.供試品；C.陰性對照；1.白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ；2.蒼術(shù)酮Fig 1 HPLC chromatogramA.mixtrue standard；B.test sample；C.negative control；1.atractylenolideⅠ；2.atractylone

2.4.2 精密度試驗：精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣6次，每次10 μL。結(jié)果，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和蒼術(shù)酮峰面積的RSD分別為1.02%和1.81%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（批號：20071011），按上述色譜條件分別于0、2、4、6、8、12 h各進樣10 μL。結(jié)果，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和蒼術(shù)酮峰面積的RSD分別為1.39%和1.23%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗：取同一批樣品（批號：20071011）共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和蒼術(shù)酮的平均含量分別為0.060 mg·g-1和0.30 mg·g-1，RSD分別為1.12%和1.08%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗：稱取已知含量的樣品（批號：20071011）共9份，精密稱定，按照高、中、低比例分別精密加入對照品溶液（每1 mL含白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ0.04 mg和蒼術(shù)酮0.20 mg），按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定樣品含量，計算加樣回收率，結(jié)果分別見表2、表3。

表2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 2 Recovery of atractylenolideⅠ（n＝6）

表3 蒼術(shù)酮的回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 3Recovery of atractylon（n＝6）

2.5 樣品含量測定

取3批腸安康顆粒，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液。分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 μL及供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以外標(biāo)法計算樣品含量，結(jié)果見表4。

表4 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 4Result of sample determination（n＝3）

3 討論

雖然《中國藥典》中白術(shù)項下沒有含量測定，但考慮到制劑中白術(shù)未經(jīng)提取，直接將細(xì)粉入藥制粒成型，有效成分含量較高，而且有相關(guān)實驗室提供了白術(shù)內(nèi)酯和蒼術(shù)酮標(biāo)準(zhǔn)品，能夠滿足含量測定的需要，故最終以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和蒼術(shù)酮為指標(biāo)，建立了該制劑的含量測定方法并制定含量限度。

蒼術(shù)酮不穩(wěn)定，冰凍保存6個月后純度下降，因此將蒼術(shù)酮有效期定為6個月并冷凍保存。臨用時再配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

試驗對流動相梯度洗脫程序進行了比較，選擇了成分分離良好、分析時間適宜的條件。另對供試品溶液的制備條件進行了比較，最終確定文中所述制備方法。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：68.

[2]文紅梅，李 偉，吳 皓.白術(shù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究Ⅰ——HPLC法測定2種白術(shù)內(nèi)酯的含量[J].藥物分析雜志，2001，21（3）：170.

[3]俞忠民，戴詩文，壽 旦，等.超微粉碎對白術(shù)中內(nèi)酯成分體外溶出的影響[J].中國藥房，2009，20（9）：653.

Determination of AtractylenolideⅠ and Atractylone in Chang’ankang Granule by HPLC

HE Xiong-wei（The Ninth People’s Hospital of Chongqing，Chongqing 400700，China）

ABSTRCTOBJECTIVE：To develop a method for determination of atractylenolideⅠ and atractylone in Chang’ankang granule by HPLC.METHODS：The determination was performed on Yilite ODS column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase contained of acetonitrile-water（gradient elution）with flow rate of 1 mL·min-1and detection wavelength of 220 nm.RESULTS：The linear range of atractylenolide Ⅰwere 0.1～2.0 μg（r＝0.999 9）with mean recovery of 98.84%（RSD＝0.76%，n＝6）.The linear range of atractylone were 0.5～10.0 μg with mean recovery of 98.43%（RSD＝1.14%，n＝6）.CONCLUSION：This method is simple，convenience and accurate for quality control of Chang’ankang granule.

Chang’ankang granule；AtractylenolideⅠ；Atractylone；HPLC；Content determination

R283.627；R927.2

A

1001-0408（2010）03-0249-02

2009-10-29

2009-12-12）