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    免疫透射比濁法對(duì)ASO及RF試劑的應(yīng)用性能評(píng)價(jià)

    2010-09-05 02:09:42蔡玉玲
    海南醫(yī)學(xué) 2010年22期
    關(guān)鍵詞:羅氏精密度分析儀

    鐘 蘭,蔡玉玲

    (海南省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)部,海南 ???570311)

    為了解該試劑的質(zhì)量是否達(dá)標(biāo)、與羅氏診斷試劑比較如何,我們對(duì)德賽診斷系統(tǒng)(DiaSys)公司生產(chǎn)的ASO和RF液體雙試劑進(jìn)行了應(yīng)用性能評(píng)價(jià)。

    1 材料與方法

    1.1 儀器 OLYMPUS AU5400全自動(dòng)生化分析儀,COBASC 501模塊化生化分析儀。

    1.2 標(biāo)本 均收集海南省人民醫(yī)院門(mén)診體檢40例病人新鮮血清,男27例,女13例,年齡12-67歲。

    1.3 試劑 德賽診斷系統(tǒng)公司的ASO和RF定量試劑盒,試劑批號(hào)分別為60060322、60063016;羅氏診斷公司生產(chǎn)的ASO和RF定量試劑盒,試劑批號(hào)分別為627428-01、623168-01;特定蛋白校準(zhǔn)品批號(hào)分別為 DiaSys(60061186)、羅氏(155449-01)。

    1.4 檢測(cè)系統(tǒng)和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 使用COBAS C 501模塊化生化分析儀、羅氏診斷相關(guān)試劑和配套校準(zhǔn)品組成的檢測(cè)系統(tǒng);使用OLYMPUSAU5400全自動(dòng)生化分析儀、德賽診斷系統(tǒng)公司相關(guān)試劑和配套校準(zhǔn)品組成的實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)。

    1.5 評(píng)估方法 測(cè)定過(guò)程及參數(shù)設(shè)置均按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS10.0 for Windows軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

    1.5.1 精密度評(píng)估 批內(nèi)精密度:各取高、中、低值3個(gè)不同水平的ASO和RF樣品。在校準(zhǔn)的當(dāng)天每隔1 h測(cè)定一次,共20次,計(jì)算出均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。批間精密度:?jiǎn)未涡?zhǔn)后,每天一次測(cè)定高、中、低值3個(gè)不同水平的ASO和RF樣品,共20 d,計(jì)算出均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

    1.5.2 線性分析 參照NCCLS文件EP6-P[1]各取一低值標(biāo)本(ASO 25 IU/ml、RF 1.4 IU/ml)、高值標(biāo)本(ASO 288.0 IU/ml、RF 296.9 IU/ml)等量混勻后制備中值標(biāo)本(ASO 156.5 IU/ml、RF 149.1 IU/ml)中值標(biāo)本再分別和低、高值標(biāo)本等量混勻,各制備產(chǎn)生兩個(gè)水平標(biāo)本(ASO 90.7 IU/ml、222.2 IU/ml;RF 75.2 IU/ml、223.0 IU/ml)。5個(gè)不同水平標(biāo)本分別(ASO:25 IU/ml、90.7 IU/ml、156.5 IU/ml、222.2 IU/ml、288.0 IU/m;RF:1.4 IU/m、75.2 IU/m、149.1 IU/m、223 IU/m、288.0 IU/m)測(cè)定4次,參照NCCLS文件EP6-P[1]進(jìn)行線性分析。

    1.5.3 準(zhǔn)確度評(píng)估 參照NCCLS文件EP9-A[2]使用病人新鮮血清對(duì)比實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)及檢測(cè)系統(tǒng),評(píng)估實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)的準(zhǔn)確性。按照生產(chǎn)廠商提供的測(cè)定試劑盒(校準(zhǔn)品)、測(cè)定參數(shù)和測(cè)定方法在OLYMPUS AU5400全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行校準(zhǔn),與羅氏診斷公司的同類試劑進(jìn)行比對(duì),觀察結(jié)果相關(guān)程度。(1)將40個(gè)病人樣本分5 d進(jìn)行測(cè)定,每天測(cè)定8個(gè)樣本,每個(gè)樣本進(jìn)行平行管測(cè)定。做雙份第2次測(cè)定時(shí),標(biāo)本順序全部倒過(guò)來(lái)。兩種方法都按此實(shí)驗(yàn)。采集標(biāo)本2 h內(nèi)兩臺(tái)儀器對(duì)同批標(biāo)本分別開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。(2)根據(jù)EP9-A[2]要求評(píng)估篩選數(shù)據(jù)(篩除離群點(diǎn))。(3)對(duì)實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)及比較方法系統(tǒng)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。

    1.5.4 干擾實(shí)驗(yàn) 混合血清分成兩份,一份加入1/10體積的含膽紅素684 μmol/L的高總膽紅素血清(ASO和RF分別為9 IU/ml和5 IU/ml),一份不加,然后將兩標(biāo)本按4:0、3:1、2:2、1:3、0:4比例混合成5個(gè)不同濃度的液體,每份標(biāo)本重復(fù)測(cè)定10次,計(jì)算平均干擾值。用同樣方法加入含血紅蛋白為5 g/L的溶血物和甘油三酯為22.6 mmol/L的脂肪乳,重復(fù)測(cè)定10次,并計(jì)算各自的干擾值。干擾值=各組均值-未加干擾物相應(yīng)的均值。按NCCLS EP07-A文件進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)。

    1.5.5 試劑的穩(wěn)定性 將開(kāi)啟的ASO和RF(R1、R2)工作試劑置于2℃-8℃AU5400全自動(dòng)生化分析儀試劑箱中,每2 d在AU5400上各測(cè)定空白吸光度和200 IU/ml ASO、125 IU/ml RF的標(biāo)準(zhǔn)品吸光度,連續(xù)測(cè)定15次,觀察吸光度的變化。

    2 結(jié)果

    2.1 精密度 免疫透射比濁法在全自動(dòng)生化分析儀中定量測(cè)定血清ASO和RF都有良好的精密度(批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于5%)。見(jiàn)表1、表2。

    表1 免疫透射比濁法測(cè)定血清ASO和RF的批內(nèi)精密度

    表2 免疫透射比濁法測(cè)定血清ASO和RF的批間精密度

    2.2 線性分析 評(píng)價(jià)線性至少需要5個(gè)不同稀釋度的分析物和做至少兩次重復(fù)的測(cè)量。ASO測(cè)定的線性回歸分析方程為:y=0.9741x+0.020,r=0.995;RF的線性回歸分析方程為y=0.9741x+0.020,r=0.987。表明ASO在288.0 IU/ml濃度、RF在296.9 IU/ml濃度以內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.3 準(zhǔn)確性 使用DiaSys試劑為主的實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)與使用羅氏診斷試劑為主的檢測(cè)系統(tǒng)分別對(duì)40份無(wú)明顯溶血、黃疸或脂血的新鮮血清樣品進(jìn)行兩項(xiàng)目測(cè)定,結(jié)果兩法ASO的r2=0.95(y=1.25x-33),兩法RF的r2=0.94(y=0.77x-5.43),說(shuō)明Diasy試劑為主的實(shí)驗(yàn)方法系統(tǒng)與羅氏診斷試劑為主的檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)果相關(guān)性較好,即相關(guān)度較高。

    2.4 干擾試驗(yàn) 當(dāng)樣品中膽紅素≤684 μmol/L、血紅蛋白濃度≤5 g/L、甘油三酯濃度≤22.6 mmol/L時(shí),ASO和RF結(jié)果未受到干擾。

    2.5 試劑的穩(wěn)定性 經(jīng)以上“1.5.5”項(xiàng)試驗(yàn)觀察,30 d內(nèi)試劑空白吸光度和標(biāo)準(zhǔn)品吸光度保持不變,ASO的試劑空白吸光度為0.0003,標(biāo)準(zhǔn)品吸光度為0.1947;RF的試劑空白吸光度為0.0002,標(biāo)準(zhǔn)品吸光度為0.0608。

    3 討論

    ASO是實(shí)驗(yàn)室常用的項(xiàng)目,ASO可為鏈球菌感染診斷和監(jiān)控下列疾病提供有用的信息:扁桃體炎、耳炎、丹毒、猩紅熱、風(fēng)濕熱、腎小球腎炎[3]。ASO可在感染后1-3周檢測(cè)出來(lái),且在3-6周達(dá)到峰值。RF是一類自身抗體,包括所有類型的免疫球蛋白,它們是抗菌素變性或聚合IgG分子FC片段的抗體,診斷所檢測(cè)的RF主要是IgM類RF,用來(lái)檢出各種類風(fēng)濕疾病,檢測(cè)RF可為鑒別診斷風(fēng)濕疾病提供重要的信息。

    免疫透射比濁法在全自動(dòng)生化分析儀中定量測(cè)定血清ASO和RF都有良好的精密度(批內(nèi)、批間變異系數(shù)均小于5%);定量檢測(cè)具有滿意的線性響應(yīng)(ASO r=0.995,RF r=0.987),線性驗(yàn)證顯示 ASO(25-288 IU/ml)、RF(1.4-296.9 IU/ml)中線性良好。DiaSys公司生產(chǎn)的ASO、RF試劑與羅氏診斷同類試劑相關(guān)性較好,相關(guān)系數(shù)r2分別為0.95和0.94。當(dāng)樣品中膽紅素≤684 μmol/L、血紅蛋白濃度≤5 g/L、甘油三酯濃度≤22.6 mmol/L時(shí),ASO和RF結(jié)果未受到干擾;試劑保存時(shí)間長(zhǎng)。綜上結(jié)果,采用免疫透射比濁法在全自動(dòng)生化分析儀中定量測(cè)定血清ASO及RF所用的德賽診斷系統(tǒng)公司生產(chǎn)的試劑穩(wěn)定,線性范圍寬,抗干擾能力強(qiáng),具有良好的精密度與準(zhǔn)確性,應(yīng)用性能良好,評(píng)估合格。

    [1]NCCLS.EP6-A:Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:A statistical approach;Approved guideline.Wayne PA.2003:NCCLS.

    [2]NCCLS.EP9-A2:Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline—Second Edition Wayne PA.2002:NCCLS.

    [3]Steven DL.lnvasive Group A streptococcus infections[J].Clin lnfect Dis,1992,14:2-11.

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