補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響

劉亮鋒，賴(lài)平，唐立海，劉丹丹，蔡大可，葉木榮（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，廣州市 510006）

補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響

劉亮鋒＊，賴(lài)平，唐立海，劉丹丹，蔡大可，葉木榮#（廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，廣州市 510006）

目的：研究補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響。方法：取11月齡雌性SD大鼠，正常飼養(yǎng)至11.5月齡時(shí)開(kāi)始給藥，連續(xù)給藥4個(gè)月。觀察補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨密度及骨小梁的影響。結(jié)果：補(bǔ)陽(yáng)壯骨方可一定程度上防止自然衰老引起的骨密度下降；能改善自然衰老引起的骨小梁結(jié)構(gòu)退化。結(jié)論：補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)自然衰老導(dǎo)致的雌性大鼠骨密度及骨小梁退變有一定的預(yù)防作用。

補(bǔ)陽(yáng)壯骨方；骨密度；骨小梁；自然衰老

＊碩士研究生。研究方向：中藥藥理與毒理學(xué)。電話：020-39358084。E-mail：liongphone@163.com

#通訊作者：教授。研究方向：中藥藥理與毒理學(xué)。電話：020-39358084。E-mail：pharm3@gzhtcm.edu.cn

補(bǔ)陽(yáng)壯骨方主要由淫羊藿、黃芪、補(bǔ)骨脂等中藥組成，臨床主要用于預(yù)防及治療腎陽(yáng)虛引起的骨質(zhì)疏松。在傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)的認(rèn)識(shí)中，骨與腎的關(guān)系十分密切，腎藏精，生髓主骨。《素問(wèn)·宣明五氣篇》曰：“腎主骨”。腎的這一功能通過(guò)腎陽(yáng)來(lái)實(shí)現(xiàn)，《素問(wèn)·生氣通天論》曰：“因而強(qiáng)大，腎氣乃傷，高骨乃壞”，論及了先傷及腎，而后影響到骨，腎陽(yáng)虛導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松其治療當(dāng)以補(bǔ)腎溫陽(yáng)為主。而腎藏精，精化為氣，人體的生理功能主要是腎氣的促進(jìn)作用，所以腎陽(yáng)虛中佐以補(bǔ)氣治療，使陽(yáng)升氣行，以達(dá)到更好的補(bǔ)腎陽(yáng)的療效。本方中淫羊藿與補(bǔ)骨脂為補(bǔ)陽(yáng)藥，黃芪為補(bǔ)氣藥；淫羊藿辛甘溫功，擅溫腎壯陽(yáng)，強(qiáng)筋骨；補(bǔ)骨脂辛苦溫功，擅補(bǔ)火壯陽(yáng)，兼具收澀之性，兩者相輔相成，以培補(bǔ)腎中元陽(yáng)；黃芪甘微溫，補(bǔ)氣升陽(yáng)，三藥相合，補(bǔ)腎陽(yáng)之虛，助氣化之復(fù)。本研究針對(duì)補(bǔ)陽(yáng)壯骨方的功能主治，研究其對(duì)雌性自然衰老大鼠骨密度（BMD）及骨小梁的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Lunar Prodigy骨密度測(cè)量?jī)x（美國(guó)GE公司）；KM2255型全自動(dòng)石蠟切片機(jī)、TP1020型全自動(dòng)生物組織脫水機(jī)、EG1140型石蠟包埋機(jī)、5010型全自動(dòng)染色機(jī)（德國(guó)徠卡公司）；BX50型生物顯微鏡（日本Olympus公司）；200型漂烘片機(jī)（深圳市雅博電子有限公司）；MIAS型醫(yī)學(xué)圖像分析管理系統(tǒng)（北京航天航空大學(xué)）。

1.2 試藥

補(bǔ)陽(yáng)壯骨方提取物（廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開(kāi)發(fā)研究中心，批號(hào)：20071201），每1 g約相當(dāng)于原生藥3.9 g；右歸丸（河南省宛西制藥股份有限公司，批號(hào)：071004）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)11月齡自然衰老SD大鼠60只，♀，體質(zhì)量300 g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（粵）2003-0001）。

2 方法

2.1 分組及給藥

實(shí)驗(yàn)分為5組，即模型（等容生理鹽水）、右歸丸（4.5 g·kg-1）和補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高、中、低劑量（2.2、1.1、0.55 g（生藥）·kg-1，分別相當(dāng)于成人臨床用量的20、10、5倍）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)給藥4個(gè)月，末次給藥后動(dòng)物禁食12 h。

2.2 指標(biāo)的檢測(cè)

BMD測(cè)定：麻醉后采用雙能X射線法（DEXA法）測(cè)定大鼠全身BMD、腰椎BMD、雙側(cè)股骨頸BMD以及雙側(cè)股骨BMD。

骨小梁面積、骨小梁面積率的測(cè)定及骨小梁計(jì)數(shù)：取2～4腰椎，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，用圖像分析軟件測(cè)定骨小梁面積及骨小梁面積率；每片隨機(jī)觀察椎體3個(gè)視野，計(jì)算視野內(nèi)骨小梁個(gè)數(shù)，取平均值。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠BMD的影響

右歸丸組大鼠全身、腰椎、雙側(cè)股骨及左股骨頸BMD均高于模型組，說(shuō)明雌性自然衰老大鼠全身、腰椎、雙側(cè)股骨頸及雙側(cè)股骨都出現(xiàn)了不同程度的骨量丟失；補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高、中劑量組大鼠全身、腰椎、雙側(cè)股骨頸及雙側(cè)股骨BMD均高于模型組；補(bǔ)陽(yáng)壯骨方低劑量組全身、腰椎、雙側(cè)股骨及左股骨頸BMD均高于模型組，右股骨頸BMD低于模型組，但無(wú)顯著差異。結(jié)果表明，補(bǔ)陽(yáng)壯骨方在一定程度上可緩解雌性自然衰老大鼠各部位BMD下降。補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠BMD的影響見(jiàn)表1。

表1 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠BMD的影響（±s，g·cm-2）Tab 1Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone density of female natural aging rat（±s，g·cm-2）

表1 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠BMD的影響（±s，g·cm-2）Tab 1Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone density of female natural aging rat（±s，g·cm-2）

與模型組比較：＊P＜0.05vs.model group：＊P＜0.05

組別模型組右歸丸組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高劑量組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方中劑量組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方低劑量組右股骨0.202±0.014 0.216±0.011＊0.213±0.017 0.219±0.033 0.210±0.009 n88888全身0.173±0.014 0.187±0.007＊0.183±0.011 0.186±0.010 0.181±0.007腰椎0.202±0.026 0.212±0.019 0.216±0.026 0.214±0.016 0.221±0.017左股骨頸0.222±0.013 0.227±0.013 0.228±0.012 0.228±0.021 0.222±0.022右股骨頸0.226±0.019 0.222±0.015 0.228±0.016 0.227±0.020 0.222±0.019左股骨0.205±0.017 0.217±0.015 0.209±0.015 0.211±0.020 0.207±0.010

3.2 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響

各給藥組骨小梁面積率均高于衰老模型組，其中右歸丸組和補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高、中劑量組有顯著差異（P＜0.01或P＜0.05）。結(jié)果表明，補(bǔ)陽(yáng)壯骨方可緩解自然衰老引起的骨小梁結(jié)構(gòu)退化。補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響見(jiàn)表2。

表2 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響（±s）Tab 2 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula area of female natural aging rat（±s）

表2 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁面積的影響（±s）Tab 2 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula area of female natural aging rat（±s）

與模型組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs.model group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型組右歸丸組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高劑量組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方中劑量組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方低劑量組n 5 5 5 5 5骨小梁面積/μm 130 811.8±23 206.2 244 159.6±19 986.9＊＊238 970.6±55 800.4＊＊186 114.0±31 058.0＊164 330.6±47 739.3骨小梁面積率/%0.302±0.054 0.564±0.047＊＊0.551±0.128＊＊0.429±0.071＊0.379±0.110

3.3 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁計(jì)數(shù)的影響

各給藥組骨小梁數(shù)量均高于模型組，其中右歸丸組和補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高、中劑量組有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)果表明，補(bǔ)陽(yáng)壯骨方可改善自然衰老導(dǎo)致的骨小梁結(jié)構(gòu)退化。補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁計(jì)數(shù)計(jì)的影響見(jiàn)表3。

表3 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁計(jì)數(shù)的影響（±s）Tab 3 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula quantity of female natural aging rat（±s）

表3 補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠骨小梁計(jì)數(shù)的影響（±s）Tab 3 Effect of Buyang zhuanggu prescription on bone trabecula quantity of female natural aging rat（±s）

與模型組比較：＊P＜0.05vs.model group：＊P＜0.05

n組別模型組右歸丸組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高劑量組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方中劑量組補(bǔ)陽(yáng)壯骨方低劑量組10 10 10 10 10骨小梁個(gè)數(shù)17.0±4.2 20.8±3.0＊22.3±6.4＊20.9±4.1＊18.6±3.5

3.4 骨小梁病理切片

自然衰老大鼠椎骨骨小梁明顯變細(xì)變薄，右歸丸組和補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高、中、低劑量組椎骨骨小梁明顯厚于模型組。骨小梁病理切片見(jiàn)圖1。

4 討論

骨質(zhì)疏松癥是以低骨量及骨組織微結(jié)構(gòu)退變?yōu)樘卣鞯囊环N全身性骨骼疾病，常見(jiàn)于50歲以上的老年人，且女性由于峰骨量較低及絕經(jīng)后的雌激素水平降低，發(fā)病率是男性的3倍。中醫(yī)對(duì)骨質(zhì)疏松辨證多以補(bǔ)腎為主，分陰陽(yáng)為綱。臨床上常見(jiàn)證型主要分為腎陽(yáng)虛、腎陰虛2種，治療上以溫補(bǔ)腎陽(yáng)、滋補(bǔ)肝腎、填精生髓、強(qiáng)壯筋骨為主[1]。根據(jù)上述特點(diǎn)，本研究選取雌性自然衰老大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究了補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)雌性自然衰老大鼠BMD及骨小梁的影響。結(jié)果表明，補(bǔ)陽(yáng)壯骨方可在一定程度上緩解雌性衰老大鼠的BMD下降以及骨小梁的退變。提示補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)防治老年骨質(zhì)疏松有一定作用。

圖1 骨小梁病理切片A.衰老模型組；B.右歸丸組；C.補(bǔ)陽(yáng)壯骨方高劑量組；D.補(bǔ)陽(yáng)壯骨方中劑量組；E.補(bǔ)陽(yáng)壯骨方低劑量組Fig 1 Pathological section of bone trabeculaA.aging model group；B.Youguiwan group；C.Buyang zhuanggu prescription high-dose group；D.Buyang zhuanggu prescription medium-dose group；E.Buyang zhuanggu prescription low-dose group

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)陽(yáng)壯骨方中的主要成分淫羊藿、黃芪可防治因腎上腺皮質(zhì)激素所致的腎陽(yáng)虛等不良反應(yīng)。李青南等[2]進(jìn)行了淫羊藿提取液對(duì)糖皮質(zhì)激素所致骨質(zhì)疏松大鼠的骨形態(tài)計(jì)量學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)淫羊藿提取液能抑制骨吸收，促進(jìn)骨形成。謝華等[3]發(fā)現(xiàn)黃芪水提液可促進(jìn)骨形成、抑制骨吸收，有效防治激素繼發(fā)性骨質(zhì)疏松。補(bǔ)陽(yáng)壯骨方防止雌性自然衰老大鼠BMD降低及緩解骨小梁退變的機(jī)制可能通過(guò)調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸功能，促進(jìn)性激素作用（本課題相關(guān)論文待發(fā)表），同時(shí)調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣平衡來(lái)實(shí)現(xiàn)。為進(jìn)一步闡明其機(jī)制，可研究補(bǔ)陽(yáng)壯骨方對(duì)破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞的影響，目前實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行。

[1]侯 勵(lì)，張榮華，楊 麗，等.益骨膠囊對(duì)骨質(zhì)疏松模型大鼠骨形態(tài)學(xué)及血清TNF-α水平的影響[J].中國(guó)藥房，2005，16（8）：577.

[2]李青南，廖進(jìn)民，吳 鐵，等.淫羊藿提取液防治激素所致大鼠骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，1996，31（8）：467.

[3]謝 華，吳 鐵，黃連芳，等.黃芪水提液對(duì)大鼠的類(lèi)固醇性骨質(zhì)疏松的防治作用[J].中草藥，1997，28（1）：25.

Effect of Buyang Zhuanggu Prescription on Bone Density and Bone Trabecula of Female NaturalAging Rats

LIU Liang-feng，LAI Ping，TANG Li-hai，LIU Dan-dan，CAI Da-ke，YE Mu-rong（Dept.of Pharmacology，School of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

OBJECTIVE：To study the effect of Buyang zhuanggu prescription on the bone density and bone trabecula of female natural aging rats.METHODS：11-month-old female SD rats

normal feeding till 11.5 months old.SD rats were given medicine for 4 months.The effects of Buyang zhuanggu prescription on bone density and bone trabecula of female natrual aging rats were observed.RESULTS：Buyang zhuanggu prescription can prevent the reduction of bone density and the degeneration of bone trabecula structure caused by natural aging at a certain extent.CONCLUSION：Buyang zhuanggu prescription can prevent the reduction of bone density and the degeneration of bone trabecula of female natrual aging rats at a certain extent.

Buyang zhuanggu prescription；Bone density；Bone trabecula；Natural aging

R285；R97

A

1001-0408（2010）39-3671-03

2009-12-05

2010-03-29）