均勻設(shè)計法優(yōu)選金果欖半仿生提取工藝

楊光義，杜士明，黃良永（鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬太和醫(yī)院，十堰市 442000）

均勻設(shè)計法優(yōu)選金果欖半仿生提取工藝

楊光義＊，杜士明，黃良永（鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬太和醫(yī)院，十堰市 442000）

目的：優(yōu)選金果欖藥材半仿生提?。⊿BE）法的最佳工藝。方法：以鹽酸巴馬汀含量、鹽酸藥根堿含量和干浸膏得率的綜合評價為指標(biāo)，以3次煎煮用水的pH值和煎煮時間為考察因素，采用均勻設(shè)計法優(yōu)選SBE法的最佳工藝。結(jié)果：優(yōu)選的工藝為3次煎煮用水的pH值依次為4.0、6.5、9.0，煎煮時間依次為1.0、0.5、0.5 h。結(jié)論：該工藝科學(xué)、合理，可為金果欖藥效物質(zhì)的提取工藝提供理論依據(jù)。

金果欖；半仿生提取法；均勻設(shè)計；提取工藝

金果欖為防己科青牛膽屬植物青牛膽Tinospora sagittata（Oliv.）Gagnep.或金果欖T.capillipesGagnep.的干燥塊根，具有清熱解毒、消腫止痛之功效。內(nèi)服用于治療咽喉腫痛、扁桃體炎、急性胃腸炎、菌痢、癰腫疔癤等癥；外用治療靜脈炎、毒蛇咬傷等癥[1]。生物堿為其主要藥效部位，其中鹽酸巴馬汀等季銨型生物堿為其主要活性成分。在綜合文獻(xiàn)[2～5]和前期試驗[6]的基礎(chǔ)上，本試驗以鹽酸巴馬汀含量、鹽酸藥根堿含量和干浸膏得率為指標(biāo)，采用均勻設(shè)計法優(yōu)選其半仿生提?。⊿BE）法工藝條件，為有效控制金果欖提取物質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

UltiMateTM3000型高效液相色譜（HPLC）儀（美國戴安公司）；調(diào)溫型電熱套（北京永光明醫(yī)療儀器廠）；電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵（上海錦華層析設(shè)備廠）。

鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為0732-200005、0733-200004）；金果欖藥材采于武當(dāng)山南巖，由武當(dāng)中藥研究所陳吉炎教授采集并鑒定為真品；甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 工藝優(yōu)選設(shè)計

在藥材粒度、煎煮溫度、煎煮用水量、濾過、濃縮等條件相同的情況下，以3次煎煮用水的pH值和煎煮時間為考察因素，根據(jù)U9（91×33）均勻設(shè)計擬水平表安排試驗。因素水平見表1。

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

2.2 樣品溶液的制備

按表1中條件試驗。稱取金果欖粉末5 g，加50 mL水浸泡30 min，回流提取3次，提取時間分配依次為2∶1∶1，提取液用紗布加100目篩分別濾過，抽濾，濾液定容至100 mL，分別制得1～9號樣品溶液。

2.3 鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的含量測定[2，3，5]

2.3.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），前加預(yù)柱（10 mm×4.6 mm）；流動相：甲醇-3.5 mol·L-1四甲基乙二胺水溶液（1∶1，調(diào)節(jié)pH 7.5）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：345 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸巴馬汀對照品10.1 mg和鹽酸藥根堿對照品10.6 mg，分別置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密量取樣品溶液10 mL，置于蒸發(fā)皿中蒸干，殘渣用甲醇定容至10 mL容量瓶中，即得。

2.3.4 精密度試驗 取上述對照品溶液10 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，重復(fù)6次，測定峰面積。結(jié)果，鹽酸巴馬汀和鹽酸藥根堿的RSD分別為0.79%（n＝6）和1.03%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 精密量取上述同一組（2號樣品）已測含量的樣品溶液6份，分別按80%、100%、120%的比例精密加入鹽酸巴馬汀對照品和鹽酸藥根堿對照品，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件測定。結(jié)果，鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿的平均回收率分別為98.75%、97.32%，RSD分別為1.86%（n＝6）、1.54%（n＝6）。

2.3.6 樣品含量測定 精密量取對照品溶液及供試品溶液各10 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，以外標(biāo)一點法計算含量。

2.4 干浸膏得率的測定

精密量取1～9號樣品溶液各50 mL，置于已烘干至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃烘3 h，置于干燥器內(nèi)30 min后稱重，并按下式計算干浸膏得率：干浸膏得率＝干浸膏質(zhì)量/原藥材質(zhì)量。

2.5 工藝條件的優(yōu)化

以鹽酸巴馬汀含量、鹽酸藥根堿含量和干浸膏得率為指標(biāo)，各指標(biāo)數(shù)據(jù)按公式X′i，j＝（Xi，j－X′j）/Sj進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理（式中，X′i，j為標(biāo)準(zhǔn)化處理的值；Xi，j為樣品溶液i中成分j的含量；X′j為各種樣品溶液中成分j含量的平均值；Sj為成分j含量的標(biāo)準(zhǔn)偏差）。將標(biāo)準(zhǔn)化后的值，根據(jù)各指標(biāo)在工藝中的主次，給予不同的加權(quán)系數(shù)，按下式計算綜合評價值（Y）：Y＝鹽酸巴馬汀含量×4+鹽酸藥根堿含量×3+干浸膏得率×3。各指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)化處理結(jié)果見表2。

表2 各指標(biāo)及標(biāo)準(zhǔn)化處理結(jié)果Tab 2 Results of contents and standardization contents

由表2可知，優(yōu)選的最佳工藝為3次煎煮用水的pH值依次為4.0、6.5、9.0，煎煮時間依次為1.0、0.5、0.5 h。

2.6 工藝驗證試驗

按優(yōu)選的SBE法工藝，平行進(jìn)行3次試驗，測定鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿的含量和干浸膏得率。結(jié)果，鹽酸巴馬汀的平均含量為0.194 mg·g-1，鹽酸藥根堿的平均含量為0.294 mg·g-1,干浸膏得率為0.475 g·g-1，表明SBE法優(yōu)選工藝合理、可行。

3 討論

本試驗選取鹽酸巴馬汀含量、鹽酸藥根堿含量和干浸膏得率為指標(biāo)，并對數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，以消除各指標(biāo)之間的單位和量綱的不同，以及各標(biāo)準(zhǔn)變量范圍懸殊所造成的影響。綜上所述，該工藝科學(xué)、合理，可為金果欖藥效物質(zhì)的提取工藝提供理論依據(jù)。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：150.

[2]黃良永，涂自良，楊光義，等.金果欖不同提取方法比較研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2007，18（2）：464.

[3]陳 黎，王啟斌，黃良永，等.高效液相色譜法測定金果欖中鹽酸藥根堿和鹽酸巴馬汀含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2007，26（9）：1 086.

[4]程艷芹，孫秀梅，張兆旺，等.均勻設(shè)計法優(yōu)選甘草的半仿生提取工藝條件[J].中藥材，2007，30（5）：598.

[5]袁小紅，趙瑞芝，丘小惠.均勻設(shè)計法優(yōu)選蓮子心的半仿生提取工藝[J].中國藥房，2005，16（21）：1 618.

[6]楊光義，杜士明，黃良永，等.不同產(chǎn)地金果欖中鹽酸巴馬汀含量比較[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，27（9）：1 016.

Optimization of Semi-bionic Extraction Technology of Tinosporae Radix by Uniform Design

YANG Guang-yi，DU Shi-ming，HUANG Liang-yong（Taihe Hospital of Yunyang Medical College，Shiyan 442000，China）

OBJECTIVE：To optimize semi-bionic extraction（SBE）of Tinosporae Radix.METHODS：The semi-bionic extraction of Tinosporae Radix was optimized by uniform design with the content of palmatine and jatrorrhizine hydrochloride and the yield of dry extract as index and with pH of decoction solution for 3 times and decoction time as factors.RESULTS：The pH values of water in three times of extraction were 4.0，6.5 and 9.0，and the extraction time were 1.0 h，0.5 h，0.5 h respectively.CONCLUSION：The optimized extraction condition is scientific and reasonable.It provides theory evidence for the extraction of pharmaceutical components from Tinosporae Radix.

Tinosporae Radix；Semi-bionic extraction；Uniform design；Extraction process

R284.2；R283

A

1001-0408（2010）39-3689-02

2009-10-20

2010-01-19）