栽培與野生刺五加葉中黃酮及多糖含量的比較研究

徐春玲,張崇禧,蔡恩博,李小葉,李 嬌,韓 雪,鄭友蘭

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院,長春130118;2.山東大學(xué)威海分校海洋學(xué)院,山東威海264209)

栽培與野生刺五加葉中黃酮及多糖含量的比較研究

徐春玲1,張崇禧2,蔡恩博1,李小葉1,李 嬌1,韓 雪1,鄭友蘭1

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院,長春130118;2.山東大學(xué)威海分校海洋學(xué)院,山東威海264209)

目的:測定不同生長環(huán)境及不同采收期刺五加葉中總黃酮及總多糖的含量,對刺五加葉的質(zhì)量進(jìn)行綜合評價。方法:采用比色法測定總黃酮及多糖含量,分別以蘆丁和葡萄糖作為對照品,于500nm波長下測定吸光度,計算黃酮的含量;在620nm波長下測定吸光度,分別計算可溶性多糖和粗多糖的含量。結(jié)果:在0.05mg～0.5mg范圍內(nèi),蘆丁質(zhì)量與吸光度A值線性關(guān)系良好,R2=0.9996;在0.0208mg～0.104mg范圍內(nèi),葡萄糖質(zhì)量與吸光度A值線性關(guān)系良好,R2=0.9996。結(jié)論:栽培與野生刺五加葉中總黃酮與總多糖含量差異均顯著,且栽培明顯高于野生。因此,栽培品可以替代野生刺五加葉資源作藥用,并為其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用及質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

刺五加;總黃酮;可溶性多糖;粗多糖;總多糖

刺五加為五加科植物刺五加[Acanthopanax senticosus(Rup r.etMaxim.Harm s)]的干燥根及根莖[1],莖、葉可作藥用[2]。刺五加見于《神農(nóng)本草經(jīng)》,被列為上品。自古即被視為具有添精補(bǔ)髓及抗衰老作用的良藥。《名醫(yī)別錄》中記載刺五加具有補(bǔ)中,益精,堅筋骨,強(qiáng)意志等功效。刺五加的黃酮類物質(zhì)具有廣泛的藥理活性,對人體腫瘤、衰老、心血管等退行性疾病的治療和預(yù)防具有重要意義[3]。刺五加中的多糖能夠提高海馬神經(jīng)細(xì)胞的抗凋亡能力并下調(diào)P53的基因表達(dá)[4],且可以減少受損海馬神經(jīng)元細(xì)胞中Fas和Fasl蛋白的表達(dá),抑制細(xì)胞的凋亡,并對受損的海馬神經(jīng)元有明顯的保護(hù)作用[5]。

本實(shí)驗(yàn)測定了不同生長環(huán)境和不同采收期的刺五加葉中總黃酮和多糖的含量,并對其進(jìn)行比較,為刺五加葉的質(zhì)量進(jìn)行綜合評價提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

樣品均于2009年采自吉林臨江,經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院胡全德教授鑒定為五加科(Araliaceae)五加屬(Acanthopanax)植物刺五加Acanthop anax sentico su s(Rup r.etMaxim.)Harm s的葉。

1.2 儀器

T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);LA114型電子天平(0.0001 g常熟市百靈天平儀器有限公司);電子恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司);101-2型數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海錦屏儀器儀表有限公司)。

1.3 試劑

蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:086-9303);葡萄糖、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、蒽酮-濃硫酸、乙醇等均為分析純。

2 試驗(yàn)方法

2.1 對照品溶液的制備

2.1.1 蘆丁對照品溶液的制備

將蘆丁對照品置105℃烘箱中恒重6h,精密稱取10.00mg,用80%乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中,搖勻,備用。

2.1.2 葡萄糖對照品溶液的制備

將葡萄糖置60℃烘箱中1h,再逐漸升溫至105℃干燥至恒重。精密稱取10.40mg,置100mL容量瓶中,用蒸餾水溶解并定容至刻度,搖勻,備用。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.2.1 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密量取蘆丁對照品溶液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL,均移入25mL容量瓶中,分別加入80%乙醇至5mL,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2溶液1.0mL,搖勻,靜置6min;加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的Al(NO3)3溶液1.0mL,搖勻,靜置6m in,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的NaOH溶液10mL,再加80%的乙醇至刻度,搖勻,放置15m in。以80%乙醇為空白對照液,均于500nm波長處測定吸光度。以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo),濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程y=0.0468x-0.0128(R2=0.9996),如圖1。結(jié)果表明,蘆丁檢測質(zhì)量在0.05～0.5mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.2 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取16支試管,分5組做三次平行實(shí)驗(yàn),另取一組空白試液,均按表1加試劑,于620nm處測定吸光度,記錄數(shù)據(jù),見表1。以吸光度A為縱坐標(biāo),質(zhì)量mg為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為y=5.0817x+0.0327﹙R2=0.9996﹚,結(jié)果表明,葡萄糖檢測質(zhì)量在0.0208～0.104mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線試液的制備(mL)

2.3 樣品待測液的制備

2.3.1 總黃酮待測液的制備

精密稱取刺五加葉樣品0.5 g(恒重),每個樣品都稱取3份(3次平行),分別置于50 mL具塞錐形瓶中,分別精密加入80%乙醇30 mL,浸泡一夜,密塞超聲提取30 min,重復(fù)3次,合并提取液,搖勻,過濾,轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中定容,再移取供試品溶液1.0 mL于25 mL容量瓶中,分別加入80%乙醇至5 mL,并按“2.2.1”項(xiàng)下的方法依次加入顯色劑,以80%乙醇為空白,同法配制空白對照液,待測。

2.3.2 可溶性多糖待測液的制備

精密稱取刺五加葉樣品0.5 g(恒重),每個樣品都稱取3份(3次平行),分別置于50 mL具塞三角瓶中,加80%乙醇30 mL,浸泡一夜,密塞超聲提取30 m in,重復(fù)3次,過濾(保存濾渣),3次濾液置100 mL容量瓶中,以80%乙醇定容至刻度。再取可溶性多糖提取液5.0 mL,分別置于25 mL容量瓶中,用80%的乙醇定容至刻度,混勻。分別取1.0 mL可溶性多糖提取液加入具塞試管中,加入蒽酮-濃硫酸試劑5.0 mL,混勻,同時另取一支具塞試管加80%乙醇1.0 mL,加入蒽酮-濃硫酸試劑5.0 mL,作為空白實(shí)驗(yàn)。置沸水浴中加熱10 m in,冷卻至室溫,待測。

2.3.3 粗多糖待測液的制備

將取過可溶性多糖后的濾渣蒸干,加2%的鹽酸30 mL,置沸水浴中提取l h,充分放冷,于100 mL容量瓶中濾過,重復(fù)提取2次,過濾,洗滌濾紙,以2%HC1定容至刻度,各取粗多糖提取液2.5 mL,分別置于25 mL容量瓶中,用2%的鹽酸定容至刻度,混勻,分別取1.0 mL粗多糖提取液加入具塞試管中,再加入蒽酮-濃硫酸試劑5.0 mL,混勻,同時另取一支具塞試管加入2%的鹽酸1.0 mL,再加入蒽酮-濃硫酸試劑5.0 mL,混勻,作空白實(shí)驗(yàn)。置沸水浴中加熱10 m in,冷卻至室溫,備用。

3 結(jié)果與分析

3.1 方法學(xué)考察

3.1.1 精密度實(shí)驗(yàn)

分別精密稱取已知總黃酮和總多糖含量的刺五加葉粉末各約0.5 g,按樣品測定操作連續(xù)測5次,測得吸光度并計算含量,R SD分別為0.34%和0.29%(n=5)。

3.1.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取已知總黃酮和總多糖含量的刺五加葉供試品溶液,分別于0,2,4,6,8 h測吸光度,R SD分別為1.14%和1.43%,結(jié)果表明供試品溶液在8h內(nèi)吸光度均基本穩(wěn)定(n=5)。

3.1.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

平行5次稱取已知總黃酮和總多糖含量的刺五加葉樣品,制備供試品溶液,進(jìn)樣測定,R SD分別為1.72%和1.46%(n=5)。

3.1.4 回收率實(shí)驗(yàn)

分別精密稱取已知總黃酮和總多糖含量的刺五加葉樣品粉末各0.5g,5份,置于磨口錐形瓶中,分別加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液2mL和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5mL,按前述樣品處理法提取,并按樣品測定項(xiàng)操作,計算黃酮與多糖的含量和回收率,平均回收率分別為100.32%和100.28%,R SD分別為0.223%和0.230%(n=5)。

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

分別于500nm、620nm、620nm處測定待測樣品中總黃酮、可溶性多糖、粗多糖的吸光度,并計算其含量,結(jié)果見表2。

表2 刺五加葉樣品中黃酮及多糖含量(%)測定結(jié)果

3.3 結(jié)果與分析

表3 栽培與野生刺五加葉化學(xué)成分統(tǒng)計分析

由表3可以看出,T檢驗(yàn)的雙尾漸進(jìn)顯著性概率[Asym P.sig.(2-tailed)]的總黃酮和總多糖均小于0.05,可以認(rèn)為不同生長環(huán)境中刺五加葉中總黃酮和總多糖含量差異顯著,且栽培品含量顯著高于野生品。

4 小結(jié)與討論

由于栽培品含量明顯高于野生,因此,栽培刺五加葉可以替代野生資源應(yīng)用,這對野生刺五加葉資源具有生態(tài)保護(hù)作用。

由表2可知,栽培與野生刺五加葉中總黃酮與總多糖含量均在5月中下旬達(dá)到較高值,此時為植物生長的成熟期,因此活性成分含量最高,而在6月中旬出現(xiàn)較低值,此后直至6月中旬,總黃酮含量逐漸降低,至8月中旬又呈上升趨勢。而總多糖含量從5月至6月中旬呈逐漸下降的趨勢,直至8月中旬又呈上升趨勢。因此,綜合總黃酮和總多糖指標(biāo),確定刺五加葉最佳采收期為5月中下旬。這不僅為刺五加葉的綜合質(zhì)量評價奠定了基礎(chǔ),且為其進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:143-144.

[2]王宗權(quán),王振月,陳立超,等.刺五加不同采收年限、不同產(chǎn)地及不同加工方法的研究[J].中藥研究與信息,2005,7(9):13-15.

[3]張旭東,馬杰,張彬.刺五加藥理作用的研究概況[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報,2007,22(3):45-46.

[4]刁波,唐瑛,李德忠,等.刺五加多糖對H2O2誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元凋亡及凋亡基因的影響[J].廣東醫(yī)學(xué), 2009,30(1):35-36.

[5]刁波,唐瑛,李德忠,等.刺五加多糖對H2O2損傷的海馬神經(jīng)元表達(dá)Fas和Fasl的影響[J].中國臨床神經(jīng)外科雜志,2010,15(7):416-418.

易格斯推出新型耐扭轉(zhuǎn)光纜

易格斯推出新型耐扭轉(zhuǎn)光纜適用于三維運(yùn)動拖鏈,在扭轉(zhuǎn)運(yùn)動的拖鏈中,總線系統(tǒng)經(jīng)常會出現(xiàn)故障,特別是對于帶屏蔽數(shù)據(jù)電纜,其屏蔽層很容易損壞或裂開。但光纜卻不會出現(xiàn)這些問題:它們沒有容易機(jī)械損壞的屏蔽層,不受電磁干擾,同時可以高速傳輸總線信號,長度甚至可以達(dá)到400 m。

經(jīng)過嚴(yán)格的測試,現(xiàn)在德國易格斯公司推出了一款新型耐扭轉(zhuǎn)光纜,適用于所有三維運(yùn)動拖鏈,確?？偩€系統(tǒng)安全可靠的工作。耐扭轉(zhuǎn)TPE光纜(Chainflex CF Robot-LWL)使高數(shù)據(jù)傳輸率成為可能,并可以直接搭配高功率動力電纜排線。這款特殊設(shè)計的光纜采用了扭轉(zhuǎn)優(yōu)化補(bǔ)償原理,同時光纜的機(jī)械性能也非常堅固,例如在機(jī)器手臂上,甚至可以扭轉(zhuǎn)+180°。

在易格斯技術(shù)中心的測試中,這款新型光纜已經(jīng)安全運(yùn)行了一百多萬個往返循環(huán)。即使在360°扭轉(zhuǎn)角度的情況下,此款光纜也一直保持著極佳的數(shù)據(jù)傳輸率。這款光纜帶有兩根光纜芯線,耐油和生物油,耐UV輻射,以及在低溫也保持高的柔性。光纜芯線具有高強(qiáng)度,減震層緊緊包裹在GRP芯線之外。強(qiáng)力擠壓成型外護(hù)套由不含鹵素的TPE材料制成。這款光纜可用于持續(xù)高動態(tài)運(yùn)動,適應(yīng)于室內(nèi)或室外使用,耐溫范圍從-20°C到+60°C。

“Chainflex CF Robot-LWL”光纜的光纖直徑為50/125μm,在采用恰當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)換器后,幾乎適用于所有高速總線應(yīng)用。這些領(lǐng)域非常寬,例如用于機(jī)器人的拖鏈,或機(jī)器搬運(yùn)。在這些應(yīng)用中,視覺科技扮演著非常重要的角色。這款新型光纜是工業(yè)領(lǐng)域圖像傳輸應(yīng)用(GigE,FireWire IEEE1394a/b和USB)的一個理想解決方案。這滿足了運(yùn)動質(zhì)量監(jiān)視器的需要,其需求正越來越多。

(吳偉)

The Com para tive Study of the Tota l Flavono id and Polysaccharides in Acan thopanax between W ild and Biom imetic Sam ples

XU Chun-ling1,ZHANG Chong-xi2,CAIEn-bo1, L IXiao-ye1,L IJiao1,HAN Xue1,ZHENG You-lan1
(1.College of Ch inese MedicinalMaterial,Jilin AgriculturalUniversity,ChangChun 130118, China;2.Marine College,Shandong University atWeihai,Weihai264209,China)

Object:To determine the contentof totalflavonoid and polysaccharides in the leavesofacanthop anax wh ich collected in different times.Provides the reference data for the fo rmulation of acanthopanax's quality standard.Methods:The contentof totalflavonoid and polysaccharides in acanthopanax were determ ined by Colorimetry,rutin and glucose were standard p reparation,and wave length were 500nm and 620nm.Results:The mass of rutin(mg)and absorbance were linear in the range of0.05mg～0.5mg,R2=0.9996.and the mass of glucose(mg)and absorbance were linear in the range of 0.0208mg～0.104mg,R2=0.9996. Conclusions:The differences of the totalflavonoid and totalpolysacharides ofwild and biom imetic samp les are obvious when texted by ttest.and the biom imetic are higher.So itapp ly to reference for the quality of acanthopanax senticosus ofwild and biomimetic,and lay the foundation for further developmentand app lication.

acanthopanax senticosus;total flavonoid;solubility polysaccharides;crude polysaccharides; totalpolysaccharides

book=5,ebook=221

TQ461

A

1005-1295(2010)06-0005-04

2010-08-28;

2010-10-12

國家科技部資助攻關(guān)項(xiàng)目(2005BA741C)

徐春玲(1985-),女,在讀碩士,主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)成分研究。

鄭友蘭(1954-),女,教授,主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)成分研究。通訊地址:130118吉林長春吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院,E-mail:zcx_11@126.com。

do i:10.3969/j.issn.1005-1295.2010.06.002